Método de preparación de bibliotecas de polinucleótidos plantilla.

Un método de generación de una biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla que tienen secuencias comunes en sus extremos 5' y secuencias comunes en sus extremos 3',

comprendiendo el método:

proporcionar uno o más dúplex de polinucleótido diana con extremos romos,

añadir un solo desoxinucleótido "A" a ambos extremos 3' de los dúplex de polinucleótido diana, produciendo así un saliente de una base en 3',

ligar polinucleótidos adaptadores con apareamiento erróneo idéntico en los dos extremos de cada uno de uno o más dúplex de polinucleótido diana para formar una o más construcciones adaptador-diana, en el que cada adaptador con apareamiento erróneo se forma a partir de dos cadenas polinucleotídicas hibridadas que forman un complejo bimolecular que comprende al menos una región bicatenaria y una región no apareada, y en el que cada adaptador con apareamiento erróneo comprende un saliente de una sola base en 3' que comprende un nucleótido "T" en el extremo bicatenario, que es complementario al saliente de una sola base en 3' que comprende un nucleótido "A" en los dúplex de polinucleótido diana,

realizar una reacción inicial de extensión de cebador en la que un oligonucleótido cebador hibrida con una parte de adaptador de cada una de las construcciones adaptador-diana y se extiende por adición secuencial de nucleótidos para formar productos de extensión complementarios a al menos una cadena de cada una de las construcciones adaptador-diana,

en el que los productos de extensión, y opcionalmente los productos de amplificación derivados de los mismos, proporcionan en su conjunto una biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla que tienen secuencias comunes en sus extremos 5' y secuencias comunes en sus extremos 3';

en el que los dúplex de polinucleótido diana a ligar son una mezcla compleja de fragmentos de ADN genómico que representan un genoma completo o esencialmente completo, y

en el que la biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla generadas es representativa del genoma completo o esencialmente completo.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E11004071.

Solicitante: ILLUMINA CAMBRIDGE LIMITED.

Nacionalidad solicitante: Reino Unido.

Dirección: Illumina Centre, 19 Granta Park, Great Abington Cambridge, Cambridgeshire CB21 6DF REINO UNIDO.

Inventor/es: SMITH,GEOFFREY PAUL, RIGATTI,ROBERTO, GORMLEY,NIALL ANTHONY, BENTLEY,DAVID.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2732253_T3.pdf

 

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