Proteínas, ácidos nucleicos, y anticuerpos BTNL9 y usos de los mismos.

Una proteína BTNL9 multimérica soluble que comprende

(a) un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 90% a los aminoácidos 35- 257 de la SEC ID Nº 2,

y

(b) un segundo polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica al menos en un 90% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID Nº 2,

en la que la ventana de alineamiento de las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos de (a) y (b) con los aminoácidos 35-257 de la SEC ID Nº 2 es al menos de 80 aminoácidos de longitud.

en la que

(i) la proteína BTNL9 multimérica es al menos un tetrámero y/o

(ii) la proteína BTNL9 multimérica tiene un peso molecular cuatro veces mayor que el de un polipéptido de (a), y

en la que la proteína BTNL9 multimérica puede inhibir la proliferación de un linfocito T estimulado por un anticuerpo anti-CD3.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/031811.

Solicitante: AMGEN INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: ONE AMGEN CENTER DRIVE THOUSAND OAKS, CA 91320-1799 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ESCOBAR,SABINE S, VINEY,JOANNE L, ARNETT,HEATHER A, SWANSON,RYAN M.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K38/17 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › que provienen de animales; que provienen de humanos.
  • A61K39/395 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • C07K14/705 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
  • C12N15/00 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K).
  • C12N5/00 C12N […] › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).

PDF original: ES-2537814_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Proteínas, ácidos nucleicos, y anticuerpos BTNL9 y usos de los mismos Campo

La invención se refiere a una proteína tipo butirofilina y usos de la misma.

Antecedentes

La modulación de una respuesta inmunitaria o inflamatoria puede ser valiosa en varios cuadros terapéuticos. La modulación negativa de una respuesta inmunitaria o inflamatoria puede ser deseable en el tratamiento de varios tipos de enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias.

La modulación positiva de cualquier respuesta inmunitaria pude ser valiosa para, por ejemplo, amplificar una respuesta a un antígeno en particular, por ejemplo, un antfgeno que está contenido en una vacuna o un antígeno que se expresa preferentemente en una célula cancerosa o una célula que interviene en una enfermedad fibrótica. Por lo tanto, las moléculas que son capaces de modular una respuesta inmunitaria o inflamatoria tienen un valor terapéutico potencial en una variedad de cuadros terapéuticos. Una de tales moléculas que pueden tener un valor terapéutico es la proteína 9 tipo butirofilina (BNTL9).

El documento WO 24/22594 desvela, entre otras proteínas, una proteína BNTL9 aislada monomérica soluble. También se desvelan las proteínas de fusión con BNTL9. La proteína BNTL9 del documento WO 24/22594 comprende una secuencia de aminoácidos (hsB7-H4LV) que se corresponde con los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2 de la presente invención. Los autores del documento WO 24/22594 especulan sobre que la BNTL9 puede modular una respuesta inmunitaria, bien por estimulación o bien por inhibición, pero no se proporcionan datos funcionales a este respecto.

La presente invención proporciona una proteína BNTL9 multimérica soluble y usos de la misma para tratar enfermedades que se caracterizan por inflamación y/o respuestas inmunitarias inapropiadas y/o anormales. Este agente puede inhibir la inflamación y/o las respuestas inmunitarias.

Sumario

La invención proporciona proteínas BNTL9 solubles multiméricas y los usos médicos de las mismas. También se describen en el presente documento los usos de anticuerpos agonistas y antagonistas que se unen a la BNTL9.

En una realización, la invención engloba una proteína BNTL9 aislada multimérica soluble que comprende (a) un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 9%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2, y (b) un segundo polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 9%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2, en que la ventana de alineamiento de las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos de (a) y (b) con los aminoácidos 35- 257 de la SEC ID N° 1 es al menos de 8 aminoácidos de longitud, en la que el multímero es al menos un tetrámero, y en que la proteína BNTL9 multimérica puede inhibir la proliferación de un linfocito T estimulado por un anticuerpo anti-CD3. En una realización ligeramente diferente, la invención proporciona una proteína BNTL9 multimérica soluble que comprende

