Un cultivo biológicamente puro de una cepa Mia de Streptococcus salivarius en depósito en Deutsche Sammlung von Mikroorganismen Und Zellkulturen GmbH,

Mascheroder Weg 1 b, D-38124, Braunschweig, Alemania, número de acceso DSM 14685

Composición antimicrobiana.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a una nueva cepa Mia de Streptococcus salivarius, a composiciones que la contienen, y al uso de la cepa Mia de Streptococcus salivarius como un agente antimicrobiano, particularmente en la prevención o tratamiento de caries dentaria.

Antecedentes

La caries dentaria es una enfermedad caracterizada por la disolución de la porción mineral del diente. A medida que la caries progresa, se produce la destrucción del esmalte y dentina del diente, seguido de la inflamación de la pulpa y de los tejidos periapicales.

Los estreptococos mutantes (MS) son un racimo de especies estreptocócicas acidogénicas, que habitan la placa dentaria, que se consideran los agentes patógenos principales de la caries. Actualmente, se reconocen siete especies de MS diferentes (conocidas como S. mutans, S. rattus, S. cricetus. S. sobrinus, S. ferus, S. macacae, y S. downei). De estas siete especies, principalmente las que tienen importancia son S. mutans y S. sobrinus en términos de caries humana.

A lo largo de los años se han desarrollado e intentado diversos métodos, con resultados variables, para prevenir o al menos aliviar el problema de la caries dentaria. Se han sugerido tratamientos con antibióticos, tales como penicilina, y son eficaces, pero destruyen indiscriminadamente tanto las bacterias útiles como las dañinas en la boca, conduciendo a desequilibrios microbianos.

A fin de minimizar la destrucción de la microflora bucal, se han investigado organismos productores de antibióticos en busca de su capacidad para inhibir la caries. Un grupo de organismos identificados como potenciales a este respecto son los microorganismos productores de sustancias inhibidoras similares a bacteriocina (BLIS). Se han identificado productores de BLIS de los géneros Streptococcus, Staphylococcus y Enterococcus en busca de la aplicación potencial para la prevención de la caries dentaria (Balakrishnan, M. et al., Caries Res. 2001; 35:75-80).

Lo que se busca es un análogo no virulento de la S. mutans que provoca la enfermedad, o una cepa denominada efectora. Para servir como cepa efectora en terapia de sustitución en infección bacteriana, el microorganismo debe ser no virulento por sí mismo, y debe ser capaz de competir con éxito con el microorganismo patógeno vía acción competitiva y/o acción antibiótica. Se han identificado cepas efectoras de S. mutans (Hillman et al., J Dent Res. 1987; 66:1092-4; James y Tagg, N Z Dent J. 1991; 87:80-3), y muestran una fuerte actividad anti-S. mutans. Una desventaja del uso de las cepas efectoras de S. mutans es el potencial cariogénico de estas cepas.

S. salivarius es una especie estreptocócica alternativa que evita esta desventaja. En el documento WO 01/27143 se identifican cepas de S. salivarius que tienen utilidad en el tratamiento de caries dentaria provocada al menos en parte por S. sobrinus. No se registró ninguna actividad frente a MS generalmente, o frente a S. mutans en particular. De forma similar, en Balakrishnan (más arriba), se identificó S. salivarius K3 como activo frente a S. sobrinus cuando se hacen crecer en medio de agar con caldo de tripticasa de soja más extracto de levadura y carbonato de calcio, pero no tuvo ningún efecto sobre S. mutans.

TOVE-R de S. salivarius (Tanzer, J.M. et al.; Infect Immun., 1985, 48:44-50) es una cepa antagonista, que provocó una reducción de la caries dentaria. No ha habido informes de producción de BLIS por esta cepa.

El documento WO 01/27143 (Universidad de Otago) se refiere a una proteína antibacteriana que se puede aislar de la cepa K12 de S. salivarius, en depósito en Deutsche Sammlung von Mikroorganismen Und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, número de acceso DSM 13084.

