Métodos y composiciones para modular c-met hiperestabilizado.

Un antagonista que inhibe la actividad de señalización de c-met de un polipéptido c-met hiperestabilizado humano,

donde el polipéptido c-met hiperestabilizado comprende una deleción en marco del exón 14, la deleción que elimina el sitio de fosforilación de Y1003, tal que la degradación del polipéptido está disminuida en comparación con c-met de tipo silvestre, y donde el polipéptido c-met hiperestabilizado tiene actividad de señalización de c-met, para el uso en un método para tratar un tumor que comprende c-met hiperestabilizado en un sujeto, donde dicho método comprende administrar dicho antagonista a un sujeto, por lo que se trata el tumor, donde el antagonista es

(i) un anticuerpo que se fija a un polipéptido c-met hiperestabilizado humano; o

(ii) un ARN inhibidor o un oligonucleótido antisentido que inhiben la expresión de una molécula de ácido nucleico que codifica el polipéptido c-met hiperestabilizado humano.

Métodos y composiciones para modular c-met hiperestabilizado Descripción

Solicitudes relacionadas

La presente solicitud es una solicitud no provisional presentada de conformidad con 37 CFR 1.53(b)(1), y reivindica prioridad de conformidad con 35 USC 119(e) para la solicitud provisional número 6/665.482 presentada el 25 de marzo de 25.

Campo técnico

La presente invención se refiere en general a los campos de la biología molecular y de la regulación de factor del crecimiento. Más específicamente, la invención se ocupa de moduladores de la vía de señales HGF/c-met y los usos de dichos moduladores.

Antecedentes

El HGF es un factor pleiotrófico derivado del mesénquima con actividades mitogénicas, motogénicas y morfogénicas sobre varios tipos celulares diferentes. Los efectos de HGF son mediados a través de una tirosinacinasa específica, c-met, y es frecuente observar la expresión aberrante de HGF y c-met en diversos tumores. Véase, p.ej., Maulik et al., Cytokine & Growth Factor Reviews (22), 13:41-59; Danilkovitch-Miagkova & Zbar, J. Clin. Invest. (22), 19(7):863-867. La regulación de la vía de señales HGF/c-Met está implicada en la progresión y la metástasis de tumores. Véase, p.ej., Trusolino & Comoglio, Nature Rev. (22), 2:289-3).

El HGF se fija al dominio extracelular de la tirosinacinasa del receptor Met (RTK) y regula diversos procesos biológicos tales como la dispersión, la proliferación y la supervivencia celular. La vía de señales HGF-Met es esencial para el desarrollo embrionario normal, especialmente en la migración de células progenitoras musculares y el desarrollo del hígado y del sistema nervioso (Bladt et al., Nature (1995), 376, 768-771.; Hamanoue et al., Faseb J (2), 14, 399-46; Maina et al., Cell (1996), 87, 531-542; Schmidt et al., Nature (1995), 373, 699-72; Uehara et al., Nature (1995), 373, 72-75). Los fenotipos de desarrollo de ratones KO Met y HGF son muy similares, lo cual sugiere que HGF es el ligando afín del receptor Met (Schmidt et al., 1995, supra; Uehara et al., 1995, supra). HGF- Met también desempeña un papel importante en la regeneración hepática, la angiogénesis y la cicatrización de heridas (Bussolino et al., J Cell Biol (1992), 119, 629-641; Matsumoto y Nakamura, Exs (1993), 65, 225-249; Nusrat et al., J Clin Invest (1994) 93, 256-265). El precursor de receptor Met sufre escisión proteolítica en una subunidad extracelular a y una subunidad p que atraviesa la membrana, unidas por enlaces disulfuro (Tempest et al., Br J Cáncer (1988), 58, 3-7). La subunidad p contiene el dominio de cinasa citoplasmático y aloja un sitio de unión de múltiples sustratos en el terminal, donde se fijan las proteínas adaptadoras e inician la transmisión de la señal (Bardelli etal., Oncogene (1997), 15, 313-3111; Nguyen etal., J Biol Chem (1997), 272, 2811-2819; Pelicci etal., Oncogene (1995), 1, 1631-1638; Ponzetto et al., Cell (1994), 77, 261-271; Weidner et al., Nature (1996), 384, 173- 176). Después de la fijación de HGF, la activación de Met conduce a la fosforilación de la tirosina y la transmisión de la señalización secuencia abajo por activación de PI3 cinasa y Ras/MAPK mediada por Gab1 y Grb2/Sos respectivamente, lo cual impulsa la movilidad y la proliferación celular (Furge et al., Oncogene (2), 19, 5582- 5589; Hartmann et al., J Biol Chem (1994), 269, 21936-21939; Ponzetto et al., J Biol Chem (1996), 271, 14119- 14123; Royal y Park, J Biol Chem (1995), 27, 2778-27787).

