Método para diagnosticar preeclampsia.

Un método para diagnosticar, en una persona embarazada, preeclampsia o la propensión a desarrollarla,

comprendiendo dicho método medir el nivel del polipéptido sFlt-1 en una muestra de un sujeto, en donde dichamuestra es suero o plasma y comparar el nivel de sFlt-1 con el nivel de sFlt-1 en una muestra de referencia endonde un aumento en el nivel del polipéptido sFlt-1 en relación con dicha referencia es un diagnóstico indicador depreeclampsia o una propensión a desarrollar preeclampsia.

Método para diagnosticar preeclampsia Campo de la invención En general, esta invención se refiere a la detección y el tratamiento de sujetos que tienen preeclampsia o eclampsia.

Antecedentes de la invención La preeclampsia es un síndrome de hipertensión, edema y proteinuria que afecta al 5-10% de los embarazos y tiene como resultado una morbilidad y mortalidad fetal y materna sustancial. La preeclampsia es la responsable de al menos 200 000 muertes maternas en todo el mundo al año. Los síntomas de la preeclampsia típicamente aparecen después de la vigésima semana de embarazo y normalmente se detectan por un control rutinario de la presión sanguínea y la orina de la madre. Sin embargo, estos métodos de control son poco eficaces para diagnosticar el síndrome en una fase precoz, lo cual podría reducir el riesgo del sujeto o del feto en desarrollo, si estuviera disponible un tratamiento eficaz.

Actualmente no se conoce ninguna cura para la preeclampsia. La preeclampsia puede variar en gravedad de leve a potencialmente mortal. Una forma leve de preeclampsia puede tratarse con reposo en cama y un control frecuente. Para los casos de moderados a graves, se recomienda hospitalización y se receta una medicación para tratar la presión sanguínea o medicaciones anticonvulsivas para prevenir ataques. Si la afección se transforma en potencialmente mortal para la madre o el bebé, se interrumpe el embarazo y el bebé nace prematuro.

El desarrollo apropiado del feto y la placenta está mediado por varios factores de crecimiento. Uno de estos factores de crecimiento es el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) . El VEGF es un mitógeno específico de las células endoteliales, un inductor angiogénico y un mediador de la permeabilidad vascular. También se ha demostrado que el VEGF es importante para la reparación de capilares glomerulares. El VEGF se une como un homodímero a uno de dos receptores tirosina quinasa homólogos transmembrana, el receptor tirosina quinasa de tipo fms (Flt-1) y el receptor de dominio quinasa (KDR) , que se expresan diferencialmente en células endoteliales obtenidas a partir de muchos tejidos diferentes. El Flt-1 pero no el KDR, presenta una alta expresión en células del trofoblasto que contribuyen a la formación de la placenta. El factor de crecimiento placentario (P1GF) es un miembro de la familia del VEGF que también está implicado en el desarrollo de la placenta. El P1GF se expresa por los citotrofoblastos y sincitiotrofoblastos y es capaz de inducir la proliferación, migración y activación de células endoteliales. El P1GF se une como un homodímero al receptor Flt-1, pero no al receptor KDR. Tanto el P1GF como el VEGF contribuyen a la actividad mitogénica y a la angiogénesis que son críticas para el desarrollo de la placenta.

Recientemente se identificó una forma soluble del receptor Flt-1 (sFlt-1) en un medio de cultivo de células endoteliales de vena umbilical humana y posteriormente se demostró la expresión in vivo en tejido placentario. El sFlt-1 es una variante de ayuste del receptor Flt-1 que carece de los dominios transmembrana y citoplásmico. El sFlt-1 se une al VEGF con alta afinidad, pero no estimula la mitogénesis de las células endoteliales. Se cree que el sFlt-1 actúa como una "fosa fisiológica" para regular negativamente la vía de señalización del VEGF. Por lo tanto, la regulación de los niveles del sFlt-1 actúan modulando el VEGF y las vías de señalización del VEGF. La regulación cuidadosa de las vías de señalización del VEGF y el P1GF es crítica para mantener una proliferación, migración y angiogénesis apropiadas por medio de las células del trofoblasto en la placenta en desarrollo. Existe la necesidad de métodos para diagnosticar de forma precisa a sujetos con riesgo de padecer o que tienen preeclampsia, particularmente antes del inicio de los síntomas más graves. También se necesita un tratamiento.

