Anticuerpo específico de tumor.

Una proteína de unión que se une a la interfase 5-v8 de CD44E que comprende una región determinante de la complementariedad 1 (CDR1) de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID;

una región determinante de la complementariedad 2 (CDR2) de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 3 (CDR3) de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 1 (CDR1) de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 2 (CDR2) de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; y una región determinante de la complementariedad 3 (CDR3) de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID.

Anticuerpo específico de tumor Campo de la invención

La invención se refiere a proteínas que se unen a tumores de forma específica, y a todos los usos de las mismas. En particular, la invención se refiere a anticuerpos o fragmentos de anticuerpo específicos de antígenos o moléculas de células cancerosas y a los inmunoconjugados que comprenden las proteínas de unión de la invención, y los métodos

de uso de los mismos.

Antecedente de la invención

En el año 2 se estimó que 22 millones de personas padecían cáncer en todo el mundo, y 6,2 millones de muertes eran atribulóles a este tipo de enfermedades. Cada año aparecen más de 1 millones de nuevos casos y se espera que esta estimación aumente en un 5 % en los próximos 15 años (OMS, World Cáncer Report. Bernard W. Stewart y Paul Kleihues, eds. IARC Press, Lyon, 23). Los tratamientos contra el cáncer actuales se limitan a cirugía invasiva, radioterapia y quimioterapia, que ocasionan, todos ellos, bien efectos secundarios potencialmente graves, toxicidad no específica y/o cambios traumáticos en la imagen del cuerpo y/o la calidad de vida de la persona que lo padece. El cáncer se puede volver resistente a la quimioterapia, reduciendo posibilidades adicionales de tratamiento y la posibilidad de éxito. El pronóstico de algunos cánceres es peor que para otros y en algunos, como el cáncer de pulmón o de páncreas son casi siempre fatales. Además, algunos cánceres con una tasa de éxito de tratamiento relativamente elevada, tal como cáncer de mama, tienen también una tasa de incidencia muy elevada y, por tanto, siguen siendo causa principal de defunción.

Por ejemplo, cada año se producen más de un millón de casos nuevos de cáncer de mama en todo el mundo. Los tratamientos consisten en la extirpación quirúrgica de mínima a radical del tejido mamario y ganglios linfáticos con radioterapia y quimioterapia en el caso de la enfermedad metastásica. El pronóstico de la enfermedad localizada es relativamente bueno, con una tasa de supervivencia a 5 años de aproximadamente el 5 %, pero una vez que el cáncer alcanza la metástasis, es incurable, con una supervivencia promedio de aproximadamente 2 años. A pesar de la mejora en las tasas de éxito de los tratamientos, casi 4. mujeres mueren de cáncer de mama cada año, al mayor número de fallecimientos de cáncer entre las mujeres, por encima de los fallecimientos debidos a cáncer de pulmón. Entre las personas supervivientes a corto y medio plazo, la mayoría padecen durante el resto de su vida el traume de un tratamiento quirúrgico invasivo y desfigurador.

Otro ejemplo es el cáncer de hígado, del que aparecen más de medio millón de nuevos casos cada año y casi el mismo número de fallecimientos debido a la poca eficacia del tratamiento. Los carcinomas hepatocelulares representan aproximadamente el 8 % de todos los cánceres de hígado y en muy pocos casos se pueden curar. La tasa de supervivencia a cinco años es solo de aproximadamente el 1 % y la supervivencia después del diagnóstico es frecuentemente inferior a 6 meses. Aunque la extirpación quirúrgica del tejido enfermo puede ser eficaz, no constituye una opción para la mayoría de los casos debido a la presencia de cirrosis hepática. Los carcinomas hepatocelulares son muy resistentes a la radiación y la respuesta a la quimioterapia es mala.

Otro ejemplo más es el del cáncer pancreático, del que aparecen cada año 2. casos con muy mal pronóstico. De hecho, la mayoría de los pacientes fallecen en el año posterior al diagnóstico y solo un pequeño porcentaje de pacientes sobrevive cinco años. La cirugía es el único tratamiento disponible, pero está asociado con una elevada tasa de morbilidad y complicaciones ya que implica no solamente la resección de al menos una parte del páncreas, sino también del duodeno, parte del yeyuno, conducto biliar y vesícula biliar, y una gastrectomía distal. En algunos casos, también se extirpan el bazo y los ganglios linfáticos.

