Molécula de anticuerpo mejorada contra el receptor de IL-6.

Un anticuerpo anti-receptor de IL-6 de uno cualquiera de:

(a) un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO:

20 (región variable de VH3-M73) y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 23 (región variable de VL3);

(b) un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 19 (región variable de VH4-M73) y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 22 (región variable de VL1); y

(c) un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 21 (región variable de VH5-M83) y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 24 (región variable de VL5).

Molécula de anticuerpo mejorada contra el receptor de IL-6 Campo técnico

La invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-receptor de IL-6 como se define en las reivindicaciones como principio activo, métodos para producir las composiciones y semejantes. Además, la divulgación se refiere generalmente a composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-receptor de IL-6 como principio activo, métodos para producir las composiciones y semejantes.

Técnica anterior

Los anticuerpos están llamando la atención como productos farmacéuticos, ya que son altamente estables en plasma y tienen pocos efectos adversos. Entre ellos, están disponibles varios productos farmacéuticos de anticuerpo tipo IgG en el mercado y muchos productos farmacéuticos de anticuerpo están actualmente en desarrollo (Documentos no de patente 1 y 2). La IL-6 es una citocina que participa en diversas enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias, tumores malignos, etc. (Documento no de patente 3). TOCILIZUMAB, un anticuerpo lgG1 anti-receptor de IL-6 humanizado, se une específicamente al receptor de IL-6. Se cree que TOCILIZUMAB puede usarse como agente terapéutico para enfermedades asociadas a IL-6 tales como artritis reumatoide, ya que neutraliza la actividad biológica de IL-6 (Documentos de patente 1 a 3 y Documentos no de patente 4 y 25). TOCILIZUMAB ha sido autorizado como agente terapéutico para enfermedad de Castleman y artritis reumatoide en Japón (Documento no de patente 5).

Los anticuerpos humanizados tales como TOCILIZUMAB son productos farmacéuticos de anticuerpos de primera generación. Los productos farmacéuticos de anticuerpos de segunda generación están siendo actualmente desarrollados mejorando la eficacia, conveniencia y coste de los productos farmacéuticos de anticuerpos de primera generación. Están siendo desarrolladas diversas tecnologías que son aplicables a los productos farmacéuticos de anticuerpos de segunda generación. Se ha informado de tecnologías para potenciar la función efectora, capacidad de unión al antígeno, farmacocinética y estabilidad, además de tecnologías para reducir el riesgo de inmunogenia (Documentos de patente 7 a 10). Para alterar la función del anticuerpo, especialmente modificaciones de aminoácidos han demostrado ser útiles (Documentos de patente 7, 10 y 11 y Documentos no de patente 26 y 27).

Como métodos para potenciar la eficacia del fármaco o reducir la dosificación se ha informado de tecnologías que potencian la actividad citotóxica mediada por célula dependiente de anticuerpo (actividad de ADCC) o actividad citotóxica dependiente del complemento (actividad CDC) mediante la sustitución de aminoácidos en la región Fe de un anticuerpo IgG (Documento no de patente 6). Además, se ha informado de la maduración por afinidad como una tecnología para potenciar la capacidad de unión al antígeno o capacidad de neutralización del antígeno (Documento no de patente 7). Esta tecnología permite potenciar la actividad de unión al antígeno introduciendo mutaciones de aminoácidos en la región determinante de la complementariedad (CDR) de una región variable o semejante. La potenciación de la capacidad de unión al antígeno mejora la actividad biológica in vitro o reduce la dosificación, y además mejora la eficacia in vivo (Documento no de patente 8). Actualmente, están siendo realizados ensayos clínicos para evaluar Motavizumab (producido por maduración por afinidad), que se espera tengan una eficacia superior a Palivizumab, un producto farmacéutico de anticuerpo anti-RSV de primera generación (Documento no de patente 9). Se ha informado de un anticuerpo anti-receptor de IL-6 con una afinidad de aproximadamente 0,05 nM (es decir, mayor afinidad que la de TOCILIZUMAB) (Documento de patente 4). Sin embargo, no hay informe que describa un anticuerpo humano, humanizado o quimérico que tenga una afinidad superior a 0,05 nM.

Un problema encontrado con los actuales productos farmacéuticos de anticuerpo es el alto coste de producción asociado a cantidades extremadamente grandes de proteína que va a administrarse. Por ejemplo, se ha estimado que la dosificación de TOCILIZUMAB, un anticuerpo lgG1 anti-receptor de IL-6 humanizado, es aproximadamente 8 mg/kg/mes mediante inyección intravenosa (Documento no de patente 4). Su forma preferida de administración es la formulación subcutánea en enfermedades autoinmunitarias crónicas. En general, es necesario que las formulaciones subcutáneas sean formulaciones de alta concentración. Desde la perspectiva de la estabilidad o semejantes, el límite para las formulaciones de anticuerpo tipo IgG es generalmente aproximadamente 100 mg/ml (Documento no de patente 10). Pueden proporcionarse productos farmacéuticos de anticuerpos de segunda generación convenientes de bajo coste que pueden administrarse subcutáneamente en intervalos más largos aumentando la semivida de un anticuerpo en el plasma para prolongar su efecto terapéutico y así reducir la cantidad de proteína que va a administrarse, y confiriendo al anticuerpo alta estabilidad.

