Inhibidores no simétricos de colina quinasa con actividad antitumoral y antimalárica.

Inhibidores no simétricos de colina quinasa con actividad antitumoral y antimalárica.

La presente invención se enmarca en el campo farmacéutico, concretamente la invención se refiere a compuestos no simétricos de bispiridinio inhibidores de la enzima colina quinasa, su síntesis y su uso como medicamento antitumoral y/o antiparasitario.

INHIBIDORES NO SIMÉTRICOS DE COLINA QUINASA CON ACTIVIDAD ANTITUMORAL y ANTIMALÃ?RICA

La presente invención se enmarca en el campo farmacéutico. Concretamente la invención se refiere a compuestos no simétricos de bispiridinio inhibidores de colina quinasa (ChoK) , su síntesis y su uso como medicamento antitumoral y/o antiparasitario.

OBJETO DE LA INVENCiÓN

El objeto de la presente invención es una familia de compuestos con estructura no simétrica de bispiridinio inhibidores de la enzima ChoK, su procedimiento de obtención y los usos dados a los mismos y a sus composiciones.

ESTADO DE LA TÉCNICA

La enzima ChoK es la primera enzima de la ruta CDP-colina o ruta de Kennedy, que permite la biosíntesis de fosfatidilcolina (PC) , fosfolipido mayoritario de las membranas celulares eucariotas [Kennedy, E. P. Annu. Rev. Bioehem. 1957, 26, 119-148]. Esta . enzima cataliza la fosforilación de colina a fosfocolina (PCho) utilizando ATP y Mg2+

como cofactor.

En condiciones tumorales, diferentes oncogenes, como sre, mos [Hernández- Alcoceba, R.; Saniger, L.; Campos, J.; Núñez, M. C.; Khaless, F.; Gallo M. A.; Espinosa, A.; Lacal, J. C. Oneogene 1997, 15, 2289-2301], pero fundamentalmente oncogenes ras, provocan un exceso de actividad de ChoK [Macara, 1. G. Mol. Cell. Biol. 1989, 9, 325-328; Ratnam, S.; Kent, C. Areh. Bioehem. Biophys. 1995, 323, 313322] lo que se traduce en un incremento de los niveles intracelulares de PCho, sin que exista una cooperación con la biosíntesis de PC [Bhakoo, K. K.; Williams, S. R.; Florian, C. L.; Land, H.; Noble, M. D. Caneer Res. 1996, 56, 4630-4655]. El empleo de técnicas de resonancia magnética nuclear (RMN) aplicadas en diferentes tumores humanos (mama, pulmón, colon, colorrectal, próstata y linfoma hepático, entre otros) ha permitido corroborar que en todos ellos se produce un notable aumento de los niveles de PCho con respecto a los niveles existentes en los correspondientes tejidos

sanos [Aboagye, E. O.; Bhujwalla, Z. M. Cancer Res. 1999, 59, 80-84; de Certaines, J. D.; Larsen, V. A; Podo, F.; Carpinelli, G.; Briot, O.; Henriksen, O. NMR Biomed. 1993, 6, 345-365; Ruiz-Cabello, J.; Cohen, J. S. NMR Biomed. 1992, 5, 226-233; Smith, T. A; Bush, C.; Jameson, C.; Titley, J. C.; Leach, M. O.; Wilman, D. E.; McCready, V. R. NMR Biomed. 1993, 6, 318-323].

Existen un gran número de estudios que avalan que el aumento de la concentración intracelular de PCho promueve la mitosis celular, permitiendo afirmar que el papel que ChoK juega en la carcinogénesis humana se debe al incremento de la concentración del producto de catálisis, PCho [Cuadrado, A; Carnero, A; Dolfi, F.; Jimenez, B.; Lacal, J. C. Oncogene 1993, 8, 2959-2968; Kiss, Z. Ce" Signal 1999, 11, 149-157], que actúa como segundo mensajero implicado en la transducción de la señal mitogénica.

Debido al importante papel que juegan ChoK y PCho en la carcinogénesis humana, ChoK se ha convertido en una diana terapéutica perfecta para el diseño de fármacos antitumorales, capaces de inhibir selectivamente la enzima evitando la producción de PCho y, por tanto, la actividad mitogénica asociada a este metabolito.

Hasta la fecha se han desarrollado un número muy elevado de inhibidores de ChoK que presentan actividad antiproliferativa. Todos ellas conservan la estructura biscatiónica del primer inhibidor de ChoK conocido, Hemicolinio-3, y responden a una estructura simétrica. [Lacal, J. C.; Campos Rosa, J.; Gallo Mezo, M. A; Espinosa Úbeda, A (ES) P20040072].

