Método para diagnosticar y tratar preeclampsia o eclampsia.

Un método para diagnosticar, en una persona embarazada, preeclampsia o eclampsia,

o la propensión a desarrollarlas, comprendiendo dicho método medir el nivel del receptor Flt-1 soluble (sFlt-1) y el factor de crecimiento placentario libre (PlGF) en una muestra de suero de dicha persona embarazada y que también comprende calcular la relación entre dicho nivel de sFlt-1 y PlGF libre utilizando una medición, donde dicha medición es sFlt-1/PlGF, donde:

(a) dicha preeclampsia o eclampsia es preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término;

(b) dicha persona tiene un embarazo de 21-32 semanas o está en el tercer trimestre de embarazo; o

(c) dicho método comprende además medir el nivel de PlGF libre en una muestra de orina de dicha persona embarazada.

Método para diagnosticar y tratar preeclampsia o eclampsia Campo de la invención En general, esta invención se refiere a la detección y el tratamiento de sujetos que tienen preeclampsia o eclampsia.

Antecedentes de la invención La preeclampsia es un síndrome de hipertensión, edema y proteinuria que afecta al 5-10% de los embarazos y tiene como resultado una morbilidad y mortalidad fetal y materna sustancial. La preeclampsia es la responsable de al menos 200 000 muertes maternas en todo el mundo al año. Los síntomas de la preeclampsia típicamente aparecen después de la vigésima semana de embarazo y normalmente se detectan por un control rutinario de la presión sanguínea y la orina de la madre. Sin embargo, estos métodos de control son poco eficaces para diagnosticar el síndrome en una fase precoz, lo cual podría reducir el riesgo del sujeto o del feto en desarrollo, si estuviera disponible un tratamiento eficaz.

Actualmente no se conoce ninguna cura para la preeclampsia. La preeclampsia puede variar en gravedad de leve a potencialmente mortal. Una forma leve de preeclampsia puede tratarse con reposo en cama y un control frecuente. Para los casos de moderados a graves, se recomienda hospitalización y se receta una medicación para tratar la presión sanguínea o medicaciones anticonvulsivas para prevenir ataques. Si la afección se transforma en potencialmente mortal para la madre o el bebé, se interrumpe el embarazo y el bebé nace prematuro.

El desarrollo apropiado del feto y la placenta está mediado por varios factores de crecimiento. Uno de estos factores de crecimiento es el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) . El VEGF es un mitógeno específico de las células endoteliales, un inductor angiogénico y un mediador de la permeabilidad vascular. También se ha demostrado que el VEGF es importante para la reparación de capilares glomerulares. El VEGF se une como un homodímero a uno de dos receptores tirosina quinasa homólogos transmembrana, el receptor tirosina quinasa de tipo fms (Flt-1) y el receptor de dominio quinasa (KDR) , que se expresan diferencialmente en células endoteliales obtenidas a partir de muchos tejidos diferentes. El Flt-1 pero no el KDR, presenta una alta expresión en células del trofoblasto que contribuyen a la formación de la placenta. El factor de crecimiento placentario (PlGF) es un miembro de la familia del VEGF que también está implicado en el desarrollo de la placenta. El PlGF se expresa por los citotrofoblastos y sincitiotrofoblastos y es capaz de inducir la proliferación, migración y activación de células endoteliales. El PlGF se une como un homodímero al receptor Flt-1, pero no al receptor KDR. Tanto el PlGF como el VEGF contribuyen a la actividad mitogénica y a la angiogénesis que son críticas para el desarrollo de la placenta.

Recientemente se identificó una forma soluble del receptor Flt-1 (sFlt-1) en un medio de cultivo de células endoteliales de vena umbilical humana y posteriormente se demostró la expresión in vivo en tejido placentario. El sFlt-1 es una variante de ayuste del receptor Flt-1 que carece de los dominios transmembrana y citoplásmico. El sFlt-1 se une al VEGF con alta afinidad, pero no estimula la mitogénesis de las células endoteliales. Se cree que el sFlt-1 actúa como una "fosa fisiológica" para regular negativamente la vía de señalización del VEGF. Por lo tanto, la regulación de los niveles del sFlt-1 actúan modulando el VEGF y las vías de señalización del VEGF. La regulación cuidadosa de las vías de señalización del VEGF y el PlGF es crítica para mantener una proliferación, migración y angiogénesis apropiadas por medio de las células del trofoblasto en la placenta en desarrollo. Existe la necesidad de métodos para diagnosticar de forma precisa a sujetos con riesgo de padecer o que tienen preeclampsia, particularmente antes del inicio de los síntomas más graves. También se necesita un tratamiento.

