Anticuerpos contra IL33R humano y la utilización de los mismos.

Un anticuerpo que se une al IL33R humano, que se caracteriza porque el dominio variable de la cadena pesada comprende el Id.

de Sec. Nº: 7 y el dominio variable de la cadena ligera comprende el Id. de Sec. Nº: 8.

Anticuerpos contra IL33R humano y la utilización de los mismos

La presente invención está relacionada con anticuerpos contra IL33R humano (anticuerpo IL33R) , los métodos para 5 su producción, las composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos y la utilización de los mismos.

Antecedentes de la invención

La IL33 humana es una citoquina de tipo interleuquina-1 de la familia IL-1 que señaliza a través del receptor de IL33 10 relacionado con el receptor de IL-1 (sinónimos del receptor: IL1RL1, T1/ST2) e induce las citoquinas asociadas a T ayudantes de tipo 2. Son sinónimos de IL33 (Nº registro en Swiss-Prot Nº 095760) son miembro 11 de la familia de la interleucina-1 (IL-1F11) y factor nuclear de las vénulas endoteliales altas (NF-HEV) . El NF-HEV se describe en Baekkevold, E.S., et al., Am. J. Pathol. 163 (2003) 69-79. IL33 es descrito por Schmitz, J., et al., Immunity 23 (2005) 479-490. 15

El receptor de IL33 humano, IL33R, (sinónimo de ILRL1; Nº registro en SwissProt Q01638; otros nombres son ST2, T1/ST2, Fit-1 y DER4) es inducido por la estimulación del crecimiento en células fibroblásticas, y también puede ser inducido por estimulación de un antígeno en las células Th2. Según la invención, IL33R y ST2 indican el IL33R humano. Tominaga, S., et al, (FEBS Lett 258 (1989) 301-304; Biochim. Biophys. Acta 1171 (1992) 215-218) y 20 Yanagisawa, K., (FEBS Lett 318 (1993) 83-87) identificaron el ST2 humano (la forma secretada) , ST2L (la forma del receptor transmembrana) y ST2V (variante Glu-78) . El ST2 humano sólo se expresa en células BALB/c-3T3 en las que se ha estimulado el crecimiento y es un miembro de la familia de genes de respuesta primaria inducidos por factores de crecimiento: ST2 codifica una proteína similar en secuencia a la porción extracelular del receptor humano de la interleuquina 1, tanto de tipo 1 como 2. Los estudios con ratones en los que se ha anulado IL33R sugieren que 25 IL33R está involucrado en los eventos tempranos de la respuesta TH2 (Kropf, P., et al, Infect Inmunity 70 (2002) 5512-5520; Hoshino, K., et al, J. Exp Med 190 (1999) 1541-1548; Senn, et al., Eur J. Immunol 30 (2000) 1929-1938; Townsend, M.J., et al, J. Exp Med 191 (2000) 1069-1076) . Se supone que ST2 es un marcador, activador y regulador de la inmunidad TH2 (Kumar, R.K., et al., Clin. Exp. Allergy 32 (2002) 1394-96) .

Los anticuerpos anti-IL33R y su papel en la función inmune se describen en una serie de publicaciones. El anticuerpo anti-ST2 humano Mab523 y el anticuerpo policlonal AF523 están disponibles a nivel comercial en R&D Systems (http://www.rndsystems.com) . El anticuerpo anti-ST2 humano HB12 está disponibles a nivel comercial en antibodies-online GmbH, Alemania y MBL Int. Corp. (www.mblintl.com) . Los anticuerpos anti-IL33R resultaron en una disminución de la respuesta inmunes de tipo TH2. El anticuerpo inhibe la infiltración de eosinófilos, la producción de 35 IL-5 y la producción de IgE. La evaluación de la función de ST2 en modelos animales para el asma resultó en una mayor expresión del IL33R murino en las células T CD4Smithgall, M.D., et al., Int. Immunol. 20 (2008) 1019-1030 investigaron los niveles de interferón en células NK en presencia de un anticuerpo anti-huST2. IL33R y/o los anticuerpos contra IL33R se mencionan en los documentos WO 2005/079844, US 7087396, WO 2001/021641, WO 2002/038794, WO 2003/094856. Oboki, K., et al., Allergology Int. 59 (2010) 143-160, revisaron el papel de la IL-33 y los de receptores de IL-33 en la defensa y las 55 enfermedades del huésped y los efectos de los anticuerpos anti-ST2, ST2 soluble y el anticuerpo anti-IL-33 sobre la inflamación de las vías respiratorias del ratón. La WO 99/34217 se refiere a una forma de la proteína ST2 unida a membrana de la proteína conocida como ST2L y el desarrollo de reactivos como anticuerpos, ligandos, agonistas y/o antagonistas específicos de ST2L. +, lo que indica un papel de IL33R en las respuestas alérgicas o asmáticas (Löhning, M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 6930-6935 y Xu, D., et al, J. Exp Med 187 (1998) 787-794; Coyle, A.J., et al, J. Exp Med 190 (1999) 895-902) . Meisel, C., et al., J. Immunol. 166 (2001) 3143-3150 investigaron la regulación y función de la expresión de T1/ST2 en las células T CD4+ y la inducción de la 40 producción de citoquinas de tipo 2 por unión cruzada de T1/ST2. Löhning, M., et al., generaron un anticuerpo anti-ST2 de ratón en ratas. El pretratamiento con 20 µg (aprox. 0, 8 mg/kg) de un anticuerpo tal 1 hora antes de una provocación con un alérgeno redujo el número de eosinófilos en las vías respiratorias del ratón en un 70%. Kumar, S., et al. (Biochem. Biophys. Res. Comm. 235 (1997) 474-478 y J. Biol. Chem. 270 (1995) 27905-27913) describieron la expresión de la proteína ST2 detectada por inmunoprecipitación usando un anticuerpo policlonal de 45 conejo generado contra el receptor ST2 soluble purificado expresado en Drosophila. Los estudios con ratones BALB/c revelaron que el tratamiento con el anticuerpo anti-IL33 indujo una mayor respuesta de tipo TH1. Un sistema de ELISA para cuantificar la proteína ST2 humana en sueros de pacientes fue descrito por Kuroiwa, K., et al., Hybridoma 19 (2000) 151-159. Los anticuerpos anti-IL33R también reducen los efectos debidos a las infecciones con RSV (Walzl, et al., J. Exp. Med. 193 (2001) 785-792) . También se investigaron los anticuerpos anti-IL33R en un 50 modelo animal de artritis (Leung, B.P., et al, J. Immunol 173 (2004) 145-150; Walzl, et al, J. Exp Med 193 (2001) 785-792) .

