Métodos para tratar la preeclampsia.

Un anticuerpo anti-Flt-1 soluble (sFlt-1) purificado o un fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este capaz de bloquear la unión de VEGF o P1GF,

para su uso el tratamiento o la prevención de la preeclampsia en un sujeto.

Métodos para tratar la preeclampsia Campo de la invención

En general, esta Invención se refiere a la detección y el tratamiento de sujetos que tienen preeclampsia o eclampsia. Antecedentes de la invención

La preeclampsla es un síndrome de hipertensión, edema y protelnuria que afecta al 5-10% de los embarazos y tiene como resultado una morbilidad y mortalidad fetal y materna sustancial. La preeclampsia es la responsable de al menos 200 000 muertes maternas en todo el mundo al año. Los síntomas de la preeclampsia típicamente aparecen después de la vigésima semana de embarazo y normalmente se detectan por un control rutinario de la presión sanguínea y la orina de la madre. Sin embargo, estos métodos de control son poco eficaces para diagnosticar el síndrome en una fase precoz, lo cual podría reducir el riesgo del sujeto o del feto en desarrollo, si estuviera disponible un tratamiento eficaz.

Actualmente no se conoce ninguna cura para la preeclampsla. La preeclampsia puede variar en gravedad de leve a potenclalmente mortal. Una forma leve de preeclampsla puede tratarse con reposo en cama y un control frecuente. Para los casos de moderados a graves, se recomienda hospitalización y se receta una medicación para tratar la presión sanguínea o medicaciones anticonvulsivas para prevenir ataques. Si la afección se transforma en potencialmente mortal para la madre o el bebé, se Interrumpe el embarazo y el bebé nace prematuro.

El desarrollo apropiado del feto y la placenta está mediado por varios factores de crecimiento. Uno de estos factores de crecimiento es el factor de crecimiento del endotello vascular (VEGF). El VEGF es un mltógeno específico de las células endotellales, un Inductor anglogénlco y un mediador de la permeabilidad vascular. También se ha demostrado que el VEGF es importante para la reparación de capilares glomerulares. El VEGF se une como un homodímero a uno de dos receptores tirosina qulnasa homólogos transmembrana, el receptor tlroslna qulnasa de tipo fms (Flt-1) y el receptor de dominio quinasa (KDR), que se expresan diferencialmente en células endotellales obtenidas a partir de muchos tejidos diferentes. El Flt-1 pero no el KDR, presenta una alta expresión en células del trofoblasto que contribuyen a la formación de la placenta. El factor de crecimiento placentarlo (P1GF) es un miembro de la familia del VEGF que también está Implicado en el desarrollo de la placenta. El P1GF se expresa por los citotrofoblastos y sincitiotrofoblastos y es capaz de inducir la proliferación, migración y activación de células endoteliales. El P1GF se une como un homodímero al receptor Flt-1, pero no al receptor KDR. Tanto el P1GF como el VEGF contribuyen a la actividad mitogénica y a la anglogénesls que son críticas para el desarrollo de la placenta.

Recientemente se identificó una forma soluble del receptor Flt-1 (sFlt-1) en un medio de cultivo de células endoteliales de vena umbilical humana y posteriormente se demostró la expresión in vivo en tejido placentario. El sFlt-1 es una variante de ayuste del receptor Flt-1 que carece de los dominios transmembrana y citoplásmico. El sFlt-1 se une al VEGF con alta afinidad, pero no estimula la mltogénesls de las células endoteliales. Se cree que el sFlt-1 actúa como una "fosa fisiológica" para regular negativamente la vía de señalización del VEGF. Por lo tanto, la regulación de los niveles del sFlt-1 actúan modulando el VEGF y las vías de señalización del VEGF. La regulación cuidadosa de las vías de señalización del VEGF y el P1GF es crítica para mantener una proliferación, migración y angiogénesis apropiadas por medio de las células del trofoblasto en la placenta en desarrollo. Existe la necesidad de métodos para diagnosticar de forma precisa a sujetos con riesgo de padecer o que tienen preeclampsia, particularmente antes del inicio de los síntomas más graves. También se necesita un tratamiento.

El artículo de Vuorela y colaboradores Amniotic Fluid-Soluble Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 in Preeclampsia (2000) 95 (3), 353-357 revela que la preeclampsla está asociada con altos niveles de sVEGFR, es decir, sFlt-1, en el fluido amniótico. Zhou y colaboradores en el artículo Vascular endothelial growth factor ligands and receptors that regúlate human cytotrophoblast survival are dysregulated in severe preeclampsia and hemolysis, elevated liver enzymes, and lowplatelets syndrome (2002) 160 (4), 1405-1423 describen que los citotrofoblastos de la placenta de mujeres con un grado elevado de preeclampsla liberan aproximadamente dos veces la cantidad de sFlt-1 en comparación con los controles.

Compendio de la Invención

Se ha descubierto un medio para diagnosticar y tratar de forma eficaz la preeclampsla y la eclampsia antes de que se presenten los síntomas.