EP 1 664 797 A1 describe la detección de la preeclampsia.

WO 2004/008946 A describe métodos para diagnosticar y tratar la preeclampsia o la eclampsia.

VUORELA P. y colaboradores describen “Amniotic Fluid-Soluble Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 in Preeclampsia”, Obstetrics and Gynecology, vol. 95, n.o 3., marzo de 2000, páginas 353-357.

MAYNARD SHARON E. y colaboradores describen “Excess placental soluble fms-like tyrosine kinase 1 (sFlt1) may contribute to endothelial dysfunction, hypertension, and proteinuria in preeclampsia”. JOURNAL OF CLINICAL

INVESTIGATION, vol. 111., n.o 5, marzo de 2003, páginas 649-658.

HORNIG C. y colaboradores describen “release and complex formation of soluble VEGFR-1 from endothelial cells and biological fluids”, LABORATORY INVESTIGATION, UNITED STATES AND CANADIAN ACADEMY OF

PATHOLOGY, vol. 80, n. ° 4, abril de 2000, páginas 443-454.

TSATSARIS VASSILIS y colaboradores describen “Overexpression of the soluble vascular endothelial growth factor receptor in preeclamptic patients: Pathophysiological consequences”, JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY

& METABOLISM, vol 88, n.o 11, noviembre de 2003, páginas 5555-5563.

ZHOU Y. y colaboradores describen “Vascular endothelial growth factor ligands and receptors that regulate human cytotrophoblast survival are dysregulated in severe preeclampsia and hemolysis, elevated liver enzymes, and low platelets syndrome”, AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY, vol. 160, n.o 4, abril de 2002, páginas 1405-1423.

WO 02/37120 A describe el diagnóstico de la preeclampsia.

Compendio de la Invención Se ha descubierto un medio para diagnosticar y tratar de forma eficaz la preeclampsia y la eclampsia.

Usando análisis de expresión de genes, hemos descubierto que los niveles del sFlt-1 están notablemente elevados en muestras de tejido placentario de mujeres embarazadas que padecen preeclampsia. Se sabe que el sFlt-1 antagoniza el VEGF y el PlGF actuando como una "fosa fisiológica" y, en mujeres preeclámpticas o eclámpticas, el sFlt-1 puede reducir en la placenta las cantidades necesarias de estos factores angiogénicos y mitogénicos esenciales. Un exceso de sFlt-1 también puede producir eclampsia rompiendo las células endoteliales que mantienen la barrera hematoencefálica y/o las células endoteliales que revisten el plexo coroideo del cerebro, conduciendo de esta manera a un edema cerebral y a los ataques observados en la eclampsia.

También hemos descubierto que los niveles del P1GF en orina pueden utilizarse como herramienta diagnóstica para detectar la preeclampsia y la eclampsia, o bien la predisposición a padecerlas. La forma libre del PlGF tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 30 kDa y es lo suficientemente pequeña como para ser filtrada por el riñón y eliminada a través de la orina. El PlGF, cuando se une al sFlt-1, tiene un peso molecular notablemente mayor y, por lo tanto, no se elimina a través de la orina. Cuando los niveles del sFlt-1 aumentan, sFlt-1 puede unirse al PlGF, y de esta forma reducir los niveles de PlGF libre que se elimina por la orina. Por consiguiente, pueden utilizarse análisis de orina para detectar los niveles del PlGF libre a fin de diagnosticar la preeclampsia o la eclampsia o identificar si un paciente es propenso a padecerlas.

Los valores normales de concentración de PlGF en orina oscilan aproximadamente entre 400 y 800 pg/ml en la mitad del embarazo.

