Composición de estabilizador químicamente definida.

Método para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar una composición de estabilizadorcon una composición que comprende al menos un microorganismo,

en el que dicha composición de estabilizadorcomprende al menos un aminoácido, al menos un azúcar y al menos una poliamina, caracterizado por que todoslos compuestos de dicha composición de estabilizador están definidos químicamente y en el que dicha poliamina esal menos una seleccionada entre el grupo que consiste en cadaverina, putrescina, espermidina y espermina y en elque dicho microorganismo es un virus.

Composición de estabilizador químicamente definida

La presente invención se refiere a una composición de estabilizador que comprende un aminoácido y un azúcar en la que todos los compuestos están definidos químicamente; a una composición de vacuna que comprende una composición de estabilizador de este tipo y una molécula biológica y/o un microorganismo; a un método para preparar una composición farmacéutica que comprende mezclar una composición de estabilizador de este tipo con una molécula biológica y/o un microorganismo; al uso de una composición de estabilizador de este tipo y a vacunas preparadas con la misma.

En la industria biofarmacéutica implicada en la producción de microorganismos y moléculas biológicas como productos, la estabilidad de estos productos es una cuestión importante. Casi siempre, estos productos necesitan formularse, almacenarse y transportarse. Inevitablemente debido a las influencias experimentadas a lo largo del

tiempo de cambios de temperatura y otras influencias físicas o químicas, los materiales producidos pierden su cantidad eficaz original o propiedades cualitativas deseadas. Por consiguiente, se aplican condiciones y aditivos para prevenir una pérdida de calidad y/o de cantidad eficaz de este tipo.

Las condiciones estabilizantes más usadas son almacenamiento a temperatura reducida, por encima o por debajo de cero ºC, introducción de contenido de agua; y la liofilización es especialmente útil.

En la liofilización una muestra que contiene una molécula, un microorganismo, una célula o un tejido biológicamente

o farmacéuticamente activo se congela en primer lugar y después se seca al vacío. Las muestras liofilizadas después se pueden almacenar a por ejemplo 4 ºC y con frecuencia permanecen estables durante años. Véase para

revisiones: M. Pikal, 1990 (BioPharm, vol. 3, Nº 8, pág. 18-27 y Nº 9, pág. 26-30) ; L Gatlin, et al., 1994 (Bioprocess Techn., vol. 18, pág. 317-367) ; J. Carpenter et al., 1997 (Pharm. Research, vol. 14, pág. 969-975) ; F. Bedu-Addo, 2004 (Pharm. Techn., 1 de Febrero, pág. 10-18) .

De forma ideal, un producto liofilizado tiene una calidad y cantidad del componente o componentes liofilizados que no cambia casi a lo largo de un periodo de tiempo determinado, así como también un cuerpo o torta liofilizado de aspecto atractivo y elegante, que puede resistir influencias físicas de transporte y que se disuelve rápidamente tras la reconstitución en un diluyente.

Para conseguir todos estos requerimientos para una muestra liofilizada y para hacer que la muestra “sobreviva” las

diversas condiciones desfavorables que se producen durante el propio proceso de liofilización (congelamiento, secado, calentamiento, enfriamiento) , el almacenamiento prolongado en estado liofilizado y la reconstitución, la muestra que se tiene que liofilizar habitualmente se mezcla con una composición de estabilizador antes de la liofilización.

Los compuestos de una composición de estabilizador se denominan comúnmente: agente de volumen, formador de torta, lioprotector, modificador de tonicidad, tensioactivo, protector criogénico, protector de congelación, desecante, agente de liofilización, etc., en los que un compuesto específico puede tener varias funciones.

El término “soluto compatible” también se usa para indicar un compuesto que estabiliza moléculas y organismos en

45 condiciones de un entorno bajo en agua (M. S. da Costa et al. 1998, Adv. Bioch. Eng and Techn., vol. 61, pág. 117 153) .

Las composiciones estabilizantes, para liofilización o para otros usos de estabilización, son mezclas complejas de proteínas, carbohidratos, lípidos y sales; cuya composición se puede adaptar para cada molécula o microorganismo que se tiene que estabilizar o para un fin específico.

Aunque rara vez se conoce cómo funciona exactamente un estabilizador, el hallazgo común es que compuestos grandes de peso molecular elevado generalmente proporcionan buenos efectos estabilizantes. Por lo tanto, de los principales ingredientes usados en estabilizadores fueron tales compuestos voluminosos. Para mantener los costes

55 de material bajos los mismos se tomaron a partir de productos fácilmente disponibles de origen animal, por ejemplo: leche en polvo, triptosa, gelatina, albúmina sérica, colágeno, hidrolizado de caseína, condroitín sulfato, etc.

