Antígenos y composiciones de neisseria meningitidis.

Una composición que comprende una proteína aislada que comprende:

(i) una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs 2918, 2916 y 2920; o (ii) una secuencia de aminoácidos que tiene un 90% o más de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs 2918, 2916 y 2920.

Esta invención se refiere a antígenos de las especies bacterianas: Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae.

ANTECEDENTES

Neisseria meningitidis es un diplococo gram negativo inmóvil patógeno del ser humano. Coloniza la faringe, causando meningitis y ocasionalmente septicemia en ausencia de meningitis. Está estrechamente relacionado con N. gonorrhoeae, aunque una característica que diferencia claramente los meningococos de gonococos es la presencia de una cápsula de polisacáridos que está presente en todos los meningococos patógenos.

N. meningitidis causa enfermedad endémica y epidémica. En los Estados Unidos el índice de infección es de 0,6-1 por cada 100.000 personas al año, y puede ser mucho mayor durante los brotes (véase Lieberman y col., (1996) Safety and Immunogenicity of a Serogroups A/C Neisseria meningitidis Oligosaccharide-Protein Conjúgate Vaccine in Young Children. JAMA 275(19): 1499-1503; Schuchat y col., (1997) Bacterial Meningitis in the United States in 1995. N Engl J Med 337(14): 970-976). En los países en vías de desarrollo, los índices de enfermedad endémica son mucho mayores y durante los casos de epidemia los índices pueden alcanzar hasta 500 casos por cada 100.000 personas al año. La mortalidad es extremadamente alta, del 10-20% en los Estados Unidos y mucho mayor en los países en vías de desarrollo. Después de la presentación de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae, N. meningitidis es la causa principal de meningitis bacteriana en todas las edades en los Estados Unidos (Schuchat y col (1997) referido anteriormente).

Según el polisacárido capsular del organismo se han identificado 12 serogrupos de N. meningitidis. El grupo A es el patógeno implicado más a menudo en la enfermedad epidémica en el África Subsahariana. Los serogrupos B y C son responsables de la amplia mayoría de casos en los Estados Unidos y en la mayoría de los países en vías de desarrollo. Los serogrupos W135 e Y son responsables del resto de casos de los Estados Unidos y de los países en vías de desarrollo. La vacuna contra meningococos usada actualmente es una vacuna de polisacárido tetravalente constituida por serogrupos A, C, Y y W135. Aunque es eficaz en adolescentes y en adultos, induce una respuesta inmune pobre y una corta duración de la protección, y no puede usarse en lactantes [por ejemplo, Morbidity and Mortality weekly report, Vol. 46, N° RR-5 (1997)]. Esto es debido a que los polisacáridos son antígenos independientes de las células T que inducen una respuesta inmune débil que no puede reforzarse mediante la inmunización repetida. Después del éxito de la vacunación contra H. influenzae, se han desarrollado vacunas conjugadas contra serogrupos A y C y están en la etapa final del ensayo clínico (Zollinger WD "New and Improved Vaccines Against Meningococcal Disease". En: New Generation Vaccines, referido anteriormente, págs. 469-488; Lieberman y col (1996) referido anteriormente; Costantino y col (1992) Development and phase I clinical testing of a conjúgate vaccine against meningococcus A and C. Vaccine 10: 691-698).

Sin embargo, el meningococo B (menB) sigue siendo un problema. Este serotipo es responsable actualmente de aproximadamente el 50% de todas las meningitis en los Estados Unidos, Europa, y Sudamérica. El enfoque de polisacáridos no puede usarse debido a que el polisacárido capsular de menB es un polímero de ácido N-acetil neuramínico con enlace a(2-8) que también está presente en el tejido de los mamíferos. Esto produce tolerancia al antígeno; de hecho, si se provocara una respuesta inmune, seria auto-inmune, y por lo tanto no deseable. Para evitar la inducción de auto-inmunidad y para inducir una respuesta inmune protectora, se ha modificado el polisacárido capsular sustituyendo los grupos N-acetilo con grupos N-propionilo, dejando inalterada la antigenicidad especifica (Romero & Outschoorn (1994) Current status of Meningococcal group B vaccine candidates: capsular or non-capsular? Clin Microbiol Rev 7(4): 559-575).

Los enfoques alternativos para vacunas contra menB han usado mezclas complejas de proteínas de la membrana externa (OMP), que contenían o las OMP en solitario u OMP enriquecidas con porinas o con una deleción en las OMP de clase 4 que se cree induce anticuerpos que bloquean la actividad bactericida. Este enfoque produce vacunas que no están bien caracterizadas. Éstas son capaces de proteger contra la cepa homologa, pero no son eficaces en general, ya que existen muchas variantes antigénicas de las proteínas de la membrana externa. Para superar la variabilidad antigénica, se han construido vacunas multivalentes que contienen hasta nueve porinas diferentes (por ejemplo, Poolman JT (1992) Development of a meningococcal vaccine. Infect. Agents Dis, 4: 13-28). Las proteínas adicionales a usarse en vacunas de la membrana externa han sido las proteínas opa y opc, pero ninguno de estos enfoques ha sido capaz de superar la variabilidad antigénica (por ejemplo, AlaAldeen & Borriello (1996) The meningococcal transferrin-binding proteins 1 and 2 are both surface exponed and generate bactericidal antibodies capable of killing nomologous and heterologous strains. Vaccine 14(1): 49-53).