Por consiguiente, la invención proporciona:

(1) Un método para diagnosticar, en una persona embarazada, preeclampsia o eclampsia, o la propensión a desarollarlas, comprendiendo dicho método medir el nivel del receptor Flt-1 soluble (sFlt-1) y el factor de crecimiento placentario libre (PlGF) en una muestra de suero de dicha persona embarazada que también comprende calcular la relación entre dicho nivel de sFlt-1 y PlGF libre utilizando una medición, donde dicha medición es sFlt-1/PlGF, donde:

(a) dicha preeclampsia o eclampsia es preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término;

(b) dicha persona tiene un embarazo de 21-32 semanas o está en el tercer trimestre de embarazo; o

(c) dicho método comprende además medir los niveles de PlGF libre en una muestra de orina de dicha persona embarazada.

(2) El método de (1) , donde dicho valor de medición de sFlt-1/PlGF de dicha persona se compara con el valor de una referencia normal, y donde un aumento de dicho valor en dicha persona en comparación con dicho valor de dicha referencia normal arroja el diagnóstico para esa persona de sufrir preeclampsia o eclampsia,

o bien preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término, o la propensión a desarrollar estas afecciones.... [Seguir leyendo]

1. Un método para diagnosticar, en una persona embarazada, preeclampsia o eclampsia, o la propensión a desarrollarlas, comprendiendo dicho método medir el nivel del receptor Flt-1 soluble (sFlt-1) y el factor de crecimiento placentario libre (PlGF) en una muestra de suero de dicha persona embarazada y que también comprende calcular la relación entre dicho nivel de sFlt-1 y PlGF libre utilizando una medición, donde dicha medición es sFlt-1/PlGF, donde:

(a) dicha preeclampsia o eclampsia es preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término;

(b) dicha persona tiene un embarazo d.

2. 32 semanas o está en el tercer trimestre de embarazo; o

(c) dicho método comprende además medir el nivel de PlGF libre en una muestra de orina de dicha persona embarazada.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho valor de medición de sFlt-1/PlGF de dicha persona se compara con el valor de una referencia normal, y donde un aumento de dicho valor en dicha persona en comparación con dicho valor de dicha referencia normal arroja el diagnóstico para esa persona de sufrir preeclampsia o eclampsia, o bien preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término, o una propensión a desarrollar estas afecciones.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, donde una relación de sFlt-1/PlGF de al menos 5 arroja el diagnóstico para esa persona de sufrir preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término o una propensión a desarrollar preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho método comprende medir el nivel de PlGF libre en una muestra de orina de dicha persona embarazada.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, donde dicha medición de PlGF libre de dicha muestra de orina se realiza antes que dicha medición de sFlt-1 y PlGF libre de dicha muestra de suero.

6. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicha preeclampsia es preeclampsia antes de llegar a término.

7. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde dicha persona tiene un embarazo d.

2. 32 semanas.

8. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde la persona se encuentra en el tercer trimestre de embarazo.

9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicho PlGF es una isoforma de P1GF derivada de un empalme alternativo.

10. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicho sFlt-1 es el nivel de sFlt-1 libre, unido o total.

11. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicho sFlt-1 es una isoforma de sFlt-1 derivada de un empalme alternativo.

12. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicho nivel de sFlt-1 es el nivel de un subproducto polipeptídico de un polipéptido sFlt-1 que ha sido degradado o escindido enzimáticamente.

13. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2, 6, 9 o 10, donde dicha referencia es una muestra o nivel anterior de dicha persona.

14. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2, 6, 9 o 10, donde dicha referencia es una muestra tomada de una persona normal que está embarazada, pero que no tiene preeclampsia ni eclampsia ni es propensa a desarrollar preeclampsia o eclampsia.

15. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4, 5 o 6, donde dicha medición se realiza en dos o más ocasiones y una alteración en dicho valor de medición o dichos niveles de PlGF libre en orina entre mediciones es un indicador diagnóstico de preeclampsia o eclampsia.

16. El método de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicha preeclampsia o eclampsia antes de llegar a término ocurre antes de la semana 37 de embarazo.