Resumen de la invención

La invención comprende un anticuerpo de unión a IL33R, que se caracteriza porque el dominio variable de la cadena pesada comprendel Id. de Sec. Nº: 7 y el dominio variable de la cadena ligera comprendel Id. de Sec. Nº: 8. Preferiblemente, el anticuerpo de unión a IL33R y que se caracteriza por las secuencias de aminoácidos y los 65 fragmentos de secuencia de aminoácidos anteriormente mencionadas, es de isotipo IgG1 humano modificado en la región de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre Cregión de bisagra en la posición de aminoácido 216-240, preferiblemente en la posición de aminoácido 220-240, entre C

El anticuerpo ra170 (Mab ra170) es una forma de realización preferida de la invención. Una realización adicional de la invención es una variante de anticuerpo quimérico, humanizado o en el que se ha eliminado el epítopo de células T del anticuerpo ra170. 15

Las variantes de anticuerpos humanizados preferibles del anticuerpo ra170 se caracterizan por que el dominio variable de la cadena pesada comprendel Id. de Sec. Nº: 21 o 25. Preferiblemente, el anticuerpo humanizado se caracteriza por que el dominio variable de cadena ligera comprendel Id. de Sec. Nº: 30.

El anticuerpo se une específicamente a IL33R con una afinidad de 10-10 M o inferior.

Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une al IL33R humano, que se caracteriza porque el dominio variable de la cadena pesada comprende el Id. de Sec. Nº: 7 y el dominio variable de la cadena ligera comprende el Id. de Sec. Nº: 8.

2. Un anticuerpo según la reivindicación 1, que se caracteriza por ser una variante de anticuerpo humanizado o al que se le ha eliminado el epítopo de células T, quimérica.

3. Un anticuerpo que se une a IL33R humano, que se caracteriza porque el dominio variable de la cadena pesada comprende el Id. de Sec. Nº: 21 y el dominio variable de la cadena ligera comprende el Id. de Sec. Nº: 30. 10

4. Un anticuerpo que se une a IL33R humano, que se caracteriza porque el dominio variable de la cadena pesada comprende el Id. de Sec. Nº: 25 y el dominio variable de la cadena ligera comprende el Id. de Sec. Nº: 30.

5. Un anticuerpo según las reivindicaciones de 1 a 4, que se caracteriza por ser de isotipo humano IgG1 o IgG4 15 modificado en la región bisagra en la posición de los aminoácidos 216 a 240, y/ o en la segunda región inter-dominio en la posición de aminoácidos 327 a 331 entre CH2 y CH3.

6. Un anticuerpo según la reivindicación 5, que se caracteriza porque comprende las mutaciones alanina en lugar de leucina en la posición del aminoácido 234 y alanina en lugar de leucina en la posición del aminoácido 235. 20

7. Un anticuerpo según la reivindicación 5, que se caracteriza porque comprende las mutaciones ácido glutámico en lugar de leucina en la posición del aminoácido 235 y prolina en lugar de serina en la posición el amino ácido 228.

8. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un anticuerpo según las reivindicaciones de 1 a 25 7.

9. La utilización de un anticuerpo según las reivindicaciones de 1 a 5 para la fabricación de una composición farmacéutica.

10. Un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones de 1 a 5 para su utilización en el tratamiento de la artritis reumatoide, la colitis ulcerosa o el asma.

11. Un ácido nucleico que codifica un anticuerpo según la reivindicación 4.

12. Un ácido nucleico que codifica un anticuerpo según la reivindicación 5.

13. Un ácido nucleico que codifica un anticuerpo según la reivindicación 6.

14. Un vector de expresión que se caracteriza porque comprende un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 40 11, 12 o 13 para la expresión de un anticuerpo de unión a IL33R en una célula huésped procariota o eucariota.

15. Un método para la producción de un anticuerpo recombinante de unión a IL33R, que se caracteriza por expresar un ácido nucleico según la reivindicación 11, 12 o 13 en una célula huésped procariota o eucariota, y la recuperación de dicho anticuerpo a partir de dicha célula o del sobrenadante del cultivo celular. 45