Vuorela y colaboradores revelan que la preeclampsia está asociada con altos niveles de sVEGFR, es decir, sFlt-1 en el fluido amniótico durante el tercer trimeste (“Amniotic Fluid-Soluble Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 in Preeclampsia”, OBSTETRICS AND GYNECOLOGY, NUEVA YORK, NY, EE. UU., vol. 95, n.o 3., marzo de 2000 (2000-03) PÁGINAS 353-357) .

Zhou y colaboradores revelan que los citotrofoblastos presentes en la placenta de mujeres con un grado elevado de preeclampsia liberan aproximadamente dos veces la cantidad de sFlt-1 en comparación con los controles (“Vascular endothelial growth factor ligands and receptors that regulate human cytotrophoblast survival are dysregulated in severe preeclampsia and hemolysis, elevated liver enzymes, and low platelets syndrome”, AM J PATHOL, vol. 160,

n.o 4, abril de 2002 (2002-04) , páginas 1405-1423) .

Polliotti y colaboradores revelan que el suero P1GF materno durante el segundo trimestre es inferior en pacientes con preeclampsia que en controles (“Second-trimester maternal serum placental growth factor and vascular endothelial growth factor for predicting severe, early-onset preeclampsia”, OBSTETRICS AND GYNECOLOGY, NUEVA YORK, NY, EE. UU., vol. 101, n.º 6, junio de 2003 (2003-06) , páginas 1266-1274) .

Taylor y colaboradores revelan que los niveles de suero libre de P1GF disminuyen en pacientes con preeclampsia ni bien se alcanzan entre las 15-19 semanas de gestación (“Longitudinal serum concentrations of placental growth

factor: Evidence for abormal placental angiogenesis in pathologic pregnancies”, AMERICAN JOURNAL OF OBSTETRICS & GYNECOLOGY, MOSBY, SAN LUIS, MO, EE. UU., vol. 188, n.º 1, 1 de enero de 2003 (2003-0101) , páginas 177-182) .

Compendio de la Invención Se ha descubierto un medio para diagnosticar y tratar de forma eficaz la preeclampsia y la eclampsia antes de que se presenten los síntomas.

Usando análisis de expresión de genes, hemos descubierto que los niveles del sFlt-1 están notablemente elevados en muestras de tejido placentario de mujeres embarazadas que padecen preeclampsia. Se sabe que el sFlt-1 antagoniza el VEGF y el P1GF actuando como una "fosa fisiológica" y, en mujeres preeclámpticas o eclámpticas, el sFlt-1 puede reducir en la placenta las cantidades necesarias de estos factores angiogénicos y mitogénicos esenciales. Un exceso de sFlt-1 también puede producir eclampsia rompiendo las células endoteliales que mantienen la barrera hematoencefálica y/o las células endoteliales que revisten el plexo coroideo del cerebro, conduciendo de esta manera a un edema cerebral y a los ataques observados en la eclampsia. Se administran compuestos que aumentan los niveles de VEGF y P1GF a un sujeto para tratar o prevenir la preeclampsia o la eclampsia contrarrestando los efectos del nivel elevado de sFlt-1. Además, se usan anticuerpos dirigidos contra sFlt1 para inhibir competitivamente la unión de VEGF o P1GF a este sFlt-1, aumentando de esta manera los niveles de VEGF y P1GF libres. También se usan oligómeros de nucleobases antisentido y de interferencia con el ARN para reducir los niveles de sFlt-1. Finalmente, la presente invención proporciona el uso y el control de sFlt-1, VEGF y P1GF como herramientas de detección para un diagnóstico y tratamiento precoz de la preeclampsia o eclampsia, o una predisposición a esta.

Se describe un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto por medio de la administración al sujeto de un compuesto capaz de unirse a sFlt-1, donde la administración se realiza durante un periodo de tiempo y en una cantidad suficiente para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto.

