Polipéptidos homólogos IL-17 e IL-17R y usos terapéuticos de los mismos.

Anticuerpo antagonista aislado que se une a un polipéptido IL-17E (PRO10272) (a) que consiste en los aminoácidos 1 a 177 o los aminoácidos 33 a 177 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 6,

o (b) está codificado por la secuencia codificante de longitud completa del ADNc (DNA 147531-2821) depositado bajo el número de acceso ATCC PTA-1185, y que: (i) bloquea la unión de dicho polipéptido IL-17E al polipéptido IL-17RH1 (PRO5801) de la figura 12; y/o (ii) inhibe la actividad de IL-17E para estimular la producción de IL-8 en células TK-10; y/o (iii) inhibe la actividad de IL-17E para activar NF-kB en células 293 y/o células TK-10.

Polipéptidos homólogos IL-17 e IL-17R y usos terapéuticos de los mismos CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente Invención se refiere generalmente a la Identificación y aislamiento de ADN y a la producción recomblnante de pollpéptldos nuevos con similitud de secuencia con la interleucina-17 y la proteína receptora interleucina-17, designada aquí como polipéptidos "PRO".

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las proteínas extracelulares juegan un papel importante en, entre otras cosas, la formación, la diferenciación y el mantenimiento de los organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, es decir, la proliferación, migración, diferenciación, o la interacción con otras células, normalmente se rigen por la información recibida de otras células y/o el entorno inmediato. Esta información se suele transmitir por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que es, a su vez, recibida e interpretada por diversos receptores de las células o proteínas de membrana. Estos polipéptidos secretados o moléculas de señalización normalmente pasan por la vía de secreción celular para llegar a su sitio de acción en el medio extracelular.

Las proteínas secretadas tienen diversas aplicaciones industriales, incluyendo los productos farmacéuticos, de diagnóstico, biosensores y biorreactores. La mayoría de los fármacos de proteínas disponibles en la actualidad, tales como agentes trombolíticos, interferones, interleucinas, eritropoyetina, factores estimulantes de colonias, y otras varias citoquinas, son proteínas secretoras. De sus receptores, que son proteínas de membrana, también tienen potencial como agentes terapéuticos o de diagnóstico.

Las proteínas unidas a la membrana y receptores pueden desempeñar un papel importante en, entre otras cosas, la formación, la diferenciación y el mantenimiento de los organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, es decir, proliferación, migración, diferenciación, o interacción con otras células, normalmente se rigen por la información recibida de otras células y/o el entorno inmediato. Esta información se suele transmitir por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénica, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que es, a su vez, recibida e interpretada por diversos receptores de las células o proteínas de membrana.

Dichas proteínas unidas a la membrana y receptores de la célula incluyen, pero no están limitados a, los receptores de las citoquinas, receptores quinasas, fosfatasas de los receptores, los receptores implicados en las interacciones célula- célula, y las moléculas de adhesina celular como selectinas e integrinas. Por ejemplo, la transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celular está regulada en parte por la fosforilación de varias proteínas celulares. Quinasas tirosina de proteínas, enzimas que catalizan este proceso, también puede actuar como receptores del factor de crecimiento. Los ejemplos incluyen los receptores de factor de crecimiento de fibroblastos y factor de crecimiento del nervio receptor de factor.

De manera similar a las proteínas secretadas, las proteínas unidas a la membrana y las moléculas de los receptores tienen diversas aplicaciones industriales, incluso como agentes farmacéuticos y de diagnóstico. Inmunoadhesinas receptoras, por ejemplo, pueden ser empleadas como agentes terapéuticos para bloquear las interacciones receptor- ligando. Las proteínas unidas a la membrana también pueden ser empleadas para la detección de péptido o inhibidores de molécula pequeña potenciales de la interacción receptor/ligando relevante.

Se están realizando esfuerzos tanto por la industria y el mundo académico para identificar nuevas proteínas secretadas nativas y el receptor nativo o proteínas unidas a la membrana. Muchos esfuerzos se centran en la selección de las librerías de ADN recombinante de mamíferos para identificar las secuencias que codifican las nuevas proteínas secretadas. Ejemplos de procedimientos y técnicas están descritos en la literatura [ver, por ejemplo, Klein et al., Proc. Nati. Acad. Sci., 93:7108-7113 (1996); U. S. Patent No. 5.536.637)].

En este sentido, la presente invención se refiere a la identificación de nuevos polipéptidos y receptores secretados de la familia de la interleucina-17 (IL-17) que han demostrado estar relacionados con las enfermedades inmuno-mediadas e inflamatorias. Enfermedades inmunes e inflamatorias relacionadas son la manifestación o consecuencia a menudo de varias vías biológicas interconectadas bastante complejas, que en la fisiología normal son críticas para responder al ataque o lesión, iniciar la reparación del ataque o lesión, y montar la defensa innata y adquirida frente a los organismos extraños. La enfermedad o patología se produce cuando estas vías fisiológicas normales causan un ataque o lesión adicional ya sea directamente relacionado con la intensidad de la respuesta, como consecuencia de la regulación anormal o excesiva estimulación, como reacción a la misma, o como una combinación de éstas.

