Dispositivo y procedimiento de inspección de elementos en cajas de fusibles.

Dispositivo y procedimiento de inspección de elementos en cajas de fusibles.

La presente invención da a conocer un dispositivo (1) y procedimiento para verificar la correcta disposición de fusibles en una caja para fusibles (2) y, en consecuencia, su correcta conexión eléctrica. Dicho dispositivo (2) comprende una bandeja destinada a recibir cajas de fusibles y un mecanismo (10) de generación y lectura de dichas cajas en el que el mecanismo de generación y lectura de dichas cajas comprende:

a) una matriz de guía (100) dispuesta paralela sobre bandeja;

b) un generador de ondas; y

c) un lector de ondas;

en el que tanto el generador de ondas como el lector de ondas se encuentran conectados a la matriz de guía (100) con capacidad de desplazamiento entre al menos dos puntos de dicha matriz de guía (100).

Vacunas vivas atenuadas de Staphylococcus aureus.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Se proporcionan vacunas de bacterias vivas atenuadas de Staphylococcus aureus. También se 5 proporcionan los métodos por los que tales vacunas se pueden obtener.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Staphylococcus aureus (S. aureus) es un agente patogénico ubicuo que se considera parte de la microbiota normal del ser humano, de hecho se encuentra en la piel del individuo sano pero en ocasiones en que las defensas de la piel disminuyen puede causar enfermedad. El principal 10 grupo de riesgo son pacientes hospitalizados o inmunocomprometidos. A día de hoy, cerca de 2 mil millones de personas en el mundo han sido colonizadas por este microorganismo.

Los seres humanos son un reservorio natural de S. aureus. Entre el 30 y el 50% de los adultos sanos están colonizados, y entre el 10 y el 20% se mantienen colonizados persistentemente. Dicha colonización acontece de forma selectiva en los orificios nasales o narinas (20-40%, en 15 adultos) , pliegues intertriginosos, perineo, axilas y vagina. La colonización por S. aureus ocurre con tasas más elevadas en:

1. Personas con diabetes tipo 1;

2. usuarios de drogas intravenosas;

3. pacientes con hemodiálisis; 20

4. pacientes quirúrgicos; y en

5. personas con SIDA.

Los estafilococos se diseminan, normalmente, por la realización de actividades domésticas y comunitarias comunes tales como hacer la cama, vestirse o desvestirse y por determinados grupos humanos que constituyen verdaderos vectores biológicos. En este sentido, el personal 25 sanitario resulta uno de los principales vectores biológicos de diseminación de este tipo de bacteria. Los manipuladores de alimentos también favorecen la diseminación de S. aureus enterotoxigénicos, contribuyendo al desarrollo de intoxicaciones alimentarias.

Desde 1970 se ha detectado un incremento paulatino en la incidencia de infecciones nosocomiales por S. aureus. Así, durante el periodo de 1990 a 1992, S. aureus fue 30 considerado uno de los principales agentes etiológicos de neumonía adquirida en hospitales. Hoy en día se ha detectado un incremento considerable, probablemente debido a la presión antibiótica, de cepas de S. aureus con resistencia a diferentes fármacos antimicrobianos. Entre ellos el estafilococo resistente a meticilina y el estafilococo resistente a vancomicina. Por esta razón existe la necesidad de incrementar el arsenalprofiláctico y/o terapéutico existente frente a 35 esta bacteria.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona cepas bacterianas de S. aureus auxotrófas para D-alanina, útiles como vacunas en sujetos humanos, suficientemente avirulentas (atenuadas) como para evitar efectos patológicos inaceptables, sin sustancialmente ninguna probabilidad de revertir a 40 una cepa de tipo salvaje virulenta y capaces de inducir un nivel suficiente de inmunidad en el huésped como para inducir una protección aceptable frente a una infección por S. aureus en un sujeto humano.

