N-carboxialquil-auristatinas y su utilización.

Compuesto de la fórmula (I)**Fórmula**

en la cual

L representa (C1-C12)-alcanodiilo de cadena lineal,

el cual puede estar sustituido hasta cuatro veces con metilo y en el cual (a) dos átomos de carbono en relación 1,2-, 1,3- o 1,4 entre sí pueden formar un puente incluyendo los átomos de carbono que se encuentran eventualmente entre ellos para dar un anillo (C3-C6)-cicloalquilo o un anillo fenilo o (b) hasta tres grupos CH2 no vecinos entre si pueden estar sustituidos por -O-,

y

T representa un grupo de la fórmula**Fórmula**

en las cuales

* designa el lugar de unión con el átomo de nitrógeno,

R1 significa fenilo o 1H-indol-3-ilo,

y

R2 significa hidrógeno o un grupo de la fórmula**Fórmula**

en las cuales

** designa el correspondiente lugar de unión con el resto del respectivo grupo T , A representa un (C1-C4)-alcanodiilo de cadena lineal o un (C2-C4)-alquenodiilo de cadena lineal, R3 representa fenilo, el cual puede estar sustituido con (C1-C4)-alcoxicarbonilo o carboxilo, n representa el número 0, 1 o 2 ,

R4 representa fenilo, bencilo o 2-feniletilo, los cuales respectivamente en el grupo fenilo pueden estar sustituidos con (C1-C4-alcoxicarbonilo o carboxilo,

Het representa un anillo heteroarilo divalente de 5 miembros con hasta tres heteroátomos anulares de la serie N, O y/o S,

y

R5 representa (C3-C6)-cicloalquilo, fenilo o (C1-C4)-alquilo, el cual puede estar sustituido con fenilo, pudiendo estar sustituidos por su parte los mencionados grupos fenilo con (C1-C4)-alcoxicarbonilo o carboxilo, así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

N-carboxialquil-auristatinas y su utilización

La presente solicitud se refiere a nuevos derivados de monometilauristatina E y monometilauristatina F, sustituidos en el término N con un grupo carboxialquilo, a procedimientos para la preparación de estos derivados, a la utilización de estos derivados para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, así como a la utilización de estos derivados para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, especialmente de enfermedades hiperproliferativas y/o angiogénicas tales como, por ejemplo, enfermedades cancerígenas. Estos tratamientos se pueden efectuar como monoterapia o también en combinación con otros medicamentos u otras medidas terapéuticas.

Las enfermedades cancerígenas son la consecuencia de un crecimiento celular incontrolado de los tejidos más diversos. En muchos casos las nuevas células se introducen en tejidos ya existentes (crecimiento invasivo), o forman metástasis en órganos alejados. Las enfermedades cancerígenas aparecen en muy diversos órganos y tienen frecuentemente transcursos de la enfermedad específicos del tejido. Por lo tanto, la expresión enfermedad cancerígena describe como concepto principal un gran grupo de enfermedades cancerígenas definidas de diferentes órganos, tejidos y tipos celulares.

Los tumores en estadios tempranos se pueden eliminar eventualmente por medidas quirúrgicas y radioterapéuticas. Los tumores metastatizados se pueden tratar por lo regular por agentes quimioterapéuticos solo de forma paliativa. La finalidad en este caso es conseguir la combinación óptima de una mejora de la calidad de vida y de la prolongación del tiempo de vida.

La mayoría de los agentes quimioterapéuticos aplicados hoy en día parenteralmente no apuntan frecuentemente al tejido tumoral o a las células tumorales, sino que por la administración sistèmica se distribuyen en el cuerpo de forma no específica, es decir también en lugares en los cuales no es deseada una exposición del principio activo tal como, por ejemplo, en células, tejidos y órganos sanos. Esto puede llevar desde a efectos secundarios no deseados hasta a graves efectos en general tóxicos, los cuales limitan entonces fuertemente el margen de dosificación terapéuticamente útil del principio activo o exigen una renuncia total a la medicación.

La disponibilidad mejorada y selectiva de estos agentes quimioterapéuticos en la célula tumoral o en el tejido directamente circundante y, unido a ello, el incremento del efecto por un lado, y la minimación de efectos secundarios tóxicos, por otro lado, se sitúa por lo tanto desde hace varios años en el foco del desarrollo de nuevos agentes quimioterapéuticos. Se emprendieron entre tanto muchos ensayos para desarrollar métodos eficaces para la introducción de principios activos en la célula diana. Sin embargo, la optimación de la asociación entre principio activo y diana intracelular y la minimación de la distribución intracelular del principio activo, por ejemplo en células vecinas, representan tanto ahora como entonces un complicado problema.

