Amiloide beta Fab pegilado.

Una molécula que comprende un fragmento Fab de anticuerpo que se une específicamente al péptido Aβ

humano entre las posiciones de aminoácidos 13 a 28, en la que el fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera de la SEC ID Nº 1 y una región variable de cadena pesada de la SEC ID Nº 2, y en la que dicho fragmento de anticuerpo Fab se une covalentemente a una molécula de polietilenglicol de 20 kD en la cisteína del aminoácido 56 de la SEC ID Nº 2.

Amiloide beta Fab pegilado.

La presente invención se refiere a un fragmento de anticuerpo que se une al péptido amiloide beta (A(5) y se une covalentemente a una o más moléculas de polietilenglicol (PEG).

El péptido Ap en forma circulante, está compuesto por 39-43 aminoácidos (mayoritariamente 4 o 42 aminoácidos) que resulta de la escisión de una proteína precursora, la proteína precursora de amiloide (APP). La conversión de la forma de Ap soluble a insoluble con alto contenido de hojas-p y su depósito como placas neuríticas y cerebrovasculares en el cerebro parece que se asocia con varias afecciones y enfermedades, incluyendo la enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, y angiopatía amiloide cerebral (CAA). La prevención y/o inversión del depósito de Ap puede tratar afecciones asociadas con el péptido Ap.

Los agentes terapéuticos que afectan el depósito de Ap incluyen los anticuerpos contra el péptido Ap, tal como los anticuerpos humanizados y fragmentos que se tratan en los documentos WO 21/6281, WO 24/7148 y Tamura, Y., y col, Neurobiol. of Dis. (25)2:541-545.

El documento US 26/257396A instruye sobre los anticuerpos humanizados que son específicos para el amiloide beta (Ap) humano y describe la PEGilación de estos anticuerpos o fragmentos para prolongar su vida.

El documento WO 24/7148 instruye sobre variantes humanizadas del anticuerpo monoclonal murino 266 para el tratamiento del Alzheimer.

Chapman, Andrew P: "PEGylated antibodies and antibody fragment for improved therapy: A review", 22617, vol. 54, n° 54, n° 4, 17 June 22 (17-6-22), páginas 531-545, XP1199533, describe los beneficios de la PEGilación de anticuerpos.

El documento WO 26/4153A instruye sobre nanocuerpos que se unen a Ap y se pueden PEGilar uniéndose a un molécula de PEG por la cadena pesada.

Mientras que muchos anticuerpos y sus derivados pueden ser útiles en el diagnóstico y la terapia, a menudo no se consiguen las características farmacocinéticas ideales de los anticuerpos para una aplicación en particular. Los anticuerpos terapéuticos que ayudan a combatir varias afecciones y enfermedades asociadas con el péptido Ap son generalmente inmunoglobulinas con regiones Fe intactas. Las regiones Fe son responsables de prolongar la semivida del anticuerpo en el plasma. Esta prolongación, sin embargo, puede ser una desventaja ya que evita que el anticuerpo que está unido al péptido diana no se aclare eficazmente, dando lugar a que el complejo antígeno anticuerpo esté presente en el plasma en circulación durante periodos de tiempo prolongados. La administración posterior del anticuerpo da lugar a una mayor acumulación del complejo no deseado en el plasma. La parte Fe de un anticuerpo puede tener ciertas funciones efectoras no deseadas y puede ser necesaria la eliminación de tales funciones. Además, la parte Fe añade un tamaño sustancial al agente terapéutico total lo que a menudo crea problemas asociados con la vía de suministro, dispositivos de suministro, y procesos de fabricación a gran escala.

Los fragmentos de anticuerpo sin la parte Fe, incluyendo Fab, se han estudiado in vivo para determinar si tales fragmentos pueden ser agentes terapéuticos potenciales. Los estudios sugieren, sin embargo, que la utilidad de las terapias que implican fragmentos tales como Fab es limitada debido a una tasa de aclaramiento rápida y una semivida corta. Por lo tanto, existe la necesidad de una molécula de anticuerpo anti-péptido Aj5 terapéuticamente activa con características farmacocinéticas y farmacodinámicas que permitan un mejor régimen de dosificación mientras que evite los potenciales efectos secundarios que se pueden crear por la formación de complejos en el plasma y las potenciales funciones efectoras.

La presente invención supera varios problemas asociados con los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo terapéuticos que pueden dirigirse al péptido Ap. Los compuestos de la presente invención engloban un fragmento de anticuerpo que se unen al Ap y se unen covalentemente a una o más moléculas de polietilenglicol (PEG). Estos compuestos se pueden producir en sistemas bacterianos o de levaduras lo que elimina varios problemas asociados con la producción de anticuerpos en líneas celulares de mamíferos tales como los problemas de coste, problemas de purificación, y problemas de contaminación con antígenos producidos endógenamente. Además, los compuestos de la presente invención se pueden administrar por vía subcutánea y tienen un perfil farmacocinético (PK) y farmacodinámico (PD) ideales, a la vez que conservan la afinidad y selectividad de los fragmentos de anticuerpo contra el Ap.

