Procedimientos y kits para la detección e identificación de micobacterias.

Procedimiento de identificación de uno o más tipos de micobacterias en una muestra,

que comprende:

(a) proporcionar:

(i) una muestra que se sospecha que comprende una o más micobacterias e

(ii) reactivos de detección que comprenden al menos un par de cebadores configurados para hibridarse con regiones de ácido nucleico de micobacteria conservadas entre dos o más tipos de micobacterias y en el que dichos cebadores están configurados para amplificar una región variable de ácido nucleico de micobacteria y al menos dos conjuntos de sondas distinguibles de forma detectable de una sonda de señalización y una sonda de desactivación asociada que se hibridan a secuencias de ácido nucleico adyacentes en el ácido nucleico de micobacterias amplificado,

emitiendo la sonda de señalización una señal fluorescente cuando se hibrida con una secuencia diana de ácido nucleico monocatenario, señal que es desactivable por la sonda de desactivación asociada, y la sonda de señalización no emite fluorescencia por encima del fondo cuando no se hibrida con su secuencia diana, comprendiendo la sonda de desactivación un desactivador no fluorescente, de modo que cuando las sondas de señalización y de desactivación se hibridan con las secuencias de ácido nucleico adyacentes, el desactivador no fluorescente de la sonda de desactivación desactiva la señal fluorescente de la sonda de señalización asociada, formando parte al menos una sonda de ambos de los dos conjuntos de sondas, siendo dicha sonda: una sonda de desactivación marcada con un desactivador en cada extremo, interactuando los extremos con diferentes sondas de señalización o

teniendo un fluoróforo en un extremo y un desactivador en el otro extremo, interactuando el fluoróforo con una sonda de desactivación e interactuando el desactivador con una sonda de señalización;

b) amplificar el ácido nucleico de dicha una o más micobacterias con dichos cebadores;

c) detectar la fluorescencia de dicho fluoróforo emisor de fluorescencia desde cada conjunto de sondas distinguibles de forma detectable a un intervalo de temperaturas;

d) generar distintivos de fluorescencia dependientes de la temperatura para cada fluoróforo emisor de fluorescencia; y

e) analizar dichos distintivos de fluorescencia dependientes de la temperatura para identificar una o más micobacterias en dicha muestra.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/060224.

Solicitante: BRANDEIS UNIVERSITY.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 415 South Street Waltham, MA 02453-2728 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: WANGH, LAWRENCE J., RICE,JOHN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2606145_T3.pdf

 

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