Desafortunadamente, el uso de tales compuestos de origen animal introduce potencialmente el riesgo de contaminación con agentes extraños de un producto de otra manera estéril o controlado. Esta ha sido una preocupación principal desde el descubrimiento de enfermedades zoonóticas intraespecies y las enfermedades relacionadas con prión recientemente descubiertas. Como resultado, las autoridades reguladoras han exigido un ensayo de seguridad exhaustivo de productos biológicos (estabilizados) para determinar la ausencia de agentes extraños antes de su comercialización.

65 Esto ha conducido al abandono del uso de tales componentes animales, inicialmente únicamente en el medio de cultivo usado en la producción de las moléculas biológicas o microorganismos. Por ejemplo, B. Makoschey et al.

(2002, Cytotechnology vol. 39, pág. 139-145) , describen un estabilizador de liofilización para su uso en virus estabilizantes que se había producido sin suero; el estabilizador comprendía azúcares, aminoácidos, gelatina y péptidos a partir de un hidrolizado de proteína de origen animal.

Más tarde, también los estabilizadores que se usan posteriormente después de la producción, se modificaron en su composición; como resultado, se desarrollaron composiciones de estabilizador que son: sin suero (sin suero animal) ; sin proteína (sin proteína animal, pero puede contener otros componentes obtenidos de animales) o incluso sin compuesto animal (ACF) (que no contiene ningún componente obtenido de un animal) .

El documento US3915794 divulga composiciones estabilizantes que comprenden virus, polivinilpirrolidona, sacarosa, glutamato y edetato de sodio.

Sin embargo, en las composiciones de estabilizador, permanecía la necesidad de moléculas grandes de peso molecular elevado para su efecto estabilizante. Por lo tanto, se obtuvieron compuestos voluminosos para

estabilizadores ACF por ejemplo a partir de origen vegetal o microbiano, tales como: yeastolato, peptona de soja, gelatina recombinante, (hidroxi-etil-) almidón, alginato, etc.

Como alternativa, se emplean compuestos poliméricos grandes de origen natural o sintético tales como: polisacáridos, polivinilpirrolidona, ficol, polilisina, polietilenglicol, (carboxi) metil-celulosa, dextrano, polisorbato (por ejemplo, Tween® 80) , etc. Por ejemplo T. Osterberg et al. (1997, Pharm. Res., vol. 14, pág. 892-898) , reemplazaron albúmina sérica por Tween® 80 como compuesto estabilizante para proteína de Factor VIII.

Sin embargo, existen varios problemas incluso con estos compuestos de estabilizador ACF. Por ejemplo, varios de estos compuestos estabilizantes no son resistentes a esterilización por calor y debido a que la esterilidad de la

composición de estabilizador es con frecuencia un requerimiento absoluto, la única manera de conseguir esto es entonces mediante el proceso más tedioso de esterilización con filtro.

También, en el caso de que el producto estabilizado se tenga que administrar a un ser humano o animal diana, algunos de los compuestos de estabilizador ACF no se pueden usar ya que los mismos son tóxicos o pueden causar reacciones alérgicas.

Sin embargo el problema más importante en todos estos casos es que las composiciones de estabilizador, incluso cuando son ACF, aún comparten la desventaja común de que los mismos contienen o consisten en constituyentes desconocidos, heterogéneos y poco definidos. Por ejemplo a la composición de los hidrolizados de productos

vegetales naturales no se conoce para nada. De forma similar, para las estructuras poliméricas mencionadas, su estructura química se conoce únicamente en términos generales; los compuestos usados están definidos únicamente en el sentido en que los mismos tienen un peso molecular promedio o una longitud promedio de las cadenas laterales. Estas moléculas por lo tanto comprenden realmente una familia... [Seguir leyendo]

1. Método para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar una composición de estabilizador con una composición que comprende al menos un microorganismo, en el que dicha composición de estabilizador

comprende al menos un aminoácido, al menos un azúcar y al menos una poliamina, caracterizado por que todos los compuestos de dicha composición de estabilizador están definidos químicamente y en el que dicha poliamina es al menos una seleccionada entre el grupo que consiste en cadaverina, putrescina, espermidina y espermina y en el que dicho microorganismo es un virus.

2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que en la composición de estabilizador el azúcar es al menos uno seleccionado entre el grupo que consiste en glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa, trehalosa, sorbitol y manitol.

3. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que en la composición de estabilizador

el aminoácido es glutamato o glicina o en la que están comprendidos ambos de estos aminoácidos. 15

4. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el virus es al menos una especie viral seleccionada entre el grupo que consiste en herpes-, paramixo-, ortomixo-, adeno-, rabdo-, birna-, corona-, neumo-y poxvirus.

5. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el microorganismo se produjo sin componente animal.

6. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la composición farmacéutica

resultante se somete a liofilización. 25

7. Composición farmacéutica que se puede obtener mediante el método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que dicha composición es una composición de vacuna.