La inhibición de ChoK produce una disminución de la proliferación celular y previene el crecimiento tumoral en ratones [Hernández-Alcoceba, R.; Fernández, F.; Lacal, J. C. Cancer Res. 1999, 59, 3112-3118]. Además, la inhibición de ChoK mediante inhibidores específicos conduce a las células tumorales a la apoptosis, mientras que no afecta a las células normales [Rodríguez-González, A; Ramírez de Molina, A; Fernández, F.; Lacal, J. C. Oncogene 2004, 23, 8247-8259;].

ChoK está presente en otros organismos eucariotas como es Plasmodium falciparum, causante del 80% de la infecciones de malaria. En este parásito, ChoK cata liza la biosíntesis de PCho, del que se obtiene a su vez PC [Vial, H. J.; Ancelin, M. L. Subcel/ Biochem. 1992, 18, 259-306].

La inhibición de la biosíntesis de PC como estrategia antimalárica ha sido ampliamente estudiada frente a P. fa/ciparum. Se han obtenido un gran número de compuestos con estructura de sales de amonio mono, bis y triscuaternarias capaces de inhibir el crecimiento de P. faleiparum in vitro [Ancelin, M. L.; Vial, H. J.; Philippot, J. R Bioehem. Pharmaeol. 1985, 34, 4068-4071; Ancelin, M. L.; Vial, H. J. Antimierob. Agents Chemother. 1986, 29, 814-820; Ancelin, M. L.; Calas, M.; Vidal-Sailhan, V.; Herbuté, S.; Ringwald, P.; Vial, H. J. Antimierob. Agents Chemother. 2003, 47, 25902597; Salom-Roig, X. J.; Hamzé, A.; Calas, M.; Vial, H. J. Comb Chem High Throughput Sereen. 2005, 849-862] y, en algunos casos, in vivo [Ancelin, M. L.; Calas, M.; Bonhoure, A.; Herbuté, S.; Vial, H. J. Antimierob. Agents Chemother. 2003, 47, 2598-2605], interfiriendo la biosíntesis de PC incluso en cepas resistentes a múltiples fármacos [Ancelin, M. L.; Calas, M.; Vidal-Sailhan, V.; Herbuté, S.; Ringwald, P.; Vial,

H. J. Antimierob. Agents Chemother. 2003, 47, 2590-2597].

La identificación de la secuencia genética que codifica ChoK en P. faleiparum [Choubey, V.; Guha, M.; Maity, P.; Kumar, S.; Raghunandan, R; Maulik, P. R; Mitra, K.; Halder, U. C.; Bandyopadhyay, U. Bioehim. Biophys. Acta 2006, 1760, 1027-1038], ha permitido obtener la enzima recombinante ChoK de P. faleiparum (PfChoK) . Estudios empleando bromuro de hexadeciltrimetilamonio (HDTAB) demuestran que la actividad antimalárica mostrada por este compuesto se debe a su capacidad de inhibir PfChoK, lo que provoca un descenso en la generación de PCho, que a su vez se traduce en una disminución de la biosíntesis de PC y, por tanto, en la muerte del parásito [Choubey, V.; Maity, P.; Guha, M.; Kumar, S.; Srivastava, K.; Puri, S. K.; Bandyopadhyay, U. Antimierob Agents Chemother. 2007, 51, 696-706].

DESCRIPCiÓN DE LA INVENCiÓN

Compuestos objeto de la invención Los compuestos objeto de esta invención responden a la fórmula general (1) :

donde, m puede ser 0, 1, 2, 3 ó 4; n puede ser Oó 1;

X-representa la base conjugada de un ácido orgánico o inorgánico farmaceuticamente apropiado; R1 y R2 representan un grupo -NR'R", donde R' y R" se seleccionan independientemente de alquilo, cicloalquilo y arilo opcionalmente sustituido o, junto con el átomo de N al que están unidos, forman un grupo heterocíclico preferentemente de 5 miembros; con la condición de que R1 y R2 sean diferentes entre sí.

El segundo aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de preparación de compuestos de la fórmula general I que comprende los siguientes pasos:

a) Preparación de una disolución del producto intermedio (11) y la correspondiente piridina 4-sustituida en un disolvente polar aprótico,

b) Calentamiento de la mezcla de reacción a una temperatura comprendida entre 80º C y 120º C, en un tubo cerrado durante un tiempo de reacción comprendido entre 24 horas y 168 horas.

c) Obtención del producto precipitado mediante filtración en placa filtrante.

d) Purificación mediante lavado, en primer lugar, con el mismo disolvente utilizado en la etapa a) , y, a continuación, con cualquier otro disolvente polar aprótico diferente al utilizado en la etapa a) .

El tercer aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención junto con los excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

Un cuarto aspecto de la presente invención se refiere a uso de los compuestos de la invención como inhibidores de ChoK.

Un quinto aspecto de la presente invención se refiere al uso de los compuestos de la invención para su uso como un medicamento.

DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN

El primer aspecto de la invención se refiere a los compuestos que responden a la fórmula general (1) :

donde, m puede ser O, 1, 2, 3 ó 4; n puede ser O ó 1; X-representa la base conjugada de un ácido orgánico o inorgánico farmacéuticamente

apropiado; R1 y R2 representan un grupo -NR'R", donde R' y R" se seleccionan independientemente de alquilo, cicloalquilo y arilo opcionalmente sustituido o, junto con el átomo de N al que están unidos, forman un grupo heterocíclico de 5 a 6 miembros; con la condición de que R1 y R2 sean diferentes entre sí.

Preferentemente X-representa cr,... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto que representa la fórmula general (1) :

donde, m puede ser 0, 1, 2, 3 ó 4; n puede ser O ó 1; R1 Y R2 representan un grupo -NR'R", donde R' y R" se seleccionan

independientemente de alquilo, cicloalquiloy arilo opcionalmente sustituido o, junto con el átomo de N al que están unidos, forman un grupo heterocíclico de 5 a 6 miembros; con la condición de que R1 y R2 sean diferentes entre sí, y X-representa la base conjugada de un ácido orgánico o inorgánico farmaceuticamente apropiado.

2. Un compuesto según la reivindicación 1 seleccionado del grupo consistente en:

• Dibromuro de 4- ( dimetilamino ) -1-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil]bencil} piridinio;

• Dibromuro de 4- ( dimetilamino ) -1- ( 4-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil]fenil} bencil) piridinio;

• Dibromuro de 4- ( dimetilamino ) -1- ( 4-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil]fenetil} bencil) piridinio;

• Dibromuro de 4- ( dimetilamino ) -1-[4- ( 4-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil]fenil} 25

butil) bencil]piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil] bencil}piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1- ( 4-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil] fenil}bencil) piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1- ( 4-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil] fenetil}bencil) piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1-[4- ( 4-{4-[ ( 4-pirrolidinopiridinio-1-il) metil]fenil}butil) bencil]piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1-{4-[ ( 4-dimetilaminopiridinio-1-il) metil] bencil}piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1- ( 4-{4-[ ( 4-dimetilaminopiridinio-1-il) metil]fenil}bencil) piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1- ( 4-{4-[ ( 4-dimetilaminopiridinio-1-il) 10 metil]fenetil}bencil) piridinio;

• Dibromuro de 4- ( 4-cloro-N-metilanilino ) -1-[4- ( 4-{4-[ ( 4-dimetilaminopiridinio-1-il) metil]fenil}butil) bencil]piridinio.

3. Procedimiento de preparación de compuestos de la fórmula general I que 15 comprende los siguientes pasos:

a) Preparación de una disolución del producto intermedio (11) y la correspondiente piridina 4-sustituida en un disolvente polar aprótico,

b) Calentamiento de la mezcla de reacción, a una temperatura comprendida entre 80º C y 120º C, en un tubo cerrado durante un tiempo de reacción comprendido entre 24 horas y 178 horas.

c) Obtención del producto precipitado mediante filtración en placa filtrante.

d) Purificación mediante lavado, en primer lugar, con el mismo disolvente utilizado en la etapa a) , y, a continuación, con cualquier otro disolvente polar aprótico diferente al utilizado en la etapa a) .

4. Procedimiento de preparación de compuestos de la fórmula general I según reivindicación anterior donde el disolvente utilizado en el paso a) es butanona.

5. Procedimiento de preparación de compuestos de la fórmula general I según reivindicación 3 en el que el disolvente empleado en el paso d) es acetato de etilo y éter etílico.

6. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 junto a los excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

7. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para su uso como medicamento.

8. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para su uso en el tratamiento de tumores.

9. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 Ó 2 para su uso en el tratamiento de enfermedades parasitarias.

10. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 Ó 2 para su uso en el tratamiento de la malaria.

11. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 Ó 2 para su uso en el tratamiento del carcinoma de cérvix humano.

12. Utilización de los compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 como inhibidores de la enzima ChoK.

13. Una composición farmacéutica según la reivindicación 6 para su uso en el tratamiento de enfermedades parasitarias.

14. Una composición farmacéutica según reivindicación 6 para su uso el tratamiento de tumores.

2, para la un medicamento.

16. Uso de los compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en la 5

elaboración de un medicamento destinado al tratamiento de tumores.

17. Uso de los compuestos definidos en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para la elaboración de un medicamento destinado al tratamiento de cáncer de cérvix humano, preferentemente frente a la línea tumoral de cáncer de cérvix humano Hela.

18. Uso de los compuestos definidos en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la elaboración de un medicamento destinado al tratamiento de enfermedades parasitarias.

19. Uso de los compuestos definidos en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la fabricación de medicamentos destinado al tratamiento de malaria, más preferentemente, malaria causada por P. falciparum.