Aunque la génesis de estas enfermedades a menudo involucra vías de varias etapas y a menudo caminos múltiples sistemas y vías biológicos diferentes, la intervención en los puntos críticos en una o más de estas vías puede tener un

efecto paliativo o terapéutico. La intervención terapéutica puede ocurrir ya sea por antagonismo de un proceso/vía de detrimento o la estimulación de un proceso/vía beneficioso.

Muchas enfermedades autoinmunes relacionadas son conocidas y han sido ampliamente estudiados. Esas enfermedades incluyen son las enfermedades inflamatorios inmuno-mediadas (como la artritis reumatoide, enfermedad renal inmuno-mediada, enfermedades hepatobiliares, enfermedad inflamatoria intestinal (Eli), psoriasis y asma), enfermedades inflamatorias no inmuno mediadas, enfermedades infecciosas, enfermedades de inmunodeficiencia, la neoplasla, etc.

Los linfocitos T (células T) son un componente importante de una respuesta inmunitaria de los mamíferos. Las células T reconocen los antígenos que están asociados con una auto-molécula codificada por los genes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). El antígeno se puede mostrar junto con las moléculas de MHC en la superficie de células que presentan antígenos, células infectadas por virus, células cancerosas, injertos, etc. El sistema de células T elimina estas células alteradas que representan una amenaza para la salud del mamífero huésped. Las células T incluyen linfocitos colaboradores T y células T citotóxicas. Las células T colaboradoras proliferan de manera extensiva a raíz del reconocimiento de un complejo antígeno-MHC en la presentación de un antígeno de la célula. Las células T colaboradoras también secretan una gran variedad de citocinas, por ejemplo, linfocinas, que desempeñan un papel central en la activación de células B, células T citotóxicas y una variedad de otras células que participan en la respuesta Inmunitaria.

Un acto central, tanto en las respuestas inmunes humoral y mediada por células es la activación y expansión clonal de las células T colaboradoras. La activación de células T colaboradoras se inicia por la interacción del receptor de células T (TCR) - complejo CD3 con un antígeno-MHC en la superficie de una célula que presente un antígeno. Esta interacción media en una cascada de eventos bioquímicos que inducen al descanso de células T auxiliares para entrar en un ciclo celular (el G0 a la transición G1) y resulta en la expresión de un receptor de alta afinidad para IL-2 y algunas veces IL-4. La célula T activada avanza a través del ciclo proliferando y diferenciándose en las células de memoria o células efectoras.

Además de las señales mediadas por el TCR, la activación de células T implica coestimulación adicional inducida por citocinas liberadas por las células que presentan antígenos o por medio de interacciones con las moléculas unidas a la membrana de la célula que presenta el antígeno y la célula T. Las citocinas IL-1 e IL-6 se ha demostrado que proporcionan una señal de coestimuladora. Además, la interacción entre la molécula B7 expresada en la superficie de células presentadoras de un antígeno y moléculas CD28 y CTLA-4 expresadas en la superficie de las células T efectúan la activación de células T. Las células T activadas expresan un mayor número de moléculas de adhesión celular, como el ICAM-1, integrinas, VLA-4, LFA-1, CD56, etc.

La proliferación de células T en un... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo antagonista aislado que se une a un polipéptido IL-17E (PRO10272) (a) que consiste en los aminoácidos 1 a 177 o los aminoácidos 33 a 177 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 6, o (b) está codificado por la secuencia codificante de longitud completa del ADNc (DNA 147531-2821) depositado bajo el número de acceso ATCC PTA-1185, y que:

(i) bloquea la unión de dicho polipéptido IL-17E al polipéptido IL-17RH1 (PRO5801) de la figura 12; y/o

(ii) inhibe la actividad de IL-17E para estimular la producción de IL-8 en células TK-10; y/o

(iii) inhibe la actividad de IL-17E para activar NF-kB en células 293 y/o células TK-10.

2. Anticuerpo, según la reivindicación 1, en el que la unión de IL-17E a IL-17RH1 se analiza mediante la unión de la proteína de fusión IL-17E-Fc a células que expresan IL-17RH1 o al dominio extracelular de IL-17RH1 marcado con epítopo de His y/o la activación de NF-kB se analiza utilizando un gen reportero de luciferasa sensible a NF-kB.

3. Anticuerpo, según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho anticuerpo se une a un polipéptido IL-17E que consiste en los aminoácidos 33 a 177 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 6.

4. Anticuerpo, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un anticuerpo monoclonal.

5. Anticuerpo, según la reivindicación 4, que es un anticuerpo quimérico.

6. Anticuerpo, según la reivindicación 4, que es un anticuerpo humanizado.

7. Anticuerpo, según la reivindicación 4, que es un anticuerpo humano.

8. Anticuerpo, según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, que es un anticuerpo monovalente.

9. Anticuerpo, según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, que es un fragmento Fab, Fab', Fv o F(ab')2.

10. Anticuerpo, según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9, que está marcado.

11. Anticuerpo, según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10, que se puede fabricar a partir de una célula huésped recombinante seleccionada del grupo que consiste en células COS de simio, células CHO o células de mieloma que de otro modo no producen proteína inmunoglobulina.

12. Composición que comprende el anticuerpo, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

13. Anticuerpo o composición, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para utilizar en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

14. Anticuerpo o composición, según la reivindicación 13, para utilizar en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad articular degenerativa.

15. Anticuerpo o composición, según la reivindicación 14, en los que dicha enfermedad articular degenerativa es osteoartritis o artritis psoriásica.