Composición para la prevención/el tratamiento de infecciones con HBV y de enfermedades mediadas por HBV.

Uso de una composición, que contiene al menos dos antígenos de superficie del virus de hepatitis B (HBsAg's),

fragmentos de los mismos, que contienen un epítope de célula T, en cuyo caso los fragmentos de los al menos dos HBsAgs tienen conjuntamente al menos 10 aminoácidos, aunque en se diferencian uno de otro al menos por un aminoácido, y/o estos ácidos nucleicos codificantes, en cuyo caso los HBsAgs se componen de la proteína S (pequeño antígeno de superficie de HBV) y en cuyo caso los HBsAgs se diferencian en el genotipo del virus de hepatitis B (HBV) en la región S de HbsAg, y en cuyo caso la composición no contiene antígeno de núcleo de HBV (HBcAg) o este ácido nucleico codificante, para la producción de un medicamento para el tratamiento terapéutico de una infección con HBV o una enfermedad mediada por HBV.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2004/009590.

Solicitante: RHEIN BIOTECH GESELLSCHAFT FUR NEUE BIOTECHNOLOGISCHE PROZESSE UND PRODUKTE MBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: EICHSFELDER STRASSE 11 40595 DÜSSELDORF ALEMANIA.

Inventor/es: MELBER, KARL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/29 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Virus de la hepatitis.
  • A61K39/295 A61K 39/00 […] › Antígenos virales polivalentes (virus de la viruela o de la varicela A61K 39/285 ); Mezclas de antígenos virales y bacterianos.
  • C07K14/02 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Hepadnaviridae, p. ej. virus de la hepatitis B.
  • C12N15/51 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Virus de la hepatitis.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12N15/85 C12N 15/00 […] › para células animales.
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2541123_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Composición para la prevención/el tratamiento de infecciones con HBV y de enfermedades mediadas por HBV

La presente invención se refiere a composiciones que contienen al menos dos antígenos de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAgs), fragmentos de los mismos y/o ácidos nucleicos que los codifican, en las cuales los HBsAgs se distinguen en el genotipo de virus de hepatitis B (HBV) en la región S y/o la región Pre-S1 de HBsAg, en cuyo caso la composición no contiene antígeno de núcleo de HBV (HBcAg) o ácido nucleico que codifique a éste; a composiciones farmacéuticas, principalmente vacunas que contienen estas composiciones y a su uso para la prevención/el tratamiento de una infección con HBV o de una enfermedad mediada por HBV. La presente invención se refiere además a un método para preparar un medicamento específico para un paciente para el tratamiento terapéutico de hepatitis.

Más de 25 millones de personas en todo el mundo están infectadas con el virus de la hepatitis B (HBV). Una parte significativa de los infectados muestra consecuencias patológicas, incluidas la insuficiencia hepática crónica, cirrosis y carcinoma hepatocelular (HCC). La razón de porqué determinadas personas desarrollan una infección aguda con HBV mientras que otras no, es poco entendida. Los datos clínicos y la analogía a infecciones crónicas virales han resaltado el significado de una ¡nmunorespuesta mediada por la célula en la lucha de las infecciones virales, principalmente una ¡nmunorespuesta tal que comprenda los linfocitos T citotóxicos. La inducción de una respuesta celular T citotóxica es un factor crítico en la eliminación de la infección aguda con HBV y la prevención de la infección crónica con HBV. El genoma viral codifica, entre otros, la proteína-envoltura pre-S1, pre-S2 y el antígeno S (HBsAg), la polimerasa y la proteína de núcleo (HBcAg).

La hepatitis B crónica representa una inflamación progresiva del hígado que puede tomar un curso crónicamente persistente o crónicamente agresivo. La hepatitis crónicamente persistente exhibe una infiltración limitada a las áreas de portal ampliadas del hígado con elevada fibrosis; clínicamente, las señales de hepatitis persistente permanecen por años (hasta 1 años), y cerca del 8% de los casos son HBsAg-positivos. La patogénesis se basa probablemente en la insuficiencia del sistema inmune celular y la infección viral persistente.

El pequeño antígeno de superficie de hepatitis B (HBsAg), una proteína de 226 aminoácidos (p24/gp27 o proteína- S), es un antígeno de HBV prominente, el cual se ensambla incluso en partículas lipoprotéicas de 2-3 nm, en las cuales se reticulan 1-15 subunidades por medio de enlaces múltiples Ínter- e intra-moleculares de disulfuro. La variabilidad de la proteína S de HBV-aislados de diferentes subtipos y fenotipos es limitada. Los cuatro subtipos estables de HBsAg adw, ayw, adr y ayr se refieren a intercambios individuales de aminoácidos en las posiciones 122 y 16, que están localizadas adyacentes al "determlnante-a" ¡nmunodominante (una región hidrofílica que abarca los residuos 124-147). Hasta ahora, en la Infección con HBV, para estos subtipos no habían sido relacionadas diferencias biológicas o patogenéticas.