Por lo tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un método in vitro para la producción de cepas vivas atenuadas de Staphylococcus aureus que comprende las siguientes etapas:

a. Proporcionar una cepa bacteriana de Staphylococcus aureus capaz de expresar alanina racemasa y D-aminoácido transaminasa, e 5

b. Inactivar al menos uno de los genes que codifican las enzimas alanina racemasas y los genes que codifican para la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que dicha inactivación resulte en que dicha cepa bacteriana sea auxotrófa para D- alanina.

En una realización preferida del primer aspecto de la invención, el método comprende la 10 inactivación del gen alr1 que codifica la enzima alanina racemasa 1 y del gen dat que codifica la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que la cepa bacteriana ya no sea capaz de expresar la alanina racemasa Alr1 funcional y la D-aminoácido transaminasa funcional Dat.

En otra realización preferida del primer aspecto de la invención, el método comprende la inactivación de los genes alr1 y alr2 que codifican las enzimas alanina racemasas y el gen dat 15 que codifica la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que la cepa bacteriana ya no sea capaz de expresar la alanina racemasa Alr1 funcional, la alanina racemasa Alr2 funcional y la D-aminoácido transaminasa funcional Dat.

Un segundo aspecto de la invención se refiere a una cepa viva atenuada de Staphylococcus aureus obtenida u obtenible mediante el método del primer aspecto de la invención o de 20 cualquiera de sus realizaciones preferidas.

Un tercer aspecto de la invención se refiere a una cepa viva atenuada de Staphylococcus aureus, caracterizada porque dicha cepa comprende inactivados uno o más genes que codifican la enzima alanina racemasa y los genes que codifican la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que la cepa bacteriana ya no sea capaz de expresar una alanina racemasa 25 funcional y una D-aminoácido transaminasa funcional, y en el que la inactivación de dichos genes resulte en que dicha cepa bacteriana sea auxotrófa para D- alanina.

En una realización preferida del tercer aspecto de la invención, dicha cepa se caracteriza por la inactivación de los loci alr1 y dat, preferiblemente de los loci alr1, alr2 y dat.

Un cuarto aspecto de la invención se refiere a una composición que comprende la cepa 30 bacteriana tal y como se ha definido ésta en el segundo o tercer aspecto de la invención o en cualquiera de sus realizaciones preferidas. Preferiblemente, dicha composición es una composición farmacéutica que opcionalmente comprende vehículos farmacéuticamente aceptables así como excipientes y/o otros principios activos, más preferiblemente dicha composición es una vacuna que opcionalmente comprende vehículos farmacéuticamente 35 aceptables así como excipientes, adyuvantes y/o otros principios activos. Los adyuvantes, excipientes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son portadores conocidos por los expertos en la técnica. Las composiciones proporcionadas por esta invención se pueden facilitar a través de cualquier vía de administración, para lo cual dicha composición se formulará en la forma de dosificación 40 adecuada y con los excipientes que son farmacológicamente aceptables para la vía de administración elegida.

Un quinto aspecto de la invención se refiere a la composición del cuarto aspecto de la invención, para su uso en terapia.

Un sexto aspecto de la invención se refiere al uso de la cepa bacteriana tal y como se ha 45 definido ésta en el segundo o tercer aspecto de la invención o en cualquiera de sus realizaciones preferidas, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento profiláctico frente a una infección por Staphylococcus aureus en un mamífero. Alternativamente, el sexto aspecto de la invención se refiere a la cepa bacteriana tal y como se ha definido ésta en el segundo o tercer aspecto de la invención o en cualquiera de sus realizaciones preferidas, para su uso en el tratamiento profiláctico frente a una infección por Staphylococcus aureus en un mamífero, preferiblemente en un humano. 5

Un séptimo aspecto de la invención se refiere a un anticuerpo o fragmento del mismo seleccionado del grupo que consiste en F (ab') 2, Fab', Fab, Fv, "r IgG" y Fc, obtenido u obtenible tras la inmunización de un mamífero con la bacteria viva atenuada auxótrofa para D-alanina tal y como se ha definido ésta en el segundo o tercer aspecto de la invención o en cualquiera de sus realizaciones preferidas. 10

Un octavo aspecto de la presente invención se refiere al uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos del séptimo aspecto de la invención, para la elaboración de un medicamento para su uso en una terapia de inmunización pasiva frente a Staphylococcus aureus en un mamífero, preferiblemente en un sujeto humano. Alternativamente, el octavo aspecto de la invención se refiere a los anticuerpos o fragmentos de los mismos del séptimo aspecto de la 15 invención, para su uso en una terapia de inmunización pasiva frente a Staphylococcus aureus en un mamífero, preferiblemente en un sujeto humano.

