Métodos para la purificación de ARN mensajero.
Un método de purificación de ARN mensajero (ARNm), que comprende
(a) sintetizar ARNm mediante transcripción In Vitro utilizando los siguientes reactivos:
(i) una plantilla de ADN lineal o circular que contiene un promotor;
(ii) un conjunto de trifosfatos de ribonucleósido;
(iii) un sistema tampón que incluye opcionalmente DTT e iones de magnesio; y
(iv) una polimerasa de ARN; y opcionalmente
(v) una ADNasa I, una pirofosfatasa y/o un inhibidor de ARNasa;
(b) añadir un agente desnaturalizante de proteínas a la preparación de la etapa (a), que comprende el ARNm sintetizado In Vitro, en el que el agente desnaturalizante de proteínas es un agente caotrópico o una alta concentración de sal; y
(c) purificar el ARNm de la preparación de la etapa (b) mediante filtración de flujo tangencial, en donde la filtración de flujo tangencial comprende:
(i) una presión transmembrana entre 1 y 30 libras por pulgada cuadrada;
(ii) una velocidad de alimentación entre 50 y 500 mL/minuto;
(iii) un caudal entre 10 y 100 mL/minuto; y
(iv) un filtro que tiene un límite de peso molecular nominal de entre 200 kDa y 700 kDa,
en donde el ARNm purificado de la etapa (c) contiene niveles indetectables de secuencias de ARN abortadas prematuramente y reactivos enzimáticos usados en síntesis In Vitro según lo determinado por electroforesis en gel de agarosa o métodos cromatográficos.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/028441.
Solicitante: Translate Bio, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 29 Hartwell Avenue Lexington, MA 02421 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: DEROSA,FRANK, HEARTLEIN,MICHAEL, DIAS,ANUSHA, KARVE,SHRIRANG.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
PDF original: ES-2708561_T3.pdf
Patentes similares o relacionadas:
Secuenciación dirigida y filtrado de UID, del 15 de Julio de 2020, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento para generar una biblioteca de polinucleótidos que comprende: (a) generar una primera secuencia del complemento (CS) de un polinucleótido diana a partir […]
Método para romper un ácido nucleico y añadir un adaptador por medio de transposasa y reactivo, del 1 de Julio de 2020, de MGI Tech Co., Ltd: Un metodo para romper un acido nucleico y anadir un adaptador por medio de una transposasa, que comprende las siguientes etapas: interrumpir […]
Vacuna subunitaria contra Mycoplasma spp., del 1 de Julio de 2020, de Agricultural Technology Research Institute: Una composición para prevenir una infección por Mycoplasma spp., que comprende: un principio activo, que comprende una proteína de PdhA; y un adyuvante […]
Aislamiento de ácidos nucleicos, del 24 de Junio de 2020, de REVOLUGEN LIMITED: Un método de aislamiento de ácidos nucleicos que comprenden ADN de material biológico, comprendiendo el método las etapas que consisten en: (i) efectuar un lisado […]
Métodos y composiciones para escisión dirigida y recombinación, del 20 de Mayo de 2020, de Sangamo Therapeutics, Inc: Un método in vitro para la escisión selectiva de un gen HLA clase I, un gen HLA que codifica una proteína de clase 1 del Complejo de Histocompatibilidad Mayor (MHC) […]
Preparación de bibliotecas de ácido nucleico marcado usando protocolo de adición en un solo tubo, del 13 de Mayo de 2020, de ILLUMINA, INC: Un método para preparar una biblioteca de fragmentos de ácido nucleico marcados que comprende: (a) poner en contacto una célula individual […]
Proteínas de captura de la superficie celular recombinantes, del 13 de Mayo de 2020, de REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.: Un método para detectar y aislar células que producen altos niveles de una proteína heterodimérica que tiene una primera subunidad y una segunda subunidad, […]
Etiquetado y evaluación de una secuencia diana, del 13 de Mayo de 2020, de RhoDx, Inc: Un método para modificar un ácido nucleico, que comprende: (a) poner en contacto un ácido nucleico de cadena sencilla con una actividad de transferasa […]