En 1982, en la República Federal de Alemania, fue aprobada por primera vez una vacuna que había sido obtenida a partir del plasma de portadores crónicos de HBsAg. Entretanto, la vacuna se obtiene mediante técnicas de ingeniería genética y se usa para inmunización activa de grupos de riesgo. El 95% de las personas que son sero negativas antes de la Inoculación presentan una reacción inmune después de un año. Todas las vacunas de hepatitis B usadas contienen una alta concentración de proteína de HBsAg purificada, correspondiente a la envoltura no Infecciosa del virus de hepatitis B y son libres del ADN viral y se desactivan con formalina.

Una desventaja del estado de la técnica consiste en que al menos el 5% de las personas inmunizadas son las llamadas "no-respondedoras", las cuales no presentan una Inmuno-respuesta. Además, hasta hoy no se conoce una vacuna para el tratamiento de hepatitis crónicamente persistente.

WO 1/4279 y WO 1/38498 describen vacunas a base de genotipo G del virus de la hepatitis B. Sin embargo, de ninguna de las dos patentes se desprende una Indicación sobre la combinación de fenotipos diferentes.

Michel et al., PNAS 92 (1995), 537-5311 y Manclnl et al., PNAS 93 (1996), 12496-1251 se refieren a vacunas de ADN a base de HBsAg. De los documentos no se desprende Indicación alguna sobre el uso de composiciones que contienen combinaciones de genotipos de HBV diferentes de HBsAg.

Por lo tanto, el problema en que se basa la presente Invención es proporcionar productos mejorados para la prevenclón/el tratamiento de una infección con HBV o una enfermedad mediada por HBV. Además, otro problema en que se basa la presente Invención es especificar un medicamento específico a un paciente para el tratamiento terapéutico de hepatitis.

El problema que sirve de fundamento a la presente invención se resuelve proporcionando una composición tal como se define en la reivindicación 1.

La presente invención se fundamenta en la siguiente observación sorprendente. Como modelo preclínico para evaluar la eficiencia de protocolos específicos de inmunoterapia para infecciones con HBV crónicas se consideran ratones transgénicos que expresan de manera constitutiva el subtipo ayw de HBsAg en el hígado. Estos ratones producen grandes cantidades de HBsAg, lo cual ocurre debido a una antigenemia persistente, y en esencia son 5 tolerantes frente a HBsAg. Ahora, los inventores han inmunizado a ratones HbsAg-transgénicos con una vacuna que corresponde en su genotipo de HBsAg exactamente al genotipo del ratón transgénico (ayw), y por otra parte con una vacuna que contiene un genotipo de HBsAg, el cual se diferencia de aquel del ratón transgénico. A pesar de la inmunización repetida de los ratones transgénicos con un antígeno de HbsAg, el cual corresponde al propio HBsAg, no pudo observarse una respuesta citotóxica de célula T. En contraste con esto, la inmunización de los ratones 1 transgénicos con un genotipo de HBsAg distinto del genotipo propio, dio lugar a respuestas citotóxicas de células T, específicas del genotipo y de reacción cruzada, frente a HBsAg. Esto muestra que una variante de ocurrencia natural de HBsAg puede romper la "tolerancia" mediante el imprimado de una inmunidad de célula T de reacción cruzada. La activación de la inmunidad citotóxica de célula T conduce en este caso a un decrecimiento del antígeno ayw de HBsAg y además a una sintomatología específica de hígado que corresponde a una hepatitis aguda con un 15 control eficaz de HBV. La inmuno respuesta observada es principalmente notable ya que la secuencia de

aminoácidos del antígeno ayw de HBsAg se diferencia solamente en pocas posiciones de la amino-secuencia del antígeno adw2 de HBsAg. En la presente invención se establece que incluso unos pocos intercambios conservadores de aminoácidos en un epítope de célula T pueden conducir a una reacción modificada de célula T frente a este epítope.

