Nuevas composiciones inmunogénicas para la prevención y tratamiento de enfermedad meningocócica.

Una composición que comprende al menos una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene identidad de secuencia mayor del 95 % con la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID Nº:

212, 214 y 216, en la que la composición comprende además al menos una proteína PorA.

Nuevas composiciones inmunogénicas para la prevención y tratamiento de enfermedad meningocócica Campo de la invención La presente divulgación se refiere a proteínas ORF2086 de Neisseria (Subfamilia A y Subfamilia B) , que pueden aislarse de cepas bacterianas tales como las de especies de Neisseria, incluyendo cepas de Neisseria meningitidis (serogrupos A, B, C, D, W-135, X, Y, Z y 29E) , Neisseria gonorrhoeae y Neisseria lactamica, así como partes inmunogénicas y/o equivalentes biológicos de dichas proteínas. La presente divulgación también se refiere a anticuerpos que se unen de forma inmunoespecífica con dichas proteínas, partes inmunogénicas y/o equivalentes biológicos. Además, la presente divulgación se refiere a polinucleótidos aislados que comprenden secuencias de ácido nucleico que codifican cualquiera de las anteriores proteínas, partes inmunogénicas, equivalentes biológicos y/o anticuerpos. Adicionalmente, la presente divulgación se refiere a composiciones inmunogénicas y a su uso para prevenir, tratar y/o diagnosticar infección meningocócica causada por N. meningitidis, y en particular enfermedad meningocócica causada por N. meningitidis serogrupo B, así como a procedimientos para preparar dichas composiciones. La presente divulgación se refiere tanto a formas recombinantes como a formas aisladas de una fuente natural, así como formas tanto lipidadas como no lipidadas.

Antecedentes de la invención La meningitis meningocócica es una enfermedad devastadora que puede matar a niños y jóvenes adultos en un periodo de horas a pesar de la disponibilidad de antibióticos. Pizza y col., 2000, Science 287: 1816-1820. La meningitis se caracteriza como una inflamación de las meninges que da como resultado una cefalea intensa, fiebre, pérdida de apetito, intolerancia a la luz y al sonido, rigidez de los músculos, especialmente en el cuello, y en casos graves convulsiones, vómitos y delirios que conducen a la muerte. Los síntomas de la meningitis meningocócica aparecen repentinamente y culminan en la septicemia meningocócica con su erupción hemorrágica característica. Un diagnóstico rápido y tratamiento inmediato con grandes dosis de antibióticos son críticos si se pretende que haya alguna probabilidad de supervivencia. 2000. Bantam Medical Dictionar y , Tercera Edición 302.

La meningitis meningocócica está provocada por Neisseria meningitidis (el meningoco) , una bacteria capsulada que se ha clasificado en varios serogrupos patógenos incluyendo A, B, C, D, W-135, X, Y, Z y 29E. Las cepas de serogrupo B de N. meningitidis son una causa importante de la enfermedad meningocócica en todo el mundo. Por ejemplo, se ha indicado en la bibliografía médica que el serogrupo B es responsable de aproximadamente el 50 % de las meningitis bacterianas en bebés y niños residentes en los Estados Unidos y Europa. No existe en la actualidad ninguna vacuna para evitar la enfermedad meningocócica provocada por N. meningitidis Serogrupo B.

Desarrollar una composición inmunogénica para la prevención de la enfermedad meningocócica del serogrupo B ha sido un reto para los investigadores desde el trabajo de Goldschneider y col. hace más de 30 años. Goldschneider y col., 1969, J. Exp. Med 129 (6) : 1307-26; Goldschneider y col, 1969, J. Exp. Med 129 (6) : 1327-48; Gotschlich y col., 1969, J. Exp. Med. 129 (6) : 1385-95; y Gotschlich y col., 1969, J. Exp. Med. 129 (6) : 1367-84. A diferencia de la enfermedad del serogrupo A, que prácticamente ha desaparecido de Norteamérica después de la II Guerra Mundial Achtman, M., 1995, Trends in Microbiology 3 (5) : 186-92, la enfermedad provocada por los organismos del serogrupo B y C sigue siendo endémica en gran parte del mundo económicamente desarrollado. La incidencia de la enfermedad varía de <1/100.000 cuando la enfermedad es poco habitual hasta 200/100.000 en poblaciones de alto riesgo durante epidemias.

Se han desarrollado vacunas basándose en conjugados de polisacáridos frente a N. meningitidis serogrupos A y C y parecen ser eficaces en la prevención de la enfermedad. En la actualidad, está disponible una composición inmunogénica compuesta de polisacárido capsular de los serogrupos A, C, Y, y W-135. Ambrosch y col., 1983, Immunogenicity and side-effects of a new tetravalent. Bulletin of the World Health Organization 61 (2) : 317-23. Sin embargo, esta composición inmunogénica induce una respuesta inmunitaria independiente de linfocitos T, no es eficaz en niños pequeños y no proporciona cobertura para cepas de serogrupo B, que provocan más del 50 % de la enfermedad meningocócica.

Otros han intentado también desarrollar composiciones inmunogénicas usando polisacáridos capsulares. Recientemente, se han licenciado para su uso en Europa composiciones inmunogénicas para enfermedad de serogrupo C preparadas conjugando el material capsular de serogrupo C con proteínas. Sin embargo, la cápsula del serogrupo B puede no ser adecuada como un candidato a vacuna porque el polisacárido de la cápsula está compuesto de ácido polisiálico que tiene similitud con restos de carbohidratos en tejidos neurales humanos en desarrollo. Este resto de azúcar se reconoce como un autoantígeno y es por lo tanto poco inmunogénico en seres humanos.

