Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus subtilis.

Proceso para la producción de ácido hialurónico en Bacillus subtilis,

que comprende los siguientes etapas:

(a) cultivar células bacterianas huésped de Bacillus subtilis transformadas con el sistema grac-lac, en condiciones adecuadas para la producción de ácido hialurónico, y en presencia de isopropil-ß-tiogalactopiranósido (IPTG) como inductor, en donde dichas células bacterianas huésped se caracterizan por estar transformadas con:

(i) al menos un vector de plásmido episómico que comprende una secuencia que codifica para la enzima hialuronano sintasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa deshidrogenasa en tándem, bajo el control del promotor fuerte inducible Pgrac que usa el represor lac, o

(ii) al menos un vector de plásmido episómico que comprende una secuencia que codifica para la enzima hialuronano sintasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa deshidrogenasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa pirofosforilasa, y una secuencia que codifica para la enzima glucosa 6 fosfato isomerasa, bajo el control del promotor fuerte inducible Pgrac que usa el represor lac;

(b) recuperar el ácido hialurónico del medio de cultivo;

en donde dichas células huésped bacterianas de Bacillus subtilis transformadas con el vector de plásmido (i) o (ii) capaces de producir ácido hialurónico de la etapa a) se preseleccionan en la placa en gradiente de IPTG.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2011/065642.

Solicitante: FIDIA FARMACEUTICI S.P.A..

Nacionalidad solicitante: Italia.

Dirección: Via Ponte della Fabbrica 3A 35031 Abano Terme (PD) ITALIA.

Inventor/es: VACCARO, SUSANNA, CORSA, VINCENZA, NEGRO, ALESSANDRO, MESSINA,LUCIANO.

Fecha de Publicación: 31 de Agosto de 2016.

Clasificación Internacional de Patentes:

C08B37/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA. › C08 COMPUESTOS MACROMOLECULARES ORGANICOS; SU PREPARACION O PRODUCCION QUIMICA; COMPOSICIONES BASADAS EN COMPUESTOS MACROMOLECULARES. › C08B POLISACARIDOS; SUS DERIVADOS (polisacáridos que contienen menos de seis radicales sacáridos unidos entre sí por enlaces glucosídicos C07H; procesos de fermentación o procesos que utilizan enzimas C12P 19/00; producción de celulosa D21). › Preparación de polisacáridos no previstos en los grupos C08B 1/00 - C08B 35/00; Sus derivados (celulosa D21).
C12N15/63 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
C12N15/75 C12N 15/00 […] › para Bacillus.
C12N9/10 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Transferasas (2.) (ribonucleasas C12N 9/22).
C12P19/04 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polisacáridos, es decir, compuestos que contienen más de cinco radicales sacárido unidos entre ellos por enlaces glucosídicos.
C12P19/26 C12P 19/00 […] › Preparación de hidratos de carbono que contienen nitrógeno.

PDF original: ES-2593613_T3.pdf

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