Se demostró que Met tenía comportamiento de transformación en una línea celular de osteosarcoma tratado con un carcinógeno (Cooper et al., Nature (1984), 311, 29-33; Park et al., Cell (1986), 45, 895-94). Se ha observado expresión excesiva o amplificación génica en diversos cánceres humanos. Por ejemplo, hay sobreexpresión en al menos cinco veces de la proteína Met en cánceres colonorectales y se ha informado que presenta amplificación génica en metástasis de hígado (Di Renzo et al., Clin Cáncer Res (1995), 1, 147-154; Liu et al., Oncogene (1992), 7, 181-185). También se ha informado que la proteína Met se expresa en exceso en carcinoma oral de células pavimentosas, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células renales, carcinoma de mama y carcinoma de pulmón (Jin et al., Cáncer (1997), 79, 749-76; Morello et al., J Cell Physiol (21), 189, 285-29; Natali et al., Int J Cáncer (1996), 69, 212-217; Olivero et al., Br J Cáncer (1996), 74, 1862-1868; Suzuki et al., Br J Cáncer (1996), 74, 1862- 1868). Además, se ha observado sobreexpresión de mARN en carcinoma hepatocelular, carcinoma gástrico y carcinoma colonorectal (Boix et al., Hepatology (1994), 19, 88-91; Kuniyasu et al., Int J Cáncer (1993), 55, 72-75; Liu et al., Oncogene (1992), 7, 181-185).

Se han hallado varias mutaciones en el dominio de cinasa de Met en carcinoma papilar renal, que conducen a la activación del receptor constitutivo (Olivero et al., Int J Cáncer (1999), 82, 64-643; Schmidt et al., Nat Genet (1997), 16, 68-73; Schmidt et al., Oncogene (1999), 18, 2343-235). Estas mutaciones activadoras causan fosforilación de la tirosina constitutiva de Met y dan por resultado la activación de MAPK, formación de foco y tumorigénesis (Jeffers et al., Proc Nati Acad Sci U S A (1997), 94, 11445-1145). Además, estas mutaciones incrementan la motilidad y la

invasión celular (Giordano et al., Faseb J (2), 14, 399-46; Lorenzato et al., Cáncer Res (22), 62, 725-73). La activación de Met dependiente de HGF en células transformadas media el incremento de la motllldad, la dispersión y la migración, que finalmente conducen a crecimiento tumoral invasivo y metástasis (Jeffers et al., Mol Cell Biol (1996), 16, 1115-1125; Melners et al., Oncogene (1998), 16, 9-2).

Se ha demostrado que Met ¡nteractúa con otras proteínas que impulsan la activación del receptor, la transformación y la invasión. En células neoplásicas, se ha informado que Met interactúa con a6p4 integrina, un receptor de componentes de la matriz extracelular (ECM) tales como lamininas, que promueve el crecimiento invasivo dependiente de HGF (Trusolino et al., Cell (21), 17, 643-654). Además, se ha demostrado que el dominio extracelular de Met ¡nteractúa con un miembro de la familia de semaforinas, plexina B1, e incentiva el crecimiento invasivo (Giordano et al., Nat Cell Biol (22), 4, 72-724). Por otra parte, también se ha informado que el CD44v6, implicado en la tumorigénesis y la metástasis, forma un complejo con Met y HGF, y da por resultado la activación de receptor Met (Orian-Rousseau et al., Genes Dev (22), 16, 374-386).