Para los genes y proteínas de los gonococos y meningococos está disponibles una cierta cantidad de datos de secuencia (por ejemplo documentos EP-A-0467714, WO 96/29412), pero no están de ninguna manera completos. Otras proteínas de men B pueden incluir aquellas enumeradas en los documentos WO 97/28273, WO

96/29412, WO 95/03413, US 5.439.808, US 5.879.686,

El suministro de secuencias adicionales podría proporcionar una oportunidad para identificar proteínas secretadas o expuestas en la superficie que sean presuntas dianas para el sistema inmune y que no sean variables antigénicamente. Por ejemplo, algunas de las proteínas identificadas podrían ser componentes de vacunas eficaces contra meningococos B y algunas podrían ser componentes de vacunas contra todos los serotipos de meningococos y otras podrían ser componentes de vacunas contra todos las especies de Neisseria patogénicas incluyendo Neisseria meningitidis o Neisseria gonorrhoeae. Estas secuencias específicas para N. meningitidis o N. gonorrhoeae que se conservan mejor son secuencias preferidas adicionalmente.

Por lo tanto es un objetivo de la invención proporcionar secuencias de ADN de Neisseria que codifiquen proteínas que sean antigénicas o inmunogénicas.

LA INVENCION

La invención proporciona proteínas que comprende las secuencias de aminoácidos de N. meningitidis y las secuencias de aminoácidos N.gonorrhoeae descritas en el ejemplo.

También proporciona proteínas que comprenden secuencias homologas (es decir, aquellas que tienen identidad de secuencias) con las secuencias de aminoácidos de N.meningitidis descritas en el ejemplo. Dependiendo de la secuencia particular, el grado de homología (identidad de secuencia) es preferentemente mayor del 90% (por ejemplo, 90%, 95%, 99% o más). Estas proteínas incluyen mutantes y variantes alélicas de las secuencias descritas en el ejemplo. Típicamente, se considera que 50% de identidad o más entre dos proteínas es una indicación de equivalencia funcional. La identidad entre proteínas se determina preferentemente mediante el algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman como está implementado en el programa MPSRCH (Oxford Molecular) usando una búsqueda de huecos afines con parámetros: penalización de hueco 12, penalización de extensión del hueco 1.

Las proteínas de la invención pueden, por supuesto, prepararse mediante diversos medios (por ejemplo expresión recombinante, purificación a partir de cultivo celular, síntesis química, etc.) y en diversas formas (por ejemplo, nativa, condensaciones, etc.). Se preparan preferentemente en forma sustancialmente pura o aislada (es decir, sustancialmente libres de otras proteínas celulares del huésped de N. meningitidis o N. gonorrhoeae).

De acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona anticuerpos que se unen con estas proteínas. Éstos pueden ser policlonales o monoclonales y pueden producirse mediante cualquier medio adecuado.

De acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona ácidos nucleicos que comprenden las secuencias de nucleótidos de N. meningitidis y las secuencias de nucleótidos N.gonorrhoeae descritas en el ejemplo

De acuerdo con un aspecto adicional, la invención comprende un ácido nucleico que híbrida con las secuencias proporcionadas en el presente documento. Las condiciones para hibridación se exponen en el presente documento.

De acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona ácido nucleico que codifica las proteínas y los fragmentos... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende una proteína aislada que comprende: (i) una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs 2918, 2916 y 2920; o (ii) una secuencia de aminoácidos que tiene un 90% o más de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs 2918, 2916 y 2920.

2. La composición de la reivindicación 1, que incluye un adyuvante.

3. La composición de la reivindicación 2, en la que el adyuvante son sales de aluminio o MF59.

4. Un anticuerpo que se une específicamente con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs 2918, 2916 y 2920.

5. Una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína como se define en la reivindicación 1.

6. Una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs 2917, 2915 y 2919.

7. Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos complementaria a una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 o la reivindicación 6.

8. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7.

9. El vector de la reivindicación 8, que es un vector de expresión.

10. Una célula huésped transformada con el vector de la reivindicación 8 o al reivindicación 9.

11. Un proceso para producir una proteína como se define en la reivindicación 1, que comprende el paso de cultivar una célula huésped de acuerdo con la reivindicación 10 bajo condiciones que inducen la expresión de la proteína.

12. El uso de una proteína como se define en la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de infección debida a bacterias de Neisseria.