El cáncer de vejiga es el noveno cáncer más frecuente en el mundo, y se estima que cada año aparecen 33. nuevos casos y 13. fallecimientos. En Europa, esta enfermedad es la causa de muerte de aproximadamente 5. personas cada año. El tratamiento actual incluye la administración intravesicular de quimioterapia e inmunoterapia con la vacuna del bacilo de Calmette-Guerin (BCG) que implica el riesgo adicional de infección sistémica con la bacteria de la tuberculosis. A pesar de este régimen de tratamiento agresivo, el 7 % de estos tumores papilares superficiales experimentarán recidiva durante una evolución clínica prolongada, y algunos progresarán a carcinomas invasivos. La elevada tasa de recurrencia de esta enfermedad y los ciclos de tratamiento repetido asociados hace que esta forma de cáncer sea una de las más caras de tratar durante la vida del paciente. Para pacientes con enfermedad recurrente, las únicas opciones son experimentar múltiples cirugías de citoscopía que requieren anestesia o cirugía mayor, radical, que altera la vida (habitualmente una cistectomía). La cistectomía radical consiste en la extirpación de la vejiga, próstata y vesícula seminal en los varones, y de los ovarios, el útero, uretra y parte de la vagina en mujeres.

Existen muchos más ejemplos de cáncer para los que los tratamientos actuales no satisfacen las necesidades de los paciente, bien debido a su falta de eficacia y/o porque tienen elevadas tasas de morbilidad y efectos secundarios graves. Sin embargo, estos datos estadísticos y hechos que se han seleccionado ¡lustran bien la necesidad de

tratamientos para el cáncer que tengan mejores perfiles de seguridad y eficacia.

Una de las causas de la falta de adecuación de los tratamientos contra el cáncer actuales es su falta de selectividad para los tejidos y células afectadas. La resección quirúrgica siempre implica la extirpación de tejido aparentemente normal como "margen de seguridad" que puede aumentar la morbilidad y el riesgo de complicaciones. También extirpa parte del tejido sano que puede estar entreverado con las células tumorales y que podrían potencialmente mantener o restaurar la función del órgano o tejido afectado. La radiación y la quimioterapia destruirán o dañarán muchas células normales debido a su modo de acción no específico. Esto puede dar como resultado efectos secundarios importantes tales como náuseas graves, pérdida de peso y una energía reducida, pérdida de cabello, etc., así como un aumento en el riesgo de desarrollar un cáncer secundario posteriormente durante la vida. Un tratamiento más selectivo de las células cancerosas dejaría sin daños las células normales y al mismo tiempo mejoraría el resultado, el perfil de efectos secundarios y la calidad de vida.

La selectividad del tratamiento del cáncer se puede mejorar mediante el uso de anticuerpos que son específicos de las moléculas presentes solamente, o principalmente, en las células cancerosas. Dichos anticuerpos se pueden utilizar para modular el sistema inmune y potenciar el reconocimiento y la destrucción del cáncer por el propio sistema inmune del paciente. También pueden bloquear o alterar el funcionamiento de la molécula diana y, por tanto, de las células cancerosas. También se pueden utilizar para dirigir fármacos, genes, toxinas u otras moléculas médicamente relevantes hacia las células cancerosas. Dichos complejos de anticuerpo-fármaco se denominan habitualmente inmunotoxinas o inmunoconjugados, y muchos de estos compuestos se han ensayado en los últimos años [Kreitman RJ (1999) Immunotoxins in cáncer therapy. Curr Opin Immunol 11:57-578; Kreitman RJ (2) Immunotoxins. Expert Opin Pharmacother 1:1117-1129; Wahl RL (1994) Experimental radioimmunotherapy. A brief OverView. Cáncer 73:989-992; Grossbard ML, Fidias P (1995) Prospects for immunotoxin therapy of non-Hodgkin's lymphoma. Clin Immunol Immunopathol 76:17-114; Jurcic JG, Carón PC, Scheinberg DA (1995) Monoclonal antibody therapy of leukemia and lymphoma. Adv Pharmacol 33:287-314; Lewis JP, DeNardo GL, DeNardo SJ (1995) Radioimmunotherapy of lymphoma: a UC Davis experience. Hybridoma 14:115-12; Uckun FM, Reaman GH (1995) Immunotoxins for treatment of leukemia and lymphoma. Leuk Lymphoma 18:195-21; Kreitman RJ, Wilson WH, Bergeron K, Raggio M, Stetler-Stevenson M, FitzGerald DJ, Pastan I (21) Efficacy of the anti-CD22 recombinant immunotoxin BL22 in chemotherapy-resistant hairy-cell leukemia. N Engl J Med 345:241-247]. La mayoría de anticuerpos ensayados hasta la fecha se han suscitado contra marcadores conocidos del cáncer en la forma de anticuerpos monoclonales de ratón, a veces "humanizados" mediante ingeniería molecular. Lamentablemente, sus dianas también pueden estar presentes en cantidades significativas... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de unión que se une a la interfase 5-v8 de CD44E que comprende una región determinante de la complementariedad 1 (CDR1) de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 2 (CDR2) de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 3 (CDR3) de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 1 (CDR1) de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; una región determinante de la complementariedad 2 (CDR2) de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID; y una región determinante de la complementariedad 3 (CDR3) de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID.

