Detección de polimorfismo mononucleotídico usando sondas de hidrólisis con estructura de horquilla en 3''.

Un procedimiento para detectar un polimorfismo mononucleotídico (SNP) en un ácido nucleico diana en una muestra,

comprendiendo el procedimiento:

- realizar una etapa de amplificación que comprende poner en contacto la muestra con un cebador que comprende una primera secuencia de ácido nucleico para producir un producto de amplificación si está presente algún ácido nucleico diana en la muestra;

- realizar una etapa de hibridación que comprende poner en contacto el producto de amplificación con una sonda de hidrólisis específica de SNP que tiene un extremo 5' y un extremo 3',

teniendo dicha sonda de hidrólisis específica de SNP una secuencia de ácido nucleico que consiste en una estructura de horquilla hacia el extremo 3' y una segunda secuencia de ácido nucleico complementaria a una región que contiene el SNP del producto de amplificación;

comprendiendo además dicha sonda de hidrólisis específica de SNP un primer y un segundo marcador interactivo, en la que dicho primer marcador interactivo comprende un resto fluorescente donador en el extremo 5', y dicho segundo marcador interactivo comprende un resto fluorescente aceptador correspondiente, a no más de 5 nucleótidos del resto fluorescente donador en la sonda de hidrólisis y en la que el nucleótido dentro de la segunda secuencia de ácido nucleico de la sonda de hidrólisis que hibrida con el SNP en el producto de amplificación está situado entre el primer y el segundo marcador interactivo; y

comprendiendo dicha estructura de horquilla una región de secuencia de ácido nucleico no natural que comprende uno o más nucleótidos no naturales para producir la estructura de horquilla en el extremo 3' y en la que dichos uno o más nucleótidos no naturales son nucleótidos añadidos o cambiados en el extremo 3' de la sonda de hidrólisis en comparación con la secuencia natural del producto de amplificación; y

- detectar la presencia o ausencia del producto de amplificación, en el que la presencia de los productos de amplificación es indicativa de la presencia del SNP en la diana de ácido nucleico, y en el que la ausencia de los productos de amplificación es indicativa de la ausencia del SNP en la diana de ácido nucleico.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2014/077309.

Solicitante: ROCHE DIAGNOSTICS GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: Sandhofer Straße 116 68305 Mannheim ALEMANIA.

Inventor/es: MEHTA,ROCHAK.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2663803_T3.pdf

 

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