En un aspecto relacionado, se describe un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto por medio de la administración al sujeto de un compuesto (por ejemplo nicotina, teofilina, adenosina, nifedipina, minoxidil o sulfato de magnesio) que aumenta el nivel de un factor de crecimiento capaz de unirse a sFlt-1, donde la administración se realiza durante un periodo de tiempo y en una cantidad suficiente para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto.

En otro aspecto relacionado, la invención proporciona un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto por medio de la administración al sujeto de un anticuerpo sFlt-1 purificado o un fragmento de unión al antígeno de este durante un periodo de tiempo y en una cantidad suficiente para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto.

En otro aspecto relacionado, se describe un método para tratar o prevenir la preeclampsia o eclampsia en un sujeto, administrando al sujeto un oligómero de nucleobases antisentido complementario a al menos una porción de una secuencia... [Seguir leyendo]

1. Un método para diagnosticar, en una persona embarazada, preeclampsia o la propensión a desarrollarla, comprendiendo dicho método medir el nivel del polipéptido sFlt-1 en una muestra de un sujeto, en donde dicha muestra es suero o plasma y comparar el nivel de sFlt-1 con el nivel de sFlt-1 en una muestra de referencia en donde un aumento en el nivel del polipéptido sFlt-1 en relación con dicha referencia es un diagnóstico indicador de preeclampsia o una propensión a desarrollar preeclampsia.

2. Un método para diagnosticar en una persona embarazada preeclampsia o una propensión a desarrollarla, midiendo los niveles de los polipéptidos sFlt-1, VEGF y P1GF en una muestra del sujeto en donde dicha muestra es suero o plasma, y calcular la relación entre dichos niveles de sFlt-1, VEGF o P1GF en una muestra del sujeto usando una métrica [sFlt-1/ (P1GF + VEGF) ], en donde un aumento en la relación entre dichos niveles en la muestra del sujeto en relación con una muestra de referencia, diagnostica preeclampsia o una propensión a desarrollar preeclampsia en dicho sujeto.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde un nivel de polipéptido sFlt superior a 2ng/ml es un indicador de diagnóstico de preeclampsia.

4. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicho sujeto está cursando el primer trimestre de embarazo.

5. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicho sujeto está cursando el segundo trimestre de embarazo.

6. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicho sujeto está cursando los comienzos del tercer trimestre de embarazo.

7. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicha medición se realiza usando un ensayo inmunológico.

8. El método de la reivindicación 7, en donde dicho ensayo inmunológico es un ELISA.

9. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicho sFlt-1 es el nivel de sFlt-1 libre, unido a sFlt-1 o sFlt-1 total.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5 o 6, en donde la muestra es suero.

11. Un método para diagnosticar, a una persona embarazada, preeclampsia o la propensión a desarrollarla, comprendiendo dicho método medir el nivel de la molécula de ácido nucleico de sFlt-1 en una muestra de dicho sujeto y compararla con una muestra de referencia, en donde dicha muestra del sujeto es suero o plasma y en donde un aumento en el nivel de ácido nucleico de sFlt-1 es un indicador de diagnóstico de preeclampsia o de la propensión a desarrollar preeclampsia.

12. El método de la reivindicación 1, 2 u 11, en donde dicha medición de los niveles se lleva a cabo en dos o más ocaciones y un cambio en dichos niveles entre las medidas es un indicador de diagnóstico de preeclampsia.

13. Un método para diagnosticar, en una persona embarazada, preeclampsia o una propensión a desarrollarla, comprendiendo dicho método medir el nivel de polipéptido P1GF libre en una muestra de suero o plasma de dicho sujeto en donde dicho sujeto está cursando el primer trimestre de embarazo y en donde una reducción estadísticamente significativa en el P1GF libre es un indicador de preeclampsia.

14. Un método para diagnosticar, en una persona emabarazada, preeclampsia, comprendiendo dicho método medir el nivel de P1GF libre y la creatinina en una muestra de orina de un sujeto, en donde una reducción en la relación de P1GF con la creatinina en la muestra en comparación con un control es un indicador de diagnóstico de preeclampsia.