Método de diversificación aleatoria de una secuencia genética que permite preservar la identidad de determinados segmentos internos de dicha secuencia genética.
Metodo de PCR que permite mutar aleatoriamente una secuencia nucleotidica S,
delimitada en sus extremos 5' y 3' por dos segmentos F1 y F2, mientras conserva al mismo tiempo la identidad de un segmento interno D de dicha secuencia nucleotidica S, 5 caracterizado por que comprende las siguientes etapas:
i) se efectua una PCR propensa a error en toda la secuencia S utilizando al menos dos cebadores, uno de los cuales es sentido y el otro antisentido, respectivamente, de los segmentos F1 y F2, de modo que se amplifica la secuencia S al introducir mutaciones aleatoriamente;
ii) se purifican los productos de amplificacion obtenidos, que corresponden a las copias de S mutadas aleatoriamente;
iii) se efectua una PCR de alta fidelidad a partir de los productos de amplificacion purificados en la etapa ii), utilizando pares de cebadores sentido y antisentido, respectivamente, al menos:
- un cebador sentido de F1 y un cebador antisentido se hibridan en su totalidad con el segmento D, a fin de amplificar la region F1-D de las copias de S mutadas,
- un cebador sentido se hibrida en su totalidad con el segmento D y un cebador antisentido de F2, a fin de amplificar la region D-F2 de las copias de S mutadas;
iv) se purifican los productos de amplificacion obtenidos en la etapa iii), que consisten en copias de los segmentos F1-D y D-F2 de la secuencia S mutada en la etapa i) en las que el segmento D ha conservado su identidad;
v) se efectua una PCR de alta fidelidad a partir de los productos de amplificacion purificados en la etapa iv) utilizando los cebadores sentido y antisentido, F1 y F2 respectivamente;
vi) se purifican los productos de PCR obtenidos, que corresponden a las secuencias nucleotidicas S mutadas en la etapa i) en las que el segmento D ha conservado su identidad.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/FR2007/002102.
Solicitante: Pherecydes Pharma.
Nacionalidad solicitante: Francia.
Dirección: 102 AVENUE GASTON ROUSSEL 93230 ROMAINVILLE FRANCIA.
Inventor/es: IRIS,FRANÇOIS.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
PDF original: ES-2582385_T3.pdf
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