El FcRn participa estrechamente en la farmacocinética de los anticuerpos. Con respecto a las diferencias en la semivida en plasma de los isotipos de anticuerpo, se sabe que lgG1 e lgG2 tienen semivida en plasma superior a lgG3 e lgG4 (Documento no de patente 11). Como un método para mejorar adicionalmente la semivida en plasma de anticuerpos lgG1 e lgG2 que tienen semividas en plasma superiores, se ha informado de la sustitución de aminoácidos en la región constante que potencia la unión a FcRn (Documentos no de patente 12 y 13). Desde el punto de vista de la inmunogenia,

la mejora adicional de la semivida en plasma se realiza sustituyendo aminoácidos preferentemente en la región variable en vez de en la región constante (Documento de patente 5). Sin embargo, no hay informes hasta la fecha sobre la mejora de la semivida en plasma de anticuerpos para el receptor de IL-6 mediante la alteración de la región variable.

Otro problema importante encontrado en el desarrollo de productos biofarmacéuticos es la inmunogenia. En general, la ¡nmunogenia de anticuerpos de ratón se reduce por la humanización de anticuerpos. Se supone que el riesgo de Inmunogenia puede reducirse adlclonalmente usando una secuencia de la región estructural de la línea germinal como molde en la humanización de anticuerpos (Documento no de patente 14). Sin embargo, incluso Adalimumab, un anticuerpo anti-TNF completamente humano, mostró alta frecuencia (13 % al 17 %) de inmunogenia, y se encontró que el efecto terapéutico se reducía en pacientes que mostraron inmunogenia (Documentos no de patente 15 y 16). Pueden estar presentes epítopos de linfocitos T incluso en la CDR de anticuerpos humanos, y estos epítopos de linfocitos T en CDR son una causa posible de inmunogenia. Se ha informado de métodos por ordenador e in vitro para predecir epítopos de linfocitos T (Documentos no de patente 17 y 18). Se supone que el riesgo de inmunogenia puede reducirse eliminando epítopos de linfocitos T predichos usando tales métodos (Documento no de patente 19).

TOCILIZUMAB, un anticuerpo lgG1 anti-receptor de IL-6 humanizado, es un anticuerpo lgG1 obtenido inmunizando el anticuerpo de ratón PM1. El injerto de CDR se lleva a cabo usando las secuencias NEW y REI humanas como región estructural de molde para las cadenas H y L, respectivamente; sin embargo, cinco aminoácidos de la secuencia de ratón son retenidos en la región estructural como aminoácidos esenciales para mantener la actividad (Documento no de patente 20). No hay informe previo que humanice completamente la secuencia de ratón restante en la región estructural del anticuerpo humanizado TOCILIZUMAB sin reducir la actividad. Además, la secuencia de CDR de TOCILIZUMAB es una secuencia de ratón, y así, como Adalimumab, puede tener epítopos de linfocitos T en la CDR, que pueden tener un posible riesgo de inmunogenia. En ensayos clínicos de TOCILIZUMAB, anticuerpos anti-TOCILIZUMAB no se detectaron a la dosis eficaz de 8 mg/kg, pero se observaron a las dosis de 2 mg/kg y 4 mg/kg (Documento de patente 6). Éstos sugieren que todavía puede mejorarse la inmunogenia de TOCILIZUMAB. Sin embargo, no ha habido informe sobre reducir el riesgo de inmunogenia de TOCILIZUMAB por la sustitución de aminoácidos.

El isotipo de TOCILIZUMAB es lgG1. La diferencia de isotipo se refiere a la diferencia en la secuencia de la región constante. Como se supone que la secuencia de la región constante tiene fuerte influencia sobre la función efectora, farmacocinética, propiedades físicas, etc., la selección de la secuencia de la región constante es muy importante para el desarrollo de productos farmacéuticos... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-receptor de IL-6 de uno cualquiera de:

(a) un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 20 (reglón variable de VH3-M73) y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ

ID NO: 23 (reglón variable de VL3);

(b) un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 19 (región variable de VH4-M73) y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 22 (región variable de VL1); y

(c) un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID

NO: 21 (región variable de VH5-M83) y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ

ID NO: 24 (región variable de VL5).

2. Un anticuerpo anti-receptor de IL-6 de uno cualquiera de:

(a) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 26 (VH3-M73) y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 29 (VL3);

(b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 25 (VH4-M73) y

una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 28 (VL1); y

(c) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 27 (VH5-M83) y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 30 (VL5).

3. Un gen que codifica el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2.

4. Un vector que lleva el gen de la reivindicación 3.

5. Una célula huésped que lleva el vector de la reivindicación 4.

6. Un método para producir el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2 cultivando la célula huésped de la reivindicación 5.

7. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2 o un anticuerpo producido por el método de la reivindicación 6.