(a) un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 9% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2, y (b) un segundo polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 9% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2, en que la ventana de alineamiento de las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos (a) y (b) con los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2 es al menos de 8 aminoácidos de longitud, en que el multímero tiene un peso molecular que es mayor de aproximadamente cuatro veces el de un polipéptido monomérico de (a) y/o al menos aproximadamente cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince o dieciséis veces mayor que el de un polipéptido monomérico de (a), y en que la proteína BNTL9 multimérica puede inhibir la proliferación de un linfocito T estimulado por un anticuerpo anti-CD3. La proteína BTNL9 multimérica en cualquiera de estas realizaciones también puede ser al menos un tetrámero, un pentámero, un hexámero, un heptámero, un octámero, un nonámero, un decámero, y/o un multímero de mayor orden, lo que también significa que la proteína BTNL9 multimérica puede ser un un tetrámero, un pentámero, un hexámero, un heptámero, un octámero, un nonámero, un decámero, y/o un multímero de mayor orden. La proteína BTNL9 multimérica puede comprender la secuencia de aminoácidos desde el aminoácido 35, 36, 37, 38, 39, o 4 a 253, 254, 255, 256, o 257 de la SEC ID N° 2. En algunas realizaciones, la proteína BTNL9 multimérica no comprende los aminoácidos 258 a 277 de la SEC ID N° 2, y en algunas realizaciones puede comprender otro polipéptido, tal como, por ejemplo, una parte Fe de un anticuerpo. Tal parte Fe de anticuerpo puede comprender (i) la secuencia de aminoácidos de la región Fe nativa humana o (ii) una secuencia de aminoácidos que es sustancialmente similar a la de la región Fe nativa humana que tiene no más de 15, no más de 1, o no más de 5 inserciones, deleciones, o sustituciones de un solo aminoácido con respecto a la secuencia de aminoácidos de la región Fe nativa humana. El Fe nativo humano puede ser del isotipo lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgD, IgM, o IgE. La proteína BTNL9 multimérica puede ser un homotetrámero, un homopentámero, un homohexámero, un

homoheptámero, un homooctámero, un homononámero, un homodecámero, un homomultfmero de grado más alto, un heteromultímero, o una mezcla de especies. También se proporciona el uso de ácidos nucleicos que codifican BTNL9 para la producción de la proteína BTNL9 multimérica, así como el uso de vectores que comprenden estos ácidos nucleicos y el uso de células huésped que contienen los vectores y/o los ácidos nucleicos para la producción de la proteína BTNL9 multimérica de la invención.

También se describe en el presente documento una proteína de fusión BTNL9 que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 9%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2 en que la ventana de alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la proteína de fusión BTNL9 con los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2 tiene al menos 8 aminoácidos de longitud, y (b) un segundo polipéptido, con el que la proteína de fusión BTNL9 puede inhibir la proliferación de un linfocito T estimulado por un anticuerpo anti-CD3. La proteína de fusión puede ser una proteína aislada y/o soluble. El segundo polipéptido puede ser una parte Fe de un anticuerpo, en el que la parte Fe tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica o sustancialmente similar a una secuencia de aminoácidos de la región Fe nativa humana y no contiene más de 5, 1, 15 o 2 inserciones, deleciones, o sustituciones de un solo aminoácido con respecto a la región Fe nativa humana. La región Fe nativa humana puede ser un isotipo lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgD, IgE, o IgM. La proteína de fusión BTNL9 puede comprender los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2. La proteína de fusión BTNL9 puede comprender una secuencia de aminoácidos que es sustancialmente similar a la SEC ID N° 18, en la que la secuencia de aminoácidos no comprende más de 5, 1, 15, o 2 inserciones, deleciones, o sustituciones de un solo aminoácido con respecto a la SEC ID N° 18, y/o la proteína de fusión BTNL9 puede comprender la SEC ID N° 18. La proteína de fusión puede ser al menos un trímero, un tetrámero, un pentámero, un hexámero, un heptámero, un octámero, un nonámero, o un decámero. La proteína de fusión BTNL9 puede comprender un engarce. Tal proteína de fusión BTNL9 puede ser un multímero, en la que el multímero tiene un peso molecular de al menos aproximadamente cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, o dieciséis veces mayor que la proteína de fusión BTNL9 monomérica. También se describen los ácidos nucleicos que codifican tal proteína de fusión BTNL9 , así como los vectores que comprenden estos ácidos nucleicos y las células huésped que contienen los vectores y/o los ácidos nucleicos.