Para la señalización dirigida de tejidos tumorales y células tumorales son adecuados, por ejemplo, anticuerpos monoclonales. El significado de tales anticuerpos para el tratamiento clínico de enfermedades cancerígenas ha crecido en general en los últimos años de manera considerable, en base a la eficacia de agentes tales como Trastuzumab (Herceptina), Rituximab (Rituxan), Cetuximab (Erbitux) y Bevacizumab (Avastina), los cuales entre tanto han sido admitidos para la terapia de algunas enfermedades tumorales específicas [véase, por ejemplo, G. P. Adams y L. M. Weiner, Nat. Biotechnol. 23, 1147-1157 (2005)]. Como consecuencia de esto, se ha incrementado también claramente el interés por los denominados inmunoconjugados, en los cuales un anticuerpo internalizante dirigido contra un antígeno asociado al tumor está unido de forma covalente a través de una unidad de enlazamiento ("linker") con un agente que actúa citotóxicamente, el cual después de la introducción y subsiguiente separación del conjugado dentro de la célula tumoral se libera y puede desarrollar allí su efecto directa y selectivamente. Por esta vía se podría mantener el daño del tejido normal en márgenes significativamente más estrechos en comparación con una quimioterapia convencional de la enfermedad cancerígena [véase, por ejemplo, J. M. Lambed, Curr. Opin. Pharmacol. 5, 543-549 (2005); A. M. Wu y P. D. Senter, Nat. Biotechnol. 23, 1137-1146 (2005); P. D. Senter, Curr. Opin. Chem. Biol. 13, 235-244 (2009); L. Ducry y B. Stump, Bioconjugate Chem. 21, 5-13 (2010)].

En lugar de anticuerpos se pueden utilizar también ligandos de la zona de moléculas pequeñas del principio activo, los cuales se unen selectivamente a un punto diana especial ("target"), como por ejemplo a un receptor [véase por ejemplo E. Ruoslahti et al., Science 279, 377-380 (1998); D. Karkan et al., PLoS ONE 3 (6), e2469 (Junio 25, 2008)]. También son conocidos los conjugados de principio activo citotóxico y ligando señalizante, los cuales presentan entre ligando y principio activo una lugar de corte definido para la liberación del principio activo. Un punto de "corte nominal" de este tipo puede consistir, por ejemplo, en una cadena peptídica, la cual en un punto determinado puede ser cortada en el lugar de actuación por un enzima selectivo [véase por ejemplo R. A. Firestone y L. A. Telan, Patente de aplicación de EE UU 2002/0147138].

La auristatina E (AE) y la monometilauristatina E (MMAE) son compuestos sintéticos análogos de las dolastatinas, de un grupo especial de pseudopéptidos lineales, los cuales se aislaron en un principio a partir de fuentes marinas y las cuales presentan en parte una actividad citotóxica muy potente frente a células tumorales [para un aspecto

genera! véase, porejempto, G. R. Pettit, Prog. Chem. Org. Nat. Prod. 70, 1-79 (1997); G. R. Pettit et a!., Anti-Cancer Drug Design 10, 529-544 (1995); G. R. Pettit et a!., Anti-Cancer Drug Design 13, 243-277 (1998)].

Auristatìna E (AE): R = CH3 Monometüauristatina E (MMAE): R = H

Sin embargo, MMAE tiene !a desventaja de una toxicidad sistèmica comparativamente eievada. Además, este compuesto en e! caso de una administración en forma de conjugados de anticuerpo-principio activo (¡nmunoconjugados) no es compatire con unidades de unión (Linker) entre anticuerpo y principio activo, que no presenten ningún !ugar nomina! de posibte corte enzimàtico [S. O. Doronina et a!., Bioconjugate Chem. 17, 114-124 (2006)].

La monometüauristatina F (MMAF) es un derivado de !a auristatìna con una unidad de fenüatanina C-term¡na!, que tan solo presenta un efecto anti-proüferatívo moderado en comparación con MMAE. Probabtemente, esto se puede atribuir al grupo carboxüo libre, el cual debido a su polaridad y carga influye negativamente sobre ¡a posibilidad de acceso a la célula de este compuesto. En reiación con esto, el éster metüico de MMAF (MMAF-OMe) fue descrito como un derivado prefármaco con carga neutra accesibte a la célula, e! cua! en comparación con MMAF presenta una citotoxicidad /n v/Yro aumentada varias veces frente a diferentes líneas ceiuiares de carcinoma [S. O. Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17,. 114-124 (2006)]. Cabe suponer que este efecto es provocado pore! propio MMAF, e! cual después de la absorción del profármaco en las células se libera rápidamente por hidrótisis intraceiuiarde! éster.