La especificidad y la eficiencia de la respuesta de célula T frente a un antígeno de proteína se regula a diferentes niveles, principalmente es decisiva (i) la liberación proteolítica del epítope (o del péptido antigénico); (ii) la afinidad del péptido antigénico para la glicoproteína que se presenta del complejo de histocompatibilidad principal (MHC); y (iii) la interferencia negativa de las respuestas de célula T que se desarrollan de modo competitivo frente a diferentes epítopes del mismo antígeno. Las variantes naturales de un antígeno de proteína pueden inducir (mediante 25 intercambios individuales de aminoácidos en secuencias críticas dentro del epítope o flanqueando el epítope, o

creando nuevos epítopes) una respuesta específica de célula T de las siguientes 4 maneras:

(i) procesamiento proteolítico más eficiente (liberación) del péptido antigénico desde la proteína;

(ii) enlace de alta afinidad del péptido antigénico a la molécula de MHC que se presenta;

(iii) eliminación de epítopes inmunodominantes (suprimir las respuestas frente a otros epítopes del mismo antígeno 3 de proteína) mediante un proceso análogo, expuesto en (i) y/o en (ii), el cual debilita la inmunogenidad del epítope;

(iv) pueden generarse nuevos epítopes.

En el contexto de la presente invención se demuestra que las variantes naturales del HBsAg, reflejadas por medio de los genotipos, presentan un espectro más amplio de especificidades en la respuesta de célula T que la estimulan.

En relación... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Uso de una composición, que contiene al menos dos antígenos de superficie del virus de hepatitis B (HBsAgs), fragmentos de los mismos, que contienen un epítope de célula T, en cuyo caso los fragmentos de los al menos dos HBsAgs tienen conjuntamente al menos 1 aminoácidos, aunque en se diferencian uno de otro al menos por un aminoácido, y/o estos ácidos nucleicos codificantes, en cuyo caso los HBsAgs se componen de la proteína S (pequeño antígeno de superficie de HBV) y en cuyo caso los HBsAgs se diferencian en el genotipo del virus de hepatitis B (HBV) en la región S de HbsAg, y en cuyo caso la composición no contiene antígeno de núcleo de HBV (HBcAg) o este ácido nucleico codificante, para la producción de un medicamento para el tratamiento terapéutico de una infección con HBV o una enfermedad mediada por HBV.

2. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición contiene al menos dos HBsAgs y/o al menos dos fragmentos de los mismos.

3. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el/los fragmento/fragmentos de HBsAg contienen al menos 2, principalmente al menos 5 aminoácidos.

4. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado porque el fragmento comprende el "a- determinante" de HBsAg.

5. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el primer fragmento y el segundo fragmento tienen en común al menos 2 aminoácidos, aunque difieren uno de otro en al menos un aminoácido.

6. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición contiene al menos dos ácidos nucleicos que codifican HBsAgs o fragmentos de los mismos.

7. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el genotipo se selecciona

de: A, B, C, D, E, F, G o H.

8. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la composición contiene al menos 3, preferentemente 5 diferentes HBsAgs, fragmentos de los mismos y/o ácidos nucleicos que los codifican.

9. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la composición contiene HBsAgs de los genotipos A, B, C, D, E, F, G y H, fragmentos de los mismos y/o ácidos nucleicos que los codifican.

1. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque el ácido nucleico que codifica HBsAg o un fragmento del mismo se encuentra presente en un vector bajo el control de un promotor adecuado para la expresión de HBsAg en unas células de mamífero.

11. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el vector se selecciona de: plásmidos, adenovirus, virus de vacuna, baculovirus, virus del sarampión y retrovirus.

12. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 11, caracterizado porque el promotor se selecciona de promotores constitutivos e inducibles.

13. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque la infección con HBV es hepatitis B crónicamente persistente.

14. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque la enfermedad mediada por HBV es una cirrosis hepática o un carcinoma primario de células hepáticas.

15. Uso de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 14 caracterizado porque la composición se administra por vía intramuscular, cutánea, intradérmica, intravenosa, mucosal u oral.

16. Método para la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico de hepatitis B, el cual comprende:

a) determinar el genotipo de HBV, con el cual está infectado el paciente; y

b) proporcionar un medicamento que contiene al menos un HBsAg de un genotipo de HBV, donde el HBsAg se compone de la proteína S (pequeño antígeno de superficie de HBV) o de la proteína S y de los dominios de proteína Pre-S1, para el tratamiento del paciente cuyo genotipo de HBV ha sido determinado en el paso del método a),

caracterizado porque el genotipo del HBsAg contenido en el medicamento se diferencia en un epitope de célula T del genotipo HBV del paciente, determinado de acuerdo con a).

17. Método según la reivindicación 16, caracterizado porque el genotipo se determina mediante el método de PCR.

18. Uso de al menos un HBsAg de un genotipo de HBV, en el cual el HBsAg se compone de la proteína S (pequeño 5 antígeno de superficie de HBV) o de la proteína S y del dominio de proteína Pre-S1, para la preparación de un

medicamento para el tratamiento de un paciente que está infectado con un HBV de un genotipo, el cual se diferencia del genotipo de HBV del HBsAg en un epitope de célula T, en cuyo caso el genotipo de HBV del paciente ha sido determinado antes del tratamiento.


 

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