Compuestos derivados de furoxano para óxido nítrico dotados de actividad antitumoral.

Compuestos seleccionados de los siguientes:**Fórmula**

Compuestos derivados de furoxano para óxido nítrico dotados de actividad antitumoral

Campo de la invención La presente invención está relacionada con el campo de la medicina; en particular, se refiere a nuevos compuestos derivados de furoxano que pueden inhibir algunas rutas metabólicas implicadas en el desarrollo tumoral.

Antecedentes El cáncer de próstata es la segunda causa principal de mortalidad relacionada con tumores malignos en hombres en el mundo occidental. Aunque la prostatectomía radical y la radioterapia local son en gran medida satisfactorias para pacientes con cáncer localizado, los tratamientos disponibles para el carcinoma de próstata metastásico (PCa) han demostrado débil eficacia curativa. Por tanto, es necesario encontrar enfoques terapéuticos alternativos para el cáncer de próstata metastásico que no responde a hormonas. La inmunoterapia puede proporcionar una terapia alternativa válida para pacientes con PCa metastásico que no responde a hormonas. El éxito de este enfoque depende de la capacidad de las células T citotóxicas para eliminar células tumorales. Sin embargo, si el entorno del tumor ejerce una acción supresora sobre los linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) específicos de antígeno, la inmunoterapia logrará poco éxito, si logra alguno. Por tanto, es primordial entender la biología celular de TIL y la modulación de las respuestas de TIL por el entorno del tumor.

El papel del entorno del tumor de próstata en la modulación de la respuesta de células T se ha analizado con un estudio basado en el uso de cultivos de órganos soportados por matriz de gel de colágeno de PCa humano. La ventaja de usar esta técnica es que el microentorno permanece intacto y que se preservan todos los factores que pueden afectar a las funciones de TIL, tales como interacción célula-célula, interacción soportada por matriz celular y líquido intersticial. Este enfoque innovador para la biología de TIL permitió obtener varios nuevos hallazgos importantes.

En principio, las muestras de PCa con infiltración de TIL son principalmente linfocitos T CD8+ con un fenotipo terminalmente diferenciado, con experiencia antigénica (CD8+ CD45RA+ CD62L-CCR7-) , positivos para perforina y por tanto que pueden eliminar células cancerosas; sin embargo, están en estado latente puesto que no expresan marcadores de activación tales como CD25, CD69 y CD137. Además, a diferencia de los linfocitos que responden normalmente en sangre periférica y próstatas libres de tumor, los TIL no se activan localmente por señales potentes 35 que actúan o bien sobre TCR o bien en rutas de señalización posteriores, lo que indica una deficiencia restringida al tumor. Además, cada vez hay más evidencias de que las enzimas arginasa (ARG) y óxido nítrico sintasa (NOS) están sobreexpresadas en PCa en comparación con la próstata hiperplásica, con la interesante observación de que las propias células tumorales más que las células mielodes infiltrantes podrían ser la fuente principal de las enzimas. Los resultados indican que la regulación en estado estacionario del estado latente depende del metabolismo intratumoral potenciado del aminoácido L-arginina (L-Arg) , puesto que la simple adición de inhibidores específicos de ARG y NOS fue suficiente para estimular estos CTL, activarlos y comenzar varios acontecimientos que condujeran a polarización de gránulos citolíticos y eliminación de dianas relacionadas. Además, también se ha demostrado la presencia de altos niveles de nitrotirosinas en los TIL, lo que sugiere una producción local de peroxinitritos, posiblemente debido a las actividades de ARG y NOS, puesto que al inhibir la actividad de las enzimas también se 45 logró una nitración de tirosina reducida.

Estos resultados identifican un mecanismo mediante el cual el cáncer de próstata humano induce inmunosupresión in situ. Por tanto, un fármaco que controle la generación de especies reactivas de nitrógeno (RNS) podría ser útil para contribuir a los enfoques inmunoterápicos para el tratamiento del cáncer, creando un entorno del tumor favorable para la activación de linfocitos (Bronte et al., 2005) .

Los resultados de ensayos clínicos han demostrado que la eficacia de diferentes enfoques inmunoterápicos no es adecuada para una transferencia inmediata y generalizada de este enfoque terapéutico novedoso para pacientes con cáncer. Un concepto nuevo importante es que el metabolismo alterado presente en el microentorno del tumor

puede tener un profundo impacto sobre la actividad antitumoral. Teniendo en cuenta los resultados mencionados anteriormente, está claro que los fármacos que controlan la generación de especies reactivas de nitrógeno (RNS) podrían potenciar significativamente el impacto de los enfoques inmunoterápicos para el tratamiento del cáncer. Por consiguiente, la presente invención proporciona nuevos compuestos de furoxano que actúan sobre los mecanismos del desarrollo tumoral.