Un noveno aspecto de la presente invención se refiere al uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos del séptimo aspecto de la invención, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento terapéutico (tras la manifestación clínica de la infección) de una infección de 20 Staphylococcus aureus en un mamífero, preferiblemente en un sujeto humano. Alternativamente, el noveno aspecto de la invención se refiere a los anticuerpos o...

1. Un método in vitro para la producción de cepas vivas atenuadas de Staphylococcus aureus que comprende las siguientes etapas:

a. Proporcionar una cepa bacteriana de Staphylococcus aureus capaz de expresar alanina racemasa y D-aminoácido transaminasa, e 5

b. Inactivar al menos uno de los genes que codifican la enzimas alanina racemasa y los genes que codifican para la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que dicha inactivación resulte en que dicha cepa bacteriana sea auxótrofa para D- alanina.

2. El método de la reivindicación 1, en el que el método comprende la inactivación del gen 10 alr1 que codifica para la enzima alanina racemasa y el gen dat que codifica para la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que la cepa bacteriana ya no sea capaz de expresar la alanina racemasa Alr1 funcional y la D-aminoácido transaminasa funcional Dat.

3. El método de la reivindicación 1, en el que el método comprende la inactivación de los 15 genes alr1 y alr2 que codifican las enzimas alanina racemasas y el gen dat que codifica la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que la cepa bacteriana ya no sea capaz de expresar la alanina racemasa Alr1 funcional, la alanina racemasa Alr2 funcional y la D-aminoácido transaminasa funcional Dat.

4. Una cepa viva atenuada de Staphylococcus aureus, caracterizada porque dicha cepa 20 comprende inactivados uno o más genes que codifican la enzima alanina racemasa y los genes que codifican la D-aminoácido transaminasa, de tal manera que la cepa bacteriana ya no sea capaz de expresar una alanina racemasa funcional y una D-aminoácido transaminasa funcional, y en el que la inactivación de dichos genes resulte en que dicha cepa bacteriana sea auxótrofa para D- alanina. 25

5. La cepa viva atenuada de Staphylococcus aureus de la reividicación 4, en el que dicha cepa se caracteriza por la inactivación de los loci alr1 y dat.

6. La cepa viva atenuada de Staphylococcus aureus de la reividicación 4, en el que dicha cepa se caracteriza por la inactivación de los loci alr1, alr2 y dat.

7. Una composición que comprende la cepa bacteriana tal y como se ha definido ésta en 30 cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.

8. Una composición farmacéutica que comprende la cepa bacteriana tal y como se ha definido ésta en cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.

9. Uso de la cepa bacteriana tal y como se ha definido ésta en cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 o cualquiera de las composiciones de las reivindicaciones 7 o 8, 35 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento profiláctico frente a una infección por Staphylococcus aureus en un mamífero.

10. Uso de la cepa bacteriana tal y como se ha definido ésta en cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 o cualquiera de las composiciones de las reivindicaciones 7 o 8, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento profiláctico frente a una 40 infección por Staphylococcus aureus en un sujeto humano.

11. Un anticuerpo o fragmento del mismo seleccionado del grupo que consiste en F (ab') 2, Fab', Fab, Fv, "r IgG", Fc, obtenido u obtenible tras la inmunización de un mamífero con la bacteria viva atenuada auxótrofa para D-alanina tal y como se ha definido ésta en cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6. 45

12. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos de la reivindicación 11, para la elaboración de un medicamento para su uso en una terapia de inmunización pasiva frente a Staphylococcus aureus.