EXPRESION DE LA FOSFATASA ALCALINA EN LEVADURA.
Procedimiento para la obtención de una fosfatasa alcalina eucariota en células de levadura que consta de los pasos siguientes:
a) clonación de una secuencia genética en diversos vectores, b) transformación de la levadura, c) expresión y d) purificación de la fosfatasa alcalina, caracterizado porque - un primer vector presenta un gen de resistencia contra un primer marcador de selección, - se seleccionan los transformantes, que han integrado el gen de resistencia y la secuencia genética en el genoma, mediante el cultivo en un medio nutritivo que tiene una baja concentración del primer marcador de selección, - se aumenta el número de copias del gen por transformación múltiple, seleccionándose los transformantes múltiples por cultivo en un medio nutritivo de mayor presión de selección, - se añade un segundo vector que, además de la secuencia genética, contiene un gen de resistencia contra un segundo marcador de selección, - se aumenta el número de copias del gen por transformación múltiple conel segundo vector, seleccionándose los transformantes múltiples por cultivo en un medio nutritivo de mayor presión de selección y - se seleccionan los clones que han integrado de forma estable en su genoma las múltiples copias de la secuencia genética y de los genes de resistencia al marcador de selección.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: ROCHE DIAGNOSTICS GMBH
F.HOFFMANN-LA ROCHE AG.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: SANDHOFER STRASSE 116,68305 MANNHEIM.
Inventor/es: MUELLER,RAINER, THALHOFER,JOHANN-PETER, GEIPEL,FRANK, GLASER,STEPHAN, HOELKE,WERNER, KIRSCHBAUM,THOMAS, ECKSTEIN,HELLMUT, BOMMARIUS,BETTINA,DR.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 21 de Julio de 2001.
Fecha Concesión Europea: 14 de Marzo de 2007.
Clasificación PCT:
- C12N1/19 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
- C12N15/09 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N15/53 C12N 15/00 […] › Oxidorreductasas (1).
- C12N15/55 C12N 15/00 […] › Hidrolasas (3).
- C12N15/69 C12N 15/00 […] › Aumento del número de copias del vector.
- C12N15/81 C12N 15/00 […] › para levaduras.
- C12N9/16 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › actúan sobre los enlaces éster (3.1).
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
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