Met es miembro de la subfamilia de tirosinacinasas de receptor (RTK) que incluyen Ron y Sea (Maulik et al., Cytokine Growth Factor Rev (22), 13, 41-59). La predicción de la estructura del dominio extracelular de Met sugiere una homología compartida con las semaforinas y plexinas. El N-terminal de Met contiene un dominio Sema de aproximadamente 5 aminoácidos que está conservado en todas las semaforinas y plexinas. Las semaforinas y plexinas pertenecen a una gran familia de proteínas de secreción y unidas a membrana descritas por primera vez por su papel en el desarrollo neural (Van Vactor y Lorenz, Curr Bio (1999),19, R21-24). No obstante, más recientemente se ha correlacionado la expresión excesiva de semaforinas con invasión tumoral y metástasis. Un dominio PSI rico en cisteína (también denominado dominio de secuencia relacionada con Met) que se encuentra en plexinas, semaforinas e integrinas se ubica adyacente al dominio Sema, seguido de cuatro repeticiones IPT que son regiones símil ¡nmunoglobulina halladas en plexinas y factores de transcripción. Un estudio reciente sugiere que el dominio Sema de Met es suficiente para la fijación de HGF y heparina (Gherardi et al., Proc Nati Acad Sci U S A (23), 1(21): 1239-44).

Tal como se destacó antes, la tirosinacinasa de receptor Met es activada por su ligando afín HGF y la fosforilación del receptor activa las vías de MAPK, PI-3 cinasa y PLC-y (1, 2). La fosforilación de Y1234/Y1235 dentro del dominio cinasa es crítico para la activación de Met cinasa, mientras que Y1349 e Y1356 en el sitio de fijación de múltiples sustratos son importantes para la fijación de src de homología-2 (SH2), la fijación de fosfotirosina (PTB) y las proteínas del dominio de fijación de Met (MBD) (3-5), para mediar la activación de las vías de señalización secuencia abajo. Se ha caracterizado bien un sitio de fosforilación adicional de la yuxtamembrana, Y13, por su fijación al dominio fijador de tirosinacinasa (TKB) de Cb1 E3-ligasa (6, 7). Se ha informado que la fijación de Cb1 impulsa la endocitosis del receptor mediada por endofilina, la ubiquitinación y la posterior degradación del receptor (8). Este mecanismo de regulación... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista que inhibe la actividad de señalización de c-met de un polipéptido c-met hiperestabilizado humano, donde el polipéptido c-met hiperestabilizado comprende una deleción en marco del exón 14, la deleclón que elimina el sitio de fosforilación de Y13, tal que la degradación del polipéptido está disminuida en comparación con c-met de tipo silvestre, y donde el polipéptido c-met hiperestabilizado tiene actividad de señalización de c-met, para el uso en un método para tratar un tumor que comprende c-met hiperestabilizado en un sujeto, donde dicho método comprende administrar dicho antagonista a un sujeto, por lo que se trata el tumor, donde el antagonista es

(i) un anticuerpo que se fija a un polipéptido c-met hiperestabilizado humano; o

(¡i) un ARN inhibidor o un oligonucleótido antisentido que inhiben la expresión de una molécula de ácido nucleico que codifica el polipéptido c-met hiperestabilizado humano.

2. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el tumor es un tumor de pulmón.

3. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 2, donde el tumor es un tumor de cáncer de pulmón de

células no pequeñas (NSCLC).

4. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde la inhibición de la actividad de señalización de c-met del antagonista comprende aumentar la degradación celular de la proteína c-met hlperestablllzada.

5. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1 (i), donde el antagonista está unido a una toxina.

6. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el antagonista no inhibe sustancialmente la actividad de polipéptido c-met humano de tipo silvestre.

7. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el antagonista es un anticuerpo que no se fija específicamente al polipéptido c-met humano de tipo silvestre.

8. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el antagonista es un anticuerpo que se fija a

un epitopo formado por corte y empalme en marco del exón 13 y del exón 15 de c-met humano.

9. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el antagonista es un ARN inhibidor o un oligonucleótido antisentido que preferentemente inhibe la expresión de una molécula de ácido nucleico que codifica un variante de corte y empalme de c-met donde el exón 13 está cortado y empalmado con el exón 15.

1. El antagonista para el uso de acuerdo con reivindicación 1, donde el antagonista es un anticuerpo que es un anticuerpo monoclonal, fragmento de anticuerpo, anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado, anticuerpo humano, anticuerpo multiespecífico o anticuerpo monocatenario.

11. El antagonista para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el método comprende administrar el antagonista en conjunción con un agente que induce la degradación de la proteína del receptor.

12. Uso de un antagonista tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 4 a 1 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un tumor que comprende c-met hiperestabilizado en un sujeto.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, donde el tratamiento es tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 u 11.