Kit para la detección e identificación de micobacterias.

Un kit de reactivos para identificar uno o más tipos de micobacterias en una muestra que comprende:

(a) al menos un par de cebadores configurados para unirse a regiones de ácido nucleico de micobacterias conservado entre dos o más tipos de micobacterias y en el que dichos cebadores están configurados para amplificar una región variable de ácido nucleico de micobacterias, en el que dichos cebadores se seleccionan entre el grupo que consiste en:

(i) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 51 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 52;

(ii) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 57 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 58;

(iii) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 28 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 29;

(iv) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 67 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 68;

(v) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 71 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 72;

(vi) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 45 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 46;

(vii) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 73 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 74; y

(viii) un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 39 y un cebador que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 40; y

(b) al menos dos conjuntos de sondas detectables de manera distinguible de una sonda de señalización y una sonda inactivadora asociada que hibridan con secuencias de ácido nucleico adyacentes en el ácido nucleico de micobacterias amplificado y

formando parte al menos una sonda de los dos conjuntos de sondas, en el que dicha sonda:

es una sonda inactivadora marcada con un inactivador en cada extremo, interactuando los extremos con diferentes sondas de señalización, o tiene un fluoróforo en un extremo y un inactivador en el otro extremo, interactuando el fluoróforo con una sonda inactivadora, interactuando el inactivador con una sonda de señalización, en el que cada conjunto de sondas detectables de manera distinguible comprende dos sondas de hibridación que hibridan con secuencias de ácido nucleico diana adyacentes dentro de la región variable del ácido nucleico de micobacterias, comprendiendo: (i) una sonda inactivadora marcada con un inactivador no fluorescente y (ii) una sonda de señalización marcada con un colorante emisor de fluorescencia y un inactivador no fluorescente, en el que la sonda de señal no emite fluorescencia por encima del fondo cuando no está hibridada a su secuencia diana pero emite una señal de fluorescencia por encima del fondo tras su hibridación a su secuencia diana en ausencia de sonda inactivadora unida, en el que, en caso de que se hibriden ambas sondas inactivadoras a sus secuencias de ácido nucleico diana adyacentes, el inactivador no fluorescente de la sonda inactivadora inactiva la señal de la sonda de señalización