2. La proteína de unión de la reivindicación 1 que comprende una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID.

3. La proteína de unión de la reivindicación 1 que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID.

4. La molécula de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la proteína de unión es un anticuerpo.

5. La proteína de unión de la reivindicación 4, en la que el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo.

6. La proteína de unión de la reivindicación 5, en la que fragmento de anticuerpo es un Fab, Fab', F(ab')2, scFv, dsFv, ds-scFv, dímeros, minicuerpos, diacuerpos, y multímeros de los mismos o fragmentos de anticuerpo biespecíficos.

7. Una composición que comprende una cualquiera de las proteínas de unión de las reivindicaciones 1 a 6 con un excipiente, transportador, tampón o estabilizante farmacéuticamente aceptable.

8. Un inmunoconjugado que comprende (1) una proteína de unión de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que se une a la interfase 5-v8 de CD44E sobre o en una célula cancerosa, unido a (2) un agente terapéutico de cáncer que es citotóxico, citostático o bien previene o reduce de otra forma la capacidad de las células cancerosas para dividirse y/o experimentar metástasis.

9. El inmunoconjugado de la reivindicación 8, en el que el agente terapéutico contra el cáncer es una toxina.

1. El inmunoconjugado de la reivindicación 9, en el que la toxina es un polipéptido inactivante del ribosoma.

11. El inmunoconjugado de la reivindicación 1, en el que la toxina se selecciona entre el grupo que consiste en gelonina, bouganina, saporina, ricina, cadena de ricina A, briyodina, difteria, restrictocina y exotoxina A de Pseudomonas.

12. El inmunoconjugado de la reivindicación 1, en el que la toxina es bouganina modificada.

13. El inmunoconjugado de la reivindicación 1, en el que la toxina es una forma truncada de la exotoxina A de Pseudomonas que consiste en los aminoácidos 252-68.

14. El inmunoconjugado de la reivindicación 8 que comprende una proteína codificada por la secuencia de ácidos nucleicos de la SEC ID N2: 11.

15. El inmunoconjugado de la reivindicación 8 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N2: 12 y 13.

16. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 15 en el que la inmunotoxina se internaliza mediante la célula cancerosa.

17. Una composición que comprende el inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 16 con un excipiente, transportador, tampón o estabilizante farmacéuticamente aceptable.

18. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 16 para su uso en el tratamiento o prevención del cáncer.

19. Uso del inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 16 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención del cáncer.

2. El inmunoconjugado para el uso de acuerdo con la reivindicación 18, o el uso de la reivindicación 19, en el que el uso comprende adicionalmente el uso de uno o más agentes terapéuticos contra el cáncer adicionales para el tratamiento o prevención del cáncer de forma simultánea, independiente o secuencial.

21. Un método para diagnosticar el cáncer en un mamífero que comprende las etapas de:

(1) poner en contacto una muestra de ensayo de dicho mamífero con una cualquiera de las proteínas de unión de las reivindicaciones 1 a 6 de la invención que se une a un antígeno en o de la célula cancerosa en condiciones que permiten la formación de un complejo proteína de unión-antígeno;

(2) medir la cantidad de complejo proteína de unión-antígeno en la muestra de ensayo; y

(3) comparar la cantidad de complejo proteína de unión-antígeno en la muestra de ensayo con la de un control.

22. Un agente diagnóstico que comprende (1) una proteína de unión de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, unido a (2) una etiqueta que produce una señal detectable, directa o indirectamente.

23. El agente diagnóstico de la reivindicación 22, en el que la etiqueta es un radioisótopo, un compuesto fluorescente, un compuesto quimioluminiscente, una enzima, un agente de obtención de imágenes o un ion metálico.

24. Un vector de expresión recombinante que comprende la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la SEC ID

N2: 11.

25. El inmunoconjugado para el uso de acuerdo con la reivindicación 18 o 2, o el uso de la reivindicación 19 o 2, en el que el cáncer es cáncer de mama.

26. El método de acuerdo con la reivindicación 21 en el que el cáncer es cáncer de mama.