Monometüauristatina F (MMAF): R = H

Éster metílico de monometüauristatina F- (MMAF-OMe): R = CH3

Sin embargo, los compuestos de principios activos en base de simples derivados estéricos pueden correr e! riesgo en general de una inestabilidad química debido a una hidrólisis estérica no específica, independiente de! ¡ugar de acción previsto, por ejemplo por las esterasas existentes en el plasma sanguíneo; esto puede limitar daramente ¡a posibilidad de aplicación de estos compuestos en terapia. Además de esto, los derivados de auristatina taies como MMAE y MMAF son también sustratos para proteínas de transporte, las cuales son expresadas también por muchas células tumorales, lo cual puede llevar a desarrollar una resistencia a estos principios activos.

Misión de la presente invención era por lo tanto identificar nuevos derivados de auristatina y ponerlos a disposición para su utilización para el tratamiento de especialmente enfermedades cancerígenas, que presentaran una actividad citotóxica más potente en ensayos de células enteras frente a la monometüauristatina F (MMAF) só!o moderadamente efectiva y/o propiedades del sustrato para proteínas de transporte, menos acusadas. lates... [Seguir leyendo]

1. Compuesto de la fórmula (I)

(I)

en la cual

L representa (Ci-Ci2)-alcanodiilo de cadena lineal, el cual puede estar sustituido hasta cuatro veces con metilo y en el cual (a) dos átomos de carbono en relación 1,2-, 1,3- o 1,4 entre sí pueden formar un puente incluyendo los átomos de carbono que se encuentran eventualmente entre ellos para dar un anillo (C3-C6)-cicloalquilo o un anillo fenilo o (b) hasta tres grupos CH2 no vecinos entre si pueden estar sustituidos por -O-,

y

T representa un grupo de la fórmula

en las cuales

* designa el lugar de unión con el átomo de nitrógeno, significa fenilo o 1/-/-¡ndol-3-ilo,

y

R^ significa hidrógeno o un grupo de la fórmula

en las cuales

** designa el correspondiente lugar de unión con el resto del respectivo grupo T ,

A representa un (Ci-C4)-alcanodülo de cadena lineal o un (C2-C4)-alquenod¡¡lo de cadena lineal, representa fenilo, el cual puede estar sustituido con (Ci-C4)-alcoxicarbonilo o carboxilo, n representa el número 0, 1 o 2 ,

representa fenilo, bencilo o 2-feniletilo, los cuales respectivamente en el grupo fenilo pueden estar sustituidos con (Ci-C4-alcoxicarbonilo o carboxilo,

Het representa un anillo heteroarilo divalente de 5 miembros con hasta tres heteroátomos anulares de la serie N, O

y/o S,

y

R^ representa (C3-C6)-cicloalquilo, fenilo o (Ci-C4)-alquilo, el cual puede estar sustituido con fenilo, pudiendo estar sustituidos por su parte los mencionados grupos fenilo con (Ci-C4)-alcoxicarbonilo o carboxilo, así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

o

o

2. Compuesto de ¡a fórmula (!) según ¡a reivindicación 1, en !a cuai

L representa un (Ci-C8)-aicanodüio de cadena iinea!, en e! que (a) dos átomos de carbono en reiación 1,3 o 1,4 entre sí pueden formar un puente inciuyendo uno, respectivamente ios dos átomos de carbono situados entre eüos para dar un aniüo feniio o (b) hasta dos grupos CH2 no vecinos entre sí pueden estar reempiazados por -O-,

en ias cuaies

* designa e! iugarde unión con ei átomo de nitrógeno, significa feniio o 1H-indoi-3-iio,

y

significa hidrógeno o un grupo de ia fórmuia

^A-R'

** Ó

R'

en ias cuaies

** designa el lugar de unión con el resto del respectivo grupo T ,

A representa eteno-1,2-diilo ó propeno-3-dliio,

R^ representa feniio, el cual puede estar sustituido con (Ci-C4)-alcox¡carbonüo o carboxilo,

Het representa un anillo heteroarílico divalente de 5 miembros seleccionado de la serie pirazolílo, ¡midazoiiio, 1,3- oxazolilo, 1,3-tiazolilo, 1,2,4-oxadiazoliloy 1,3,4-oxadiazolilo,

y

R^ representa feniio, el cual puede estar sustiruido con (Ci-C4)-alcox¡carbon¡lo o carboxilo, así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

3. Compuesto de la fórmula (I) según la reivindicación 1 o 2, en la cual L representa un (C1-C6)- alcanodiilo lineal,

y

T representa un grupo de la fórmula

*

en la cua!

