Amplificación de ácido nucleico con supresión específica de alelo de variantes de secuencia.

Un procedimiento de amplificación selectiva de una variante deseada de una secuencia diana,

cuya secuencia diana existe en forma de más de una variante, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

a) proporcionar una muestra que posiblemente comprende al menos una variante de la secuencia diana en una mezcla de reacción;

b) proporcionar un primer oligonucleótido, capaz de hibridarse con más de una variante de la secuencia diana;

c) proporcionar un segundo oligonucleótido, capaz de hibridarse con más de una variante de la secuencia diana, en el que al menos una fracción de dicho segundo oligonucleótido contiene una base modificada en uno o más nucleótidos en o cerca del extremo 3' y en el que dicha base modificada está modificada en el grupo amino exocíclico;

d) proporcionar un tercer oligonucleótido capaz de hibridarse con la variante deseada de la secuencia diana con menor afinidad que con las variantes no deseadas de la secuencia diana y diseñado para hibridarse con la misma cadena y entre 0 y 60 nucleótidos hacia el extremo 3' de dicho segundo oligonucleótido;

e) proporcionar una polimerasa de ácido nucleico que carece sustancialmente de actividad nucleasa 5'- 3';

f) someter dicha mezcla de reacción a reacción en cadena de la polimerasa,

en el que las cantidades de dichos oligonucleótidos primero y segundo son desiguales, de manera que el primer oligonucleótido está presente en exceso y dicho tercer oligonucleótido inhibe sustancialmente la extensión de dicho segundo oligonucleótido por dicha polimerasa de ácido nucleico cuando dicho tercer oligonucleótido se hibrida con la variante no deseada de la secuencia diana, pero no inhibe sustancialmente la extensión de dicho segundo oligonucleótido por dicha polimerasa de ácido nucleico cuando dicho tercer oligonucleótido se hibrida con la variante deseada de la secuencia diana.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/000030.

Solicitante: ROCHE DIAGNOSTICS GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: SANDHOFER STRASSE 116 68305 MANNHEIM ALEMANIA.

Inventor/es: GROW,MICHAEL, BROPHY,VICTORIA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2634428_T3.pdf

 

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