Método para detectar ácido nucleico diana.

Un método para detectar uno o más ácidos nucleicos diana presentes en una muestra,

que comprende las siguientes etapas:

(1) agregar un cebador o sonda marcada con fluoróforo y una sonda marcada con un desactivador a la muestra, o agregar la muestra a un cebador o sonda marcada con fluoróforo y una sonda marcada con un desactivador, en donde el cebador o sonda marcada con fluoróforo es un oligonucleótido marcado con fluoróforo que tiene complementariedad con un ácido nucleico diana, y

la sonda marcada con desactivador es un oligonucleótido marcado con desactivador que tiene complementariedad con el cebador o sonda marcada con fluoróforo y que tiene una temperatura de fusión (Tf) menor que la del cebador o sonda marcada con fluoróforo;

(2) incubar la muestra a una temperatura igual o inferior a la temperatura de fusión (TF) del cebador o sonda marcada con fluoróforo y superior a la temperatura de fusión (TF) de la sonda marcada con desactivador en la que se amplifica el ácido nucleico diana en condiciones isotérmicas por amplificación isotérmica de ácidos nucleicos iniciada por cebadores quiméricos (ICAN), amplificación por desplazamiento de cadena (SDA), amplificación por círculo rodante (RCA), proceso de amplificación inteligente versión 2 (SMAP2) o amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP);

(3) hibridar el cebador o sonda marcado con fluoróforo que no está con el ácido nucleico diana, con la sonda marcada con desactivador incubando la muestra a una temperatura igual o inferior a la temperatura de fusión (Tf) de la sonda marcada con desactivador, desactivando de este modo con el desactivador la fluorescencia emitida por el cebador o sonda marcada con fluoróforo que no ha hibridado con el ácido nucleico diana; y

(4) medir la fluorescencia del cebador o sonda marcado con fluoróforo unido al ácido nucleico diana, mientras que la muestra se mantiene a una temperatura igual o inferior a la temperatura de fusión (Tf) de la sonda marcada con desactivador, en donde solo se pueden detectar los marcadores fluorescentes en el cebador o sonda marcado con fluoróforo unido con éxito al ácido nucleico diana.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2012/077596.

Solicitante: EIKEN KAGAKU KABUSHIKI KAISHA.

Inventor/es: HOSAKA,NORIMITSU, HIGASHIDE SATOSHI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/09 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2755934_T3.pdf

 

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