* designa e! iugarde unión con e! átomo de nitrógeno,

y

R^ significa hidrógeno o un grupo de la fórmuia

^AR"

**

ó

R

s

en tas cuates

** designa et tugar de unión con et radica) de) respectivo grupo T ,

A representa eteno-1,2-diito,

representa fenito, et cuat puede estar sustituido con metoxicarbonito o carboxito, Het representa 1,3,4-oxadiazo)-2,5-diito,

y

representa fenito, et cuat puede estar sustituido con metoxicarbonito o carboxito, así como sus sates, sotvatos y sotvatos de tas sates.

10 4. Compuesto según ta reivindicación 1, seteccionándose et compuesto de) grupo constituido por:

y

así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

5. Procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I), tal como se define en las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque un compuesto de la fórmula (II)

(ID,

en !a cua! T tiene e! significado indicado en ias reivindicaciones 1 a 3, se hace reaccionar en un disoivente inerte o bien

[A] por aiquiiación inducida por bases, con un compuesto de !a fórmuia (i i i)

en ta cuai L tiene ei significado indicado en ias reivindicaciones 1 a 3, representa hidrógeno, (Ci-C4)-a!quüo o benciio,

y

X representa un grupo volátil tal como, por ejemplo, cioruro, bromuro, yoduro, mesilato, triflato o tosilato, para dar un 10 compuesto de la fórmula (IV)

en la cual E\ L y T tienen el significado anteriormente indicado,

y, a continuación, en el caso en que E^ represente (Ci-C4)-alqu¡lo o benciio, este radical éster se separa según métodos habituales, de modo que igual que en el caso en que E^ en (III) representa hidrógeno, se obtiene el ácido 15 carboxílico de la fórmula (I) conforme a la invención

Fórmula (I)

(HI),

(IV),

en la cual L y T tienen el significado anteriormente indicado,

o

20 [B] por reacción con un compuesto de la fórmula (V)

E

en la cual

E^ representa hidrógeno, (Ci-C4)-alquilo o benciio,

y

E tiene el significado de L indicado definido en las reivindicaciones 1 a 3, sin embargo acortado en la longitud de la cadena alquílica poruña unidad CH2,

en presencia de un adecuado agente de reducción, se transforma en un compuesto de la fórmula (VI)

T

(V!),

en la cual E\ E y T tienen los significados anteriormente indicados,

y, a continuación, en el caso en que represente (Ci-C4)-alqu¡lo o bencilo, este radical áster se separa por métodos habituales, de modo que igualmente que en el caso en que E^ en (V) representa hidrógeno, se obtiene el ácido carboxílico de la fórmula (l-A) conforme a la invención,

en la cual E y T tienen los significados anteriormente indicados,

y los compuestos resultantes de la formular (I) respectivamente (l-A) se separan eventualmente en sus enantiómeros y!o diastereoisómeros y/o con los correspondientes disolventes (i) y/o bases o ácidos (¡i) se transforma en sus solvatos, sales y/o solvatos de las sales.

6. Compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 4, para su utilización para el tratamiento y!o prevención de enfermedades cancerígenas.

7. Compuesto tal como se define en las reivindicaciones 1 a 4, para su utilización en un procedimiento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades cancerígenas y tumorales.

8. Medicamento que contiene un compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 4, en combinación con uno o varios coadyuvantes inertes, no tóxicos, farmacéuticamente adecuados.

9. Médicamente que contiene un compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 4, en combinación con uno o varios principios activos ulteriores.

10. Medicamento según la reivindicación 8 o 9 para su utilización para el tratamiento y/o prevención de enfermedades cancerígenas o tumorales.

11. Conjugado antiproliferativo, en el cual un compuesto de una o varias de las reivindicaciones 1-4 está unido con una proteína.

12. Conjugado antiproliferativo según la reivindicación 12, en donde la proteína es un anticuerpo.

H,C" 'CH,

(I-A),