Sumario de la invención Teniendo en cuenta la estricta relación entre las enzimas ARG, NOS y ciclooxigenasa, todas ellas sobreexpresadas en células de cáncer de próstata en comparación con el epitelio de próstata normal, la presente invención se refiere 65 a moléculas pequeñas novedosas que interfieren con rutas metabólicas múltiples e interconectadas. A diferencia de los adyuvantes convencionales, tales como citocinas y activadores de células presentadoras de antígeno, que se

caracterizan por una amplia acción sobre el sistema inmunitario, falta de selectividad y efectos secundarios potencialmente importantes, las moléculas de la presente invención potencian la función de linfocitos antitumorales efectores o bien presentes de manera espontánea, provocados en pacientes tras vacunación, o bien inyectados a través de un protocolo de inmunoterapia adoptiva.

Objeto de la invención En un primer objeto, la presente invención se refiere a N-óxidos de 1, 2, 5-oxadiazol según la reivindicación 1.

En una segunda realización, la presente invención se refiere a los compuestos de la invención para su uso como medicamento según la reivindicación 2 y, como realización preferida, a su uso como medicamentos para la terapia de patologías caracterizadas por la generación de especies reactivas de nitrógeno, según la reivindicación 3 y 4.

Como realización preferida, son para su uso para el tratamiento del cáncer de próstata, según la reivindicación 5.

Como tercera realización, la invención se refiere a una preparación farmacéutica que comprende los compuestos de la invención, según las reivindicaciones 7 y 8.

En una realización adicional, la presente invención se refiere al uso de los compuestos de la invención como 20 adyuvante en los protocolos inmunoterápicos contra el cáncer según la reivindicación 6.

Breve descripción de las figuras La figura 1 muestra los resultados del ensayo de proliferación. 25 La figura 2 muestra los resultados del ensayo de cromo.

La figura 3 muestra un gráfico del análisis inmunohistoquímico.

La figura 4 muestra los resultados de los experimentos in vivo sobre el compuesto AT38.

Descripción detallada de la invención En una primera realización, la presente invención se refiere a nuevos compuestos de furoxano. 35 En particular, los compuestos de la invención son los de las fórmulas siguientes:

SÍNTESIS DE COMPUESTOS SELECCIONADOS DE LA INVENCIÓN Procedimiento general para la preparación de ésteres benzoicos de 4- (hidroximetil) furoxan-3-carboxamida.

A una suspensión con agitación de KF (3 mmol) y 4- (bromometil) furoxan-3-carboxamida (1 mmol) en DMF seca (10 ml) , se le añadió el ácido benzoico apropiado (1 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Entonces se añadió agua (30 ml) y se extrajo la mezcla resultante con EtOAc (3 x 10 ml) . Se lavaron las fase orgánicas combinadas con disolución de NaHCO3 al 10% (2 x 10 ml) , salmuera (1 x 10 ml) y luego se secaron sobre MgSO4. Se eliminó el disolvente a presión reducida para dar un sólido blanco que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando los eluyentes notificados.

Se obtuvieron muestras analíticas mediante cristalización con disolventes apropiados.

1) Benzoato de [3- (aminocarbonil) furoxan-4-il]metilo Eluyente: PE 7 / EtOAc 3; rendimiento: 80%. P.f.: 163-165ºC (H2O / iPrOH) . 1H-RMN (DMSO-d6) : δ, 8, 51 (sa, 1H, -CONH2) ; 8, 01 (d, 2H, Ph) ; 7, 82 (sa, 1H, -CONH2) ; 7, 70 (t, 1H, Ph) ; 7, 56

(t, 2H, Ph) ; 5, 63 (s, 2H, -OCH2-Fx) . 13C-RMN (DMSO-d6) : δ, 164, 9; 155, 6; 154, 7; 133, 7; 129, 2; 128, 9; 128, 7; 110, 3; 57, 4.

Masa (CI) (m/z) : 264 [MH+]. Anal. Calc. para C11H9N3O5 C%... [Seguir leyendo]

1. Compuestos seleccionados de los siguientes:

2. Compuestos según la reivindicación 1, para su uso como medicamento.

3. Compuestos según la reivindicación 1 ó 2, para su uso como medicamento para la terapia de patologías caracterizadas por la generación de especies reactivas de nitrógeno.

4. Compuestos para su uso según la reivindicación 3, en los que dichas patologías comprenden neoplasia, enfermedades inflamatorias o infecciones crónicas.

5. Compuestos para su uso según la reivindicación 4, para el tratamiento del cáncer de próstata.

6. Compuestos para su uso según la reivindicación 5, como adyuvante en los protocolos inmunoterápicos contra el cáncer.

7. Preparación farmacéutica que comprende uno o más de los compuestos según la reivindicación 1.

8. Preparación farmacéutica según la reivindicación 7, que comprende además excipientes y aditivos seleccionados del grupo que comprende diluyentes, disolventes, agentes de carga, cargas, modificadores reológicos, estabilizadores, aglutinantes, lubricantes, disgregantes, conservantes, agentes de ajuste del pH, tampones, antioxidantes, agentes quelantes, plastificantes, polímeros, emulsionantes, edulcorantes, agentes aromatizantes; solos o en combinación de los mismos.