También se describe en el presente documento una proteína BTNL9 soluble que comprende la secuencia de aminoácidos de un fragmento de la SEC ID N° 2 que se extiende desde la posición 4-14 de la SEC ID N° 2 o una variante de la misma que no comprende más de 5 o 1 inserciones, deleciones, o sustituciones de un solo aminoácido con respecto a los aminoácidos 4-14 de la SEC ID N° 2, en que la proteína BTNL9 no comprende además la secuencia de aminoácidos de un fragmento de la SEC ID N° 2 que se extiende de la posición 16 a 248 de la SEC ID N° 2 o una variante de la misma que no comprende... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una proteína BTNL9 multimérica soluble que comprende

(a) un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 9% a los aminoácidos 35- 257 de la SEC ID N°2, y

(b) un segundo polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica al menos en un 9% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2,

en la que la ventana de alineamiento de las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos de (a) y (b) con los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2 es al menos de 8 aminoácidos de longitud.

en la que

(i) la protema BTNL9 multimérica es al menos un tetrámero y/o

(ii) la proteína BTNL9 multimérica tiene un peso molecular cuatro veces mayor que el de un polipéptido de

(a), y

en la que la proteína BTNL9 multimérica puede inhibir la proliferación de un linfocito T estimulado por un anticuerpo anti-CD3.

2. La proteína multimérica BTNL9 de la reivindicación 1, en la que los polipéptidos de (a) y (b) comprende cada uno una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 95% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2.

3. La proteína multimérica BTNL9 de la reivindicación 2, en la que los polipéptidos de (a) y (b) comprende cada uno una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos un 97% a los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2.

4. La proteína multimérica BTNL9 de la reivindicación 3, en la que los polipéptidos de (a) y (b) comprende cada uno la secuencia de aminoácidos de los aminoácidos 35-257 de la SEC ID N° 2.

5. La proteína multimérica BTNL9 de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que los polipéptidos de (a) y (b) no comprenden la secuencia de aminoácidos 258 a 277 de la SEC ID N° 2.

6. La proteína multimérica BTNL9 de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que los polipéptidos de (a) y (b) cada uno comprende otra secuencia de aminoácidos.

7. La proteína multimérica BTNL9 de la reivindicación 6, en la que la otra secuencia de aminoácidos es la secuencia de aminoácidos de una parte Fe de un anticuerpo.

8. La proteína multimérica BTNL9 de la reivindicación 7, en la que:

(i) la parte Fe comprende la secuencia de aminoácidos de una región Fe nativa humana;

(ii) la parte Fe comprende una secuencia de aminoácidos que no tiene más de 5, 1, o 15 inserciones, deleciones, o sustituciones de un solo aminoácido con respecto a la secuencia de aminoácidos de una región Fe IgG nativa humana;

(iii) la parte Fe comprende la secuencia de aminoácidos de una región Fe nativa humana del isotipo lgG1, lgG2, o lgG4;

(iv) la parte Fe puede unirse a un receptor Fe neonatal humano (FcRn);

(v) la proteína multimérica BTNL9 es un homotetrámero o un homomultímero de mayor orden;

(vi) la proteína multimérica BTNL9 es un heteromultímero; y/o

(vii) la proteína multimérica BTNL9 tiene un peso molecular al menos 8 veces mayor que el peso molecular del polipéptido de (a) o (b).

9. El uso de un ácido nucleico que codifica la BTNL9 para la producción de la proteína multimérica BTNL9 de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

1. El uso de un vector que comprende el ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 9 para la producción de la proteína multimérica BTNL9 de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

11. El uso de una célula huésped que contiene el ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 9 o el vector de acuerdo con la reivindicación 1 para la producción de la proteína multimérica BTNL9 de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

12. Un procedimiento de fabricación de una proteína multimérica BTNL9 de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 que comprende

cultivarla célula huésped de acuerdo con la reivindicación 11 en un medio bajo condiciones adecuadas para la expresión del ácido nucleico y

recuperar la proteína expresada de las células o el medio de cultivo.

13. La proteína multimérica BTNL9 de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria o inflamatoria.

14. La proteína multimérica BTNL9 para el uso de la reivindicación 13, en que el uso comprende las siguientes etapas:

(a) retirar los linfocitos T del paciente;

(b) estimular los linfocitos T con una combinación de proteínas que comprende un anticuerpo anti-CD3 y la proteína multimérica BTNL9;

(c) recolectar los linfocitos T estimulados; y

(d) devolver los linfocitos T recolectados al paciente.

15. La proteína multimérica BTNL9 para el uso de la reivindicación 13 o 14, en la que la enfermedad autoinmunitaria

o inflamatoria es seleccionada de entre el grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, una enfermedad inflamatoria del intestino grueso, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, psoriasis, sarcoidosis, asma, o una enfermedad fibrótica.


 

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