Sistema de producción de un vector lentiviral a gran escala comercial y vectores así producidos.
(26/06/2019) Procedimiento para producir lentivirus recombinante (rLV) de alto rendimiento que comprende un transgén terapéuticamente beneficioso, que comprende las etapas siguientes:
a) transfectar unas células hospedadoras con plásmidos que codifican los componentes necesarios para la producción de rLV con una mezcla de transfección de fosfato de calcio, en el que para la transfección dicho fosfato de calcio y dichos plásmidos se mezclan a una velocidad constante uniforme formando así un complejo, seguida por la adición de dicho complejo a dichas células en un medio;
b) incubar dichas células hospedadoras transfectadas en la etapa a) en los medios durante un período de tiempo en el que se producen los medios de partícula de rLV y a continuación los medios que comprenden la partícula de rLV se recogen por lo menos dos veces durante…
Vector VAA8 mejorado con una actividad funcional aumentada y métodos de utilización del mismo.
(10/10/2018) Vector de virus adenoasociado (VAA) que presenta un serotipo de VAA1, VAA6, VAA8 o VAA9, que comprende:
(i) una cápside que comprende una proteína VP1.5 de VAA1, VAA6, VAA8 o VAA9, respectivamente;
(ii) un minigén que comprende repeticiones terminales invertidas de VAA; y
(iii) una secuencia de ácidos nucleicos heteróloga ligada funcionalmente a secuencias reguladoras que dirigen la expresión de un producto a partir de la secuencia de ácidos nucleicos heteróloga en una célula hospedadora; en el que
(a) dicho vector de VAA es un VAA8 y dicha proteína VP1.5 consiste en la secuencia de aminoácidos representada en la figura 5, panel A, en el que el aminoácido en el extremo amino es una leucina o en el que dicha proteína VP1.5 consiste en la secuencia de aminoácidos representada en la figura…
Procedimiento de fabricación escalable para producir vectores lentivirales recombinantes en un sistema de cultivo celular en suspensión libre de suero.
(13/09/2018) Procedimiento para la purificación de vectores lentivirales recombinantes (rLV) a gran escala, que comprende;
a) recolectar vectores virales recombinantes que comprenden un transgén a partir de un cultivo en suspensión libre de suero;
b) clarificar la cosecha de la etapa a) por medio de filtración;
c) recolectar el filtrado de la etapa b) y opcionalmente exponer dicho filtrado a digestión con nucleasas para eliminar impurezas de ADN/ARN;
d) someter el filtrado de la etapa c) a cromatografía en columna de intercambio aniónico modulada por PEG, aislando de este modo dichos vectores rLV;
e) purificar adicionalmente los vectores rLV obtenidos de la etapa d) por medio de filtración de flujo tangencial para reducir el volumen e intercambiar el tampón;
f)…
Plataforma de fabricación escalable para la purificación de vectores virales y vectores virales purificados de este modo para su utilización en terapia génica.
(11/09/2018) Procedimiento para purificar partículas de vector de virus adenoasociados (VAA) genuinas que comprenden un transgén que codifica para una proteína terapéutica o fragmento de la misma a partir de una preparación de VAA que comprende unas partículas de vector de VAA, cápsides vacías e impurezas de la célula huésped, comprendiendo dicho procedimiento:
a) recolectar células y sobrenadante celular que comprenden unas partículas de VAA;
b) concentrar dichas células y dicho sobrenadante por medio de filtración de flujo tangencial
c) lisar dichas células por microfluidización para formar un lisado;
d) filtrar, clarificando de ese modo el lisado de la etapa c);
e) purificar unas partículas de…
Composiciones y métodos para prevenir la agregación del vector AAV.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(16/08/2017). Solicitante/s: GENZYME CORPORATION. Clasificación: C12N7/00, C12N7/02.
Un método para prevenir la agregación de viriones de AAV2 (virus adenoasociado tipo 2) en una preparación de dichos viriones, que comprende añadir uno o más excipientes a viriones de AAV2 para producir una preparación isotónica de viriones con una fuerza iónica de al menos 250 mM, en donde la concentración de viriones de AAV2 dentro de la preparación supera 1x1013 vg/ml, y en donde uno o más de los excipientes comprende un ion multivalente.
PDF original: ES-2647477_T3.pdf
Procedimientos para producir preparaciones de viriones de AAV recombinantes sustancialmente exentas de cápsidas vacías.
(03/09/2014) Uso de cromatografía de intercambio aniónico o catiónico para separar partículas de vectores de AAV de cápsidas vacías de AAV.
PROCEDIMIENTOS PARA PRODUCIR PREPARACIONES DE VIRIONES DE AAV RECOMBINANTES SUSTANCIALMENTE EXENTAS DE CÁPSIDAS VACÍAS.
(19/04/2011) Un procedimiento para purificar partículas de vectores de AAV procedentes de una preparación de AAV que comprende partículas de vectores de AAV y cápsidas vacías de AAV, para proporcionar un producto sustancialmente exento de cápsidas vacías de AAV, comprendiendo dicho procedimiento: a) proporcionar una célula hospedadora que comprende partículas de vectores de AAV; b) lisar dicha célula hospedadora para obtener un lisado celular bruto que comprende partículas de vectores de AAV y cápsidas vacías de AAV; c) aplicar dicho lisado celular bruto a una primera columna de cromatografía de intercambio catiónico en condiciones en las que dichas partículas de vectores de AAV y dichas cápsidas vacías de AAV se unen a la columna; d) eluir dichas partículas de vectores de AAV y dichas cápsidas vacías de AAV en condiciones de no separación para proporcionar una preparación…