Preparaciones estabilizadas que contienen un anticuerpo.

Una preparación estabilizada que tiene un pH de 5,7-6,2 y que contiene un anticuerpo anti-receptor de interleuquina-6 humanizado hPM-1 en un tampón de histidina,

donde la concentración del tampón de histidina es de 5 mM-20 mM y la preparación está en forma de una formulación en solución.

Preparaciones estabilizadas que contienen un anticuerpo

Campo de la invención

La presente invención "se relaciona" con las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones. Así, se relaciona con una preparación estabilizada que tiene un pH de 5, 7-6, 2 y que contiene un anticuerpo anti-receptor de interleuquina-6 humanizado hPM-1 en un tampón de histidina, donde la concentración del tampón de histidina es de 5 mM-20 mM y la preparación está en forma de una formulación en solución.

Técnica antecedente

Se suministran al mercado una serie de preparaciones inyectables que contienen proteínas, en donde se adoptan diversas medidas para proporcionar preparaciones estabilizadas que contienen proteínas con poca pérdida de principios activos incluso después de un almacenamiento a largo plazo. Las preparaciones que contienen proteínas son preparadas disolviendo los principios activos y diversos aditivos, tales como diluyentes, solubilizadores, excipientes, agentes calmantes, agentes tamponantes, agentes reductores que contienen azufre, antioxidantes, estabilizadores, surfactantes, etc. en un tampón.

Un problema generalmente asociado al almacenamiento de proteínas como soluciones concentradas es su deterioro, como ejemplifica la formación de agregados insolubles y que se ha de prevenir.

Por ejemplo, los anticuerpos, tales como inmunoglobulinas, anticuerpos monoclonales y anticuerpos humanizados, son proteínas inestables susceptibles a cambios físicos o químicos, tales como asociación o agregación bajo estreses de filtración, concentración y calentamiento para eliminar virus durante el proceso de purificación.

Un método convencional ampliamente utilizado para inhibir el deterioro de proteínas y almacenarlas de manera estable es la estabilización mediante liofilización. Sin embargo, era necesario añadir algún agente para proteger frente a la congelación y evitar la desnaturalización o los cambios químicos que podrían estar causados por estreses mecánicos durante la congelación y la liofilización.

Se vio un efecto de estabilización añadiendo como estabilizador para inhibir los cambios químicos o físicos polímeros o polioles, incluyendo proteínas, tales como seroalbúmina humana o gelatina purificada, u oligómeros, tales como aminoácidos, y surfactantes. Sin embargo, la adición de biopolímeros, tales como proteínas, como estabilizadores presentaba problemas, tales como la necesidad de una etapa muy compleja para eliminar contaminantes, tales como virus, derivados de los estabilizadores. Más aún, los tratamientos térmicos para inactivar virus a veces causaban problemas, tales como asociación o agregación, debido a estreses térmicos.

El receptor de interleuquina-6 (IL-6) es una proteína de unión a ligando que tiene un peso molecular de aproximadamente 80 KD a la que se une la IL-6. Se vio que los anticuerpos anti-receptores de IL-6 tienen un efecto terapéutico sobre diversas enfermedades mediadas por IL-6, tales como trastornos inmunes, enfermedades inflamatorias o tumores linfocíticos, por bloqueo de la transducción de señal de la IL-6 en células de mieloma inmaduras para inhibir las actividades biológicas de la IL-6 (Tsunenari, T. y col., Blood, 90: 2437, 1997; Tsunenari T.

y col., Anticancer Res. 16: 2537, 1996) . También vimos que los anticuerpos anti-receptores de IL-6 tienen un efecto terapéutico sobre las células de mieloma inmaduras (JP-A-8-099902) .

Conseguimos producir en masa un anticuerpo humanizado remodelado, hPM-1, como uno de tales anticuerpos antireceptores de IL-6 y hemos intentado formular este anticuerpo anti-receptor de IL-6 purificado en preparaciones 50 farmacéuticas.

De forma similar a otras preparaciones proteicas, un factor importante para la formulación de anticuerpos anti-IL-6R es la estabilidad química y física. Especialmente, los anticuerpos anti-receptor de IL-6 humanizados son proteínas inestables susceptibles de cambios físicos o químicos, tales como asociación o agregación bajo estreses de 55 filtración, concentración y calentamiento para la eliminación de virus durante el proceso de purificación.

Por lo tanto, existe una demanda en cuanto al desarrollo y la comercialización de preparaciones que contengan un anticuerpo, especialmente un anticuerpo anti-receptor de IL-6 humanizado, que sean estables incluso después de un almacenamiento a largo plazo.

Como para diversas proteínas fisiológicamente activas, es también necesario establecer condiciones de preparación y condiciones de almacenamiento para mantener sus estructuras y actividades con objeto de suministrarlas como productos farmacéuticos en una cantidad constante y con una gran calidad. Especialmente, sería deseable desarrollar un método para inhibir la formación de agregados insolubles en soluciones de proteínas.

