Métodos para la purificación de ARN mensajero.
Un método de purificación de ARN mensajero (ARNm), que comprende
(a) sintetizar ARNm mediante transcripción In Vitro utilizando los siguientes reactivos:
(i) una plantilla de ADN lineal o circular que contiene un promotor;
(ii) un conjunto de trifosfatos de ribonucleósido;
(iii) un sistema tampón que incluye opcionalmente DTT e iones de magnesio; y
(iv) una polimerasa de ARN; y opcionalmente
(v) una ADNasa I, una pirofosfatasa y/o un inhibidor de ARNasa;
(b) añadir un agente desnaturalizante de proteínas a la preparación de la etapa (a), que comprende el ARNm sintetizado In Vitro, en el que el agente desnaturalizante de proteínas es un agente caotrópico o una alta concentración de sal; y
(c) purificar el ARNm de la preparación de la etapa (b) mediante filtración de flujo tangencial, en donde la filtración de flujo tangencial comprende:
(i) una presión transmembrana entre 1 y 30 libras por pulgada cuadrada;
(ii) una velocidad de alimentación entre 50 y 500 mL/minuto;
(iii) un caudal entre 10 y 100 mL/minuto; y
(iv) un filtro que tiene un límite de peso molecular nominal de entre 200 kDa y 700 kDa,
en donde el ARNm purificado de la etapa (c) contiene niveles indetectables de secuencias de ARN abortadas prematuramente y reactivos enzimáticos usados en síntesis In Vitro según lo determinado por electroforesis en gel de agarosa o métodos cromatográficos.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/028441.
Solicitante: Translate Bio, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 29 Hartwell Avenue Lexington, MA 02421 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: DEROSA,FRANK, HEARTLEIN,MICHAEL, DIAS,ANUSHA, KARVE,SHRIRANG.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
PDF original: ES-2708561_T3.pdf
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