Se ha repasado el uso de sustancias inhibidoras similares a bacteriocina (BLIS) para la eliminación de estreptococos mutantes de la placa (James y Tagg (1991) New Zealand Dental Journal 87:80-83).

A partir del estudio de un gran número de cepas bacterianas de los géneros streptoccocus, enterococcus y staphylococcus, se ha sugerido que hay una diversidad en el intervalo de acción inhibidora frente a estreptococos mutantes y otras especies estreptocócicas orales por las sustancias inhibidoras similares a bacteriocina (Balakrishnan et al. (2001) Caries Res 35-75-80).

El documento US-A-3.925.160 se refiere a un procedimiento para producir una sustancia antibiótica cultivando la cepa K58 de Streptococcus salivarius.

Kurasz et al, (1986; J Dent Res 65(9):1149-1153) han investigado el crecimiento y competición entre TOVE-R de S. salivarius y los estreptococos mutantes.

Se ha estudiado la capacidad de la cepa TOVE-R de Streptococcus salivarius para inhibir la aparición ecológica de representantes virulentos de los estreptococos mutantes humanos más predominantes en los dientes de ratas libres de patógenos específicos (Tanzer et al. (1985) Infection and Immunity 49:76-83; y Tanzer et al. (1985) Infection and Immunity 48:44-50).

Los Solicitantes han identificado ahora cepas de S. salivarius productoras de BLIS con un amplio espectro de actividad frente a organismos que provocan la caries dentaria por MS, incluyendo S. mutans.

La presente invención se refiere de forma amplia a estas nuevas cepas de S. salivarius, y al uso de cepas de S. salivarius anti-MS en el tratamiento de la caries dentaria, o al menos proporciona al público una elección útil.

Sumario de la invención

En consecuencia, en un aspecto, se puede afirmar de forma amplia que la presente invención consiste en un cultivo biológicamente puro de una cepa Mia de Streptococcus salivarius en depósito en Deutsche Sammlung von Mikroorganismen Und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1 b, D-38124, Braunschweig, Alemania, número de acceso DSM 14685.

De este modo, la invención proporciona un cultivo biológicamente puro de una cepa Mia de Streptococcus salivarius que es una productora de Salivaricina A₂ y muestra actividad anti-MS.

Para el metabolismo de hidratos de carbono, la cepa es positiva para el uso de cada uno de L-arabinosa, inulina, glucógeno, xilitol, y ß-gentobiosa, o para la producción de ß-galactosidasa; y es negativa para el uso de cada uno de glicerol, a-metil-D-manósido, o para la producción de fosfatasa alcalina.

La invención también proporciona un extracto obtenible de la cepa Mia de S. salivarius, extracto el cual tiene actividad anti-MS. En particular, el extracto tiene actividad anti-S. mutans.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición bacteriana que incluye una cepa Mia de S. salivarius como se define anteriormente.

Todavía en un aspecto adicional, la presente invención proporciona una formulación terapéutica que comprende una cepa Mia de S. salivarius o extracto como se define anteriormente, junto con un diluyente, vehículo y/o excipiente.

En una realización, la composición o formulación comprende además un agente antibacteriano secundario.

En una realización, las formulaciones terapéuticas están en forma de alimentos o bebidas, preferiblemente en forma de un alimento o bebida a base de un producto lácteo. Formas alternativas son medicamentos, pastillas para chupar y dulces.

La invención proporciona además un método para al menos inhibir el crecimiento de bacterias sensibles a S. salivarius de la invención, comprendiendo el método poner en contacto las bacterias sensibles con una cantidad inhibidoramente eficaz de una cepa Mia de S. salivarius, extracto o composición o formulación de la invención.

Preferiblemente, las bacterias sensibles son MS, y más preferiblemente S. mutans.