Se han desarrollado proteínas de membrana (OMP) como antígenos de vacuna alternativos para enfermedad de serogrupo B. La unión de anticuerpo monoclonal con las dos regiones variables de PorA define el esquema de serosubtipación para meningococos. Las proteínas PorA actúa por lo tanto como los antígenos de serosubtipación (Abdillahi y col., 1988, Microbial Pathogenesis 4 (1) : 27-32) para cepas meningocócicas y se están investigando activamente como componentes de una composición inmunogénica del serogrupo B (Poolman, 1996, Adv. Exp.

Med. Biol. 397: 73-7) , ya que pueden inducir anticuerpos bactericidas (Saukkonen, 1987, Microbial Pathogenesis 3 (4) : 261-7) . Se cree que los anticuerpos bactericidas son un indicador de protección y cualquier nueva composición inmunogénica candidata debería inducir estos anticuerpos funcionales.

Los estudios en seres humanos así como animales indican que el antígeno de serosubtipación, PorA, induce anticuerpos bactericidas. Sin embargo, la respuesta inmunitaria a Por A es en general específica de serosubtipo. En particular, los datos de serosubtipación indican que una composición inmunogénica hecha de PorA puede requerir un PorA para cada serosubtipo para cubrir por dicha composición inmunogénica, quizás hasta de seis a nueve. Por lo tanto, serán necesarios 6-9 PorA para cubrir el 70-80 % de las cepas de serogrupo B. Por lo tanto, la naturaleza variable de esta proteína requiere una composición de vacuna multivalente para proteger frente a un número suficiente de aislados clínicos de serosubtipo meningocócicos.

El desarrollo de una composición inmunogénica para meningococos del serogrupo B ha sido tan difícil que recientemente varios grupos han secuenciado los genomas de cepas que representan ambos serogrupos A y B para ayudar a identificar nuevos candidatos a composiciones inmunogénicas. Tettelin, 2000, Science, 287 (5459) : 180915; Pizza y col., 2000, Science 287: 1816-1820. La identificación de nuevos candidatos a composición inmunogénica, incluso con el conocimiento del genoma de Neisseria, es un procedimiento difícil para el que no existen en la actualidad algoritmos matemáticos adecuados. De hecho, un informe reciente indica que a pesar de identificar cientos de fases abiertas de lectura (“ORF”) que contienen dominios transmembrana teóricos, los problemas con la expresión, purificación e inducción de anticuerpos tensioactivos y funcionalmente activos han conducido a los investigadores a solamente siete candidatos para una composición inmunogénica meningocócica de serogrupo B. Véase misma referencia. Uno de estos se conocía previamente.

El documento WO0044890 desvela polipéptidos y polinucleótidos de Neisseria meningitidis que codifican una proteína denominada BASB058 así como procedimientos para producir dichos polipéptidos por técnicas recombinantes. Las secuencias polinucleotídicas y polipeptídicas de BASB058 de Neisseria meningitidis de la cepa ATCC 13090 se desvelan en SEC ID Nº : 1 y SEC ID Nº : 2 respectivamente.

Martin D y col. (J Exp Med. 1997; 185 (7) :1173-83) desvela una proteína de superficie, denominada NspA, con una masa molecular aproximada de 22.000 y evalúa el potencial protector de la proteína NspA recombinante en ratones.

Tondella y col., (2000, J. Clin. Microbiol; 38 (9) :3323-3328) desvela la distribución de serosubtipos y serotipos de Neisseria meningitidis de Serogrupo B que circulan en los Estados Unidos. Tondella y col. desvela además PorA como un antígeno... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende al menos una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene identidad de secuencia mayor del 95 % con la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID Nº : 212, 214 y 216, en la que la composición comprende además al menos una proteína PorA.

2. La composición de la reivindicación 1 en la que dicha al menos una proteína comprende una secuencia de aminoácidos que tiene identidad de secuencia mayor del 97 % con la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID Nº : 212, 214 y 216.

3. La composición de la reivindicación 1, en la que dicha al menos una proteína comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de las SEC ID Nº : 212, 214 y 216.

4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que dicha al menos una proteína está lipidada.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que dicha al menos una proteína está no lipidada.

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que dicha al menos una proteína es una proteína recombinante.

7. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que dicha al menos una proteína es una proteína de fusión.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que dicha al menos una proteína está conjugada con un vehículo.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la que dicha composición comprende además un tampón, diluyente, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. La composición de la reivindicación 9, en la que dicho adyuvante es hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio.

11. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en la que composición comprende además otros inmunógenos activos.

12. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en la que la composición comprende además otros polipéptidos inmunogénicos de una especie de Neisseria.

13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en la que la composición comprende además al menos una PorB, proteína de unión a transferrina o proteína de opacidad (Opc) .

14. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en la que la composición comprende además al menos un antígeno de superficie adicional de una especie de Neisseria, siendo dicho antígeno de superficie adicional una proteína no ORF2086.

15. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, que comprende además un polisacárido.

16. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, que comprende además polisacáridos y/o conjugados de polisacáridos de meningococos de serogrupo A, C, Y y W 135.

17. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-16 para su uso como un medicamento.

18. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-16 para su uso como una vacuna.

19. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-16 para su uso en un procedimiento para inducir una respuesta inmunitaria en un mamífero.

20. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-16 para su uso en un procedimiento para mejorar o prevenir la infección por N. meningitidis en un ser humano.

21. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 para administración parenteral.

22. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 para administración subcutánea.

23. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 para administración intramuscular.