Divulgación de la invención

Como resultado de cuidadosos estudios para conseguir los anteriores objetos, logramos la presente invención en base al descubrimiento de que la agregación inducida por calor es controlada formulando un anticuerpo anti-receptor 5 de interleuquina-6 humanizado en un tampón de glicina y/o un tampón de histidina y de que dichas formulaciones son además estabilizadas añadiendo glicina y/o sacarosa.

También logramos la presente invención en base al descubrimiento de que se puede reducir la agregación y se puede aumentar el efecto de estabilización ajustando el pH con un aminoácido básico o un derivado de aminoácido básico o una sal del mismo.

Por consiguiente, la presente invención proporciona:

(1) una preparación estabilizada que contiene un anticuerpo en un tampón de histidina como se caracteriza aún 15 más en la reivindicación 1;

(2) la preparación estabilizada como se define en el punto (1) anterior que contiene glicina y/o sacarosa como agente isotonizante;

(3) la preparación estabilizada como se define en el punto (2) anterior que contiene glicina 0, 05-1 M y/o sacarosa;

(4) la preparación estabilizada como se define en cualquiera de los puntos (1) a (3) anteriores, que no contiene NaCl como agente isotonizante;

(5) un método para estabilizar una preparación de anticuerpo que contiene un anticuerpo anti-receptor de interleuquina-6 humanizado, hPM-1, cuyo método comprende la incorporación del anticuerpo en un tampón de histidina, donde la concentración del tampón de histidina es de 5 mM -20 mM y la preparación está en forma de

una formulación en solución;

(6) el método como se define en el punto (5) anterior, que comprende la incorporación de glicina y/o sacarosa como agente isotonizante.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 muestra los resultados de la electroforesis en gel nativa que muestran agregación cuando se trató por calor el anticuerpo hPM-1 disuelto en fosfato de sodio 19 mM, NaCl 0, 2 M, pH 6, 5, a 75º C (electroforetograma) . La FIG. 2 muestra los resultados de la electroforesis en gel nativa que muestran el efecto del tipo de tampón sobre la agregación (electroforetograma) .

La FIG. 3 muestra los resultados de la electroforesis en gel nativa que muestran el efecto de la adición de NaCl 50 mM a los tampones y del calentamiento sobre la agregación (electroforetograma) . La FIG. 4 muestra la distribución del coeficiente de sedimentación g (s*) , obtenida por DCDT y análisis de un anticuerpo hPM-1 control en fosfato de sodio 19 mM, NaCl 0, 2 M. La FIG. 5 muestra la distribución del coeficiente de sedimentación g (s*) , mostrando el efecto del tipo de tampón sobre la agregación. La FIG. 6 muestra los resultados de la electroforesis en gel nativa que muestran el efecto de la glicina y de la sacarosa sobre la agregación (electroforetograma) . La FIG. 7 muestra los resultados del análisis en gel nativo de seis muestras (muestras 1 a 6) antes y después de calentar (electroforetograma) .

La FIG. 8 muestra los resultados del análisis en gel nativo de las muestras 6-1, 6-2, 6-3 y 6-4 antes y después de calentar (electroforetograma) . La FIG. 9 muestra los resultados del análisis en gel nativo en donde se compararon las muestras 6-1 y 6-2 a varias concentraciones de histidina (electroforetograma) . La FIG. 10 muestra los resultados del análisis en gel nativo en donde se compararon la muestra 6-1, pH 6, 5, la muestra 6-2, pH 6, 0, y la muestra 6-3, pH 6, 5, a varias concentraciones de histidina (electroforetograma) . La FIG. 11 muestra los resultados del análisis en gel nativo en donde se comparó el efecto de la histidina entre dos muestras a pH 6, 0, es decir, las muestras 6-2 y 6-5 (electroforetograma) . La FIG. 12 muestra los resultados del análisis en gel nativo en donde se compararon la muestra 6-1 (fosfato/Na... [Seguir leyendo]

1. Una preparación estabilizada que tiene un pH de 5, 7-6, 2 y que contiene un anticuerpo anti-receptor de interleuquina-6 humanizado hPM-1 en un tampón de histidina, donde la concentración del tampón de histidina es de 5 5 mM-20 mM y la preparación está en forma de una formulación en solución.

2. La preparación estabilizada de la reivindicación 1, que además contiene glicina y/o sacarosa como agente isotonizante.

3. La preparación estabilizada de la reivindicación 2, donde la concentración de la glicina y/o de la sacarosa como agente isotonizante es de 0, 05-1 M.

4. La preparación estabilizada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que no contiene NaCl como agente isotonizante. 15

5. La preparación estabilizada de la reivindicación 1, donde la concentración de histidina es de 5-10 mM.

6. Un método para estabilizar una preparación de anticuerpo que contiene un anticuerpo anti-receptor de interleuquina-6 humanizado hPM-1, cuyo método comprende la incorporación del anticuerpo en un tampón de

histidina, donde la concentración del tampón de histidina es de 5 mM-20 mM y la preparación está en forma de una formulación en solución.

7. El método de la reivindicación 6, que comprende la incorporación de glicina y/o sacarosa como agente isotonizante. 25