En otro aspecto la invención proporciona un método para al menos inhibir el crecimiento de MS o S. mutans, comprendiendo el método poner en contacto los MS o S. mutans con una cantidad inhibidoramente eficaz de una cepa Mia de S. salivarius, extracto, composición o formulación de la invención.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de una cepa Mia de S. salivarius o...

1. Un cultivo biológicamente puro de una cepa Mia de Streptococcus salivarius en depósito en Deutsche Sammlung von Mikroorganismen Und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1 b, D-38124, Braunschweig, Alemania, número de acceso DSM 14685.

2. Un extracto obtenido de la cepa Mia de S. salivarius como se define en la reivindicación 1, que tiene actividad anti-S. mutans.

3. Una composición antibacteriana que incluye una cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1, o un extracto según la reivindicación 2.

4. Una formulación terapéutica que comprende una cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1, o un extracto según la reivindicación 2, junto con un diluyente, vehículo y/o excipiente.

5. Una composición o formulación según la reivindicación 3 o la reivindicación 4, que comprende además uno o más agentes antibacterianos secundarios.

6. Una composición o formulación según la reivindicación 5, en la que el agente antibacteriano secundario se selecciona de nisina, sustancias inhibidoras similares a bacteriocina (BLIS), y microorganismos productores de BLIS.

7. Una composición o formulación según la reivindicación 6, en la que la BLIS es una o más BLIS seleccionadas de salivaricina A, A₁, A₂ y B.

8. Una composición o formulación según la reivindicación 6, en la que el microorganismo productor de BLIS es K12 y/o K30.

9. Una composición o formulación según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, que comprende además uno o más agentes anticariogénicos secundarios.

10. Una composición o formulación según la reivindicación 9, en la que el agente anticariogénico secundario se selecciona de xilitol, fluoruro, miel de Manuka y tanino.

11. Una composición o formulación según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 10, que es una composición o formulación administrable de forma oral.

12. Una composición o formulación según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 11, en la que las composiciones o formulaciones se incluyen en un alimento o bebida.

13. Una composición o formulación según la reivindicación 12, en la que dicho alimento o bebida es un alimento o bebida a base de leche.

14. Una composición o formulación según la reivindicación 13, en la que dicho alimento o bebida es leche en polvo, galletas de leche, leche, leche con sabores, yogur o queso.

15. Una composición o formulación según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 11, en la que las composiciones o formulaciones están en forma de medicamentos, pastillas para chupar o dulces.

16. Una composición o formulación según la reivindicación 15, que está en forma de una pastilla para chupar.

17. Una composición o formulación según la reivindicación 15, que es un colutorio, enjuague bucal, pasta de dientes, gárgara, jarabe, pulverización bucal, cápsula, hilo dental, goma de mascar, o comprimido.

18. Una composición o formulación según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, que está en forma de dosificación unitaria.

19. Una composición o formulación según la reivindicación 18, que contiene de alrededor de 10⁵ a 10¹², preferiblemente 10⁹ a 10¹⁰ CFU de la cepa Mia de S. salivarius por dosis.

20. El uso de la cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1, o un extracto según la reivindicación 2, en la preparación de una composición o formulación para uso en al menos inhibir el crecimiento de bacterias sensibles a la cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1.

21. El uso de la cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1, o un extracto según la reivindicación 2, en la preparación de una composición o formulación para uso en al menos inhibir el crecimiento de la bacteria S. mutans.

22. El uso de la cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1, o un extracto según la reivindicación 2, en la preparación de una composición o formulación para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de caries dentaria provocada al menos en parte por S. mutans.

23. El uso según la reivindicación 22, en el que la caries dentaria está provocada por MS.

24. El uso de la cepa Mia de S. salivarius según la reivindicación 1, o un extracto según la reivindicación 2, en la preparación de una composición o formulación para uso en el control de la incidencia y gravedad de la caries dentaria.