Procedimiento de fabricación escalable para producir vectores lentivirales recombinantes en un sistema de cultivo celular en suspensión libre de suero.

Procedimiento para la purificación de vectores lentivirales recombinantes (rLV) a gran escala,

que comprende;

a) recolectar vectores virales recombinantes que comprenden un transgén a partir de un cultivo en suspensión libre de suero;

b) clarificar la cosecha de la etapa a) por medio de filtración;

c) recolectar el filtrado de la etapa b) y opcionalmente exponer dicho filtrado a digestión con nucleasas para eliminar impurezas de ADN/ARN;

d) someter el filtrado de la etapa c) a cromatografía en columna de intercambio aniónico modulada por PEG, aislando de este modo dichos vectores rLV;

e) purificar adicionalmente los vectores rLV obtenidos de la etapa d) por medio de filtración de flujo tangencial para reducir el volumen e intercambiar el tampón;

f) someter el filtrado de la etapa e) a cromatografía en columna de exclusión molecular para purificar adicionalmente dichos vectores rLV;

g) someter los vectores rLV de la etapa f) a filtración de flujo tangencial, y obtener de este modo el título de vectores final;

h) filtrar la disolución de vectores rLV obtenida de la etapa g) a través de un filtro de diámetro de poro de 0,20 a 0,5 μm; y

i) recoger vectores rLV purificados.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/030370.

Solicitante: THE CHILDREN'S HOSPITAL OF PHILADELPHIA.

Inventor/es: QU,Guang, WRIGHT,John Fraser.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N7/02 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Aislamiento o purificación.

PDF original: ES-2681434_T3.pdf

 

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