Usando análisis de expresión de genes, hemos descubierto que los niveles del sFlt-1 están notablemente elevados en muestras de tejido placentario de mujeres embarazadas que padecen preeclampsia. Se sabe que el sFlt-1 antagoniza el VEGF y el P1GF actuando como una "fosa fisiológica" y, en mujeres preeclámpticas o eclámpticas, el sFlt-1 puede reducir en la placenta las cantidades necesarias de estos factores angiogénicos y mitogénicos esenciales. Un exceso de sFlt-1 también puede producir eclampsia rompiendo las células endoteliales que

mantienen la barrera hematoencefálica y/o las células endoteliales que revisten el plexo coroideo del cerebro, conduciendo de esta manera a un edema cerebral y a los ataques observados en la eclampsia. En la presente invención se administran compuestos que aumentan los niveles de VEGF y P1GF a un sujeto para tratar o prevenir la preeclampsia o la eclampsia contrarrestando los efectos del nivel elevado de sFlt-1. Además, se usan anticuerpos dirigidos contra sFlt-1 para inhibir competitivamente la unión de VEGF o P1GF a este sFlt-1, aumentando de esta manera los niveles de VEGF y P1GF libres. También se usan oligómeros de nucleobases antisentido y de interferencia con el ARN para reducir los niveles de sFlt-1. Finalmente, la presente invención proporciona el uso y el control de sFlt-1, VEGF y P1GF como herramientas de detección para un diagnóstico y tratamiento precoz de la preeclampsia o eclampsia, o una predisposición a esta.

Por consiguiente, en un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-Flt1 soluble (sFItl) purificado o un fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este capaz de bloquear la unión de VEGF o P1GF, para su uso en el tratamiento o la prevención de la preeclampsia en un sujeto, tal como se describe en las reivindicaciones adjuntas.

En un aspecto relacionado, la divulgación proporciona un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto por medio de la administración al sujeto de un compuesto (por ejemplo, nicotina, teofilina, adenosina, nifedipina, minoxidil o sulfato de magnesio) que aumenta el nivel de un factor de crecimiento capaz de unirse a sFIt- 1, donde la administración se realiza durante un periodo de tiempo y en una cantidad suficiente para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto.

En otro aspecto relacionado, la invención proporciona un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto por medio de la administración al sujeto de un anticuerpo sFlt-1 purificado o un fragmento de unión al antígeno de este durante un periodo de tiempo y en una cantidad suficiente para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto.

En otro aspecto relacionado, la divulgación proporciona un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto, administrando al sujeto un oligómero de nucleobases antisentido complementario a al menos una porción de una secuencia de ácido nucleico de sFlt-1 siendo la administración suficiente para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto. En una realización, el oligómero de nucleobases antisentido tiene una longitud de 8 a 30 nucleótidos.

En otro aspecto relacionado, la divulgación proporciona un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto. El método Implica la etapa de administrar a un sujeto un ARN de doble hélice (ARNds) que contiene al menos una porción de una secuencia de ácido nucleico de sFlt-1, siendo la administración suficiente para tratar o prevenir la preeclampsla o eclampsia en el sujeto. En una realización, el ARN de doble hélice se procesa en ARN de interferencia pequeño (ARNip) de 19 a 25 nucleótidos de longitud.

En diversas realizaciones de los aspectos anteriores, el compuesto candidato es un factor de crecimiento tal como el factor de crecimiento del endotello vascular (VEGF), Incluyendo todas las isoformas tales como VEGF189, VEGF121 o VEGF165;... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-Flt-1 soluble (sFlt-1) purificado o un fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este capaz de bloquear la unión de VEGF o P1GF, para su uso el tratamiento o la prevención de la preeclampsla en un sujeto.

2. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno de sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde

a) dicho anticuerpo inhibe competitivamente la unión del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) o factor de crecimiento placentario (P1GF) a sFlt-1, o

b) dicho anticuerpo se une a sFlt-1 y no se une a Flt-1.

3. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, donde dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humano o un anticuerpo humanizado.

4. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, donde dicho fragmento de unión al antígeno es un fragmento Fv, Fab, Fab', F(ab')2 o scFv.

5. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde dicho uso comprende además el uso de un fármaco antlhlpertensivo.

6. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde dicho fármaco antihipertensivo se selecciona entre el grupo compuesto por metlldopa, clorhidrato de hidralazina, labetalol, adenosina, nifedipina, minoxidil y sulfato de magnesio.

7. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde dicho sujeto es una mujer embarazada, una mujer después del parto o un animal no humano.

8. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde dicho anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno de este tiene una dosificación de aproximadamente 0.01 y aproximadamente 10 mg/kg de peso del sujeto.

9. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde dicha preeclampsia se caracteriza por unos mayores niveles de expresión del polipéptido sFlt-1 o el ácido nucleico de sFlt-1 en relación con una a muestra o un nivel de referencia normal.

10. El anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el tratamiento o la prevención comprende además

a) inhibir la unión de VEGF o P1GF a un polipéptido sFlt-1 en un sujeto con preeclampsla, donde dicho anticuerpo anti-sFlt-1 o fragmento de unión al antígeno sFlt-1 de este Inhibe competitivamente la unión de VEGF o P1GF a sFlt-1, o

b) reducir el nivel o la actividad biológica del polipéptido sFlt-1 en un sujeto con preeclampsia o una propensión a desarrollar preeclampsia.

11. El uso de un anticuerpo anti-Flt-1 soluble (sFlt-1) purificado o un fragmento de unión al antígeno sFlt-1 capaz de bloquear la unión de VEGF o P1GF a este, en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento o la prevención de la preeclampsia en un sujeto.