Optimización de expresión de proteínas Rep y Cap parvovirales en las células de insecto.

Método para la producción de un virión parvoviral recombinante,

donde el método comprende los pasos de:

(a) proporcionar una célula de insecto que comprende uno o más constructos de ácidos nucleicos que comprenden:

(i) una secuencia de nucleótidos que comprende un transgen que se flanquea por al menos una secuencia de nucleótidos terminales invertidas de repetición parvoviral;

(ii) un primer casete de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína Rep parvoviral que está operativamente enlazada a un primer promotor que es capaz de dirigir la expresión de la proteína Rep en la célula de insecto;

(iii) un segundo casete de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteina cápsida parvoviral que está operativamente enlazada a un segundo promotor que es capaz de dirigir la expresión de la proteina cápsida en la célula de insecto;

(b) cultivo de la célula definida en (a) bajo una condición propicia para la expresión de la proteina Rep y cápsida; y,

(c) opcionalmente recuperación del virión parvoviral recombinante;

donde los primeros y segundos casetes de expresión están presentes en un constructo de ácidos nucleicos único, donde los primeros y segundos casetes de expresión están presentes en la cantidad equimolar en la célula de insecto, donde el primer promotor es seleccionado del grupo que consiste en un promotor PolH, promotor po promotor básico y donde el segundo promotor es un promotor deltaE1 o un promotor E1.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/NL2009/050076.

Solicitante: UniQure IP B.V.

Nacionalidad solicitante: Países Bajos.

Dirección: Paasheuvelweg 25a 1105 BP Amsterdam PAISES BAJOS.

Inventor/es: NOORDMAN,YVET, BAKKER,ANDREW CHRISTIAN, HERMENS,WILHELMUS THEODORUS JOHANNES MARIACHRISTIAAN.

Fecha de Publicación: 2 de Agosto de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07K14/015 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Parvoviridae, p. ej. virus de la panleucopenia felina, parvovirus humano.
C12N15/85 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para células animales.
C12N15/864 C12N 15/00 […] › Vectores parvovirales.
C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
C12N7/04 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.

PDF original: ES-2644880_T3.pdf

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