De una manera bastante impredecible e inesperada, los solicitantes también descubrieron que la unión covalente de moléculas de PEG a la región determinante de complementariedad (CDR) del fragmento de anticuerpo no alteraba la actividad, afinidad o selectividad del fragmento de anticuerpo contra el Ap.

La presente invención proporciona una molécula que comprende un fragmento de anticuerpo que se une específicamente al péptido Ap humano entre las posiciones de aminoácidos 13-28, en la que el fragmento de

anticuerpo se une covalentemente a una molécula de PEG.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona una molécula que comprende un fragmento de anticuerpo Fab que se une específicamente al péptldo A(5 humano entre las posiciones de aminoácidos 13 a 28, en la que el fragmento de anticuerpo comprende una reglón variable de la cadena ligera de la SEC ID N° 1 y una región variable de la cadena pesada de la SEC ID N° 2, y en la que dicho fragmento de anticuerpo Fab se une covalentemente a una molécula de polietilengllcol de 2 kD en la cisterna del aminoácido 56 de la SEC ID N° 2. Preferentemente, la molécula de polietilenglicol se une por medio de un enlace maleimida.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona una molécula de acuerdo con la presente invención para su uso como un medicamento. Preferentemente, la molécula es para su uso en el tratamiento o prevención de una afección asociada con la actividad del péptido A(5.

Más preferentemente, la molécula de acuerdo con la presente invención es para su uso en el tratamiento o prevención de una afección que se selecciona de entre la enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down y angiopatía amiloide cerebral (CAA).

Incluso más preferentemente, la molécula de acuerdo con la presente invención es para su uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Alzheimer pre-clínica.

De manera alternativa, la molécula de acuerdo con la presente invención, es para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer clínica.

De acuerdo con un aspecto más de la presente invención, se proporciona una composición que comprende la molécula de la presente invención. Preferentemente, la composición comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable que es adecuado para su administración subcutánea.

En una realización, la divulgación proporciona una molécula que comprende un fragmento de anticuerpo que tiene una región variable de la cadena pesada y una región variable de la cadena ligera, en la que la región variable de la cadena ligera comprende reglones CDR con las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRL1:

SSSQSLIYSDGNAYLH (SEC ID N° 6), CDRL2 : KVSNRFS (SEC ID N° 7) y CDRL3: TQSTHSPWT (SEC ID N° 8) y en la que la región variable de la cadena pesada comprende regiones CDR con las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRH1: GYTFSRYSMS (SEC ID N° 9), CDRH2: QINIRGCNTYYPDTVKG (SEC ID N° 1) o QINIRGNNTYYPDTVKG (SEC ID N° 11), y CDRH3: GDF (SEC ID N° 12). Preferentemente, tal molécula tiene una molécula de PEG que se une covalentemente o bien a la región variable de la cadena pesada o a la región variable de la cadena ligera del fragmento de anticuerpo. Más preferentemente, tal molécula tiene una molécula de PEG que se une covalentemente a una región CDR. Incluso más preferentemente, tal molécula tiene una molécula de PEG que se une covalentemente a un resto de cisterna en la CDR. Más preferentemente, tal molécula tiene una molécula de PEG que se une covalentemente a una CDRH2: QINIRGCNTYYPDTVKG (SEC ID N° 1) de la región variable de la cadena pesada del fragmento de anticuerpo.

En otra realización, la divulgación proporciona una molécula que comprende un fragmento de anticuerpo que tiene una reglón variable de la cadena ligera de la SEC ID N° 1, y una región variable de la cadena pesada de la SEC ID N° 2. Preferentemente, tal molécula tiene una molécula de PEG que está unida covalentemente o bien a la región variable de la la cadena pesada o a la región variable de la la cadena... [Seguir leyendo]

1. Una molécula que comprende un fragmento Fab de anticuerpo que se une específicamente al péptido Ap humano entre las posiciones de aminoácidos 13 a 28, en la que el fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera de la SEC ID N° 1 y una reglón variable de cadena pesada de la SEC ID N° 2, y en la que dicho

fragmento de anticuerpo Fab se une covalentemente a una molécula de polietilenglicol de 2 kD en la cisterna del aminoácido 56 de la SEC ID N° 2.

2. Una molécula de acuerdo con la reivindicación 1 en la que la molécula de polietilenglicol se une por medio de un enlace maleimida.

3. Una molécula de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para su uso como un medicamento.

4. Una molécula de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para su uso en el tratamiento o prevención

de una afección asociada con la actividad del péptido Ap, en el que la afección es seleccionada de entre la enfermedad de Alzhelmer, síndrome de Down y angiopatía amiloide cerebral (CAA).

5. Una molécula de acuerdo con el uso de la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzhelmer, en el que dicha enfermedad de Alzheimer es una enfermedad de Alzheimer pre-clínica.

6. Una molécula de acuerdo con el uso de la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de la enfermedad de

Alzheimer, en el que dicha enfermedad de Alzheimer es una enfermedad de Alzheimer clínica.

7. Una composición que comprende la molécula de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2.

8. Una composición de acuerdo con la reivindicación 7 que comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. Una composición de acuerdo con la reivindicación 7 o la reivindicación 8 que es adecuada para su administración

subcutánea.