Formulaciones de interferón-beta exentas de HSA.

Una composición farmacéutica estable sin HSA que comprende interferón - beta (IFN - ß) sustancialmente monomérico solubilizado en una formulación de baja fuerza iónica,

en la que dicha formulación de baja fuerza iónica es una solución que comprende un tampón en cantidad suficiente para mantener el pH de dicha composición superior o inferior en 0,5 unidades a un pH especificado, en el que el pH especificado es 3,0 o 5,0, dicha formulación tiene una fuerza iónica que no supera los 60 mM e incluye mannitol a una concentración del 4 % al 6 % en peso por volumen.

Formulaciones de interferón-beta exentas de HSA

Campo de la invención La invención se refiere, de forma general, a composiciones farmacéuticas, más particularmente a formulaciones estabilizadas de interferón-b que están exentas de seroalbúmina humana como un excipiente farmacéutico añadido.

Antecedentes de la invención Los interferones son una familia de glucoproteínas cuya secreción desde las células está inducida por varias señales que incluyen virus, ARN bicatenarios, otros polinucleótidos, antígenos y mitógenos. Los interferones muestran múltiples actividades biológicas, que incluyen actividades antivirales, antiproliferativas e inmunomoduladoras. Basándose en varios factores, que incluyen actividades antivirales y antiproliferativas, se han diferenciado al menos tres tipos distintos de interferones humanos, a, 1 y y.

El interferón-1 (IFN-1) es el primer tratamiento eficaz identificado para los que tienen esclerosis múltiple (EM) y se ha demostrado que reduce el número de ataques padecidos por los pacientes con EM recidivante y en remisión y EM progresiva secundaria. Las composiciones de IFN-1 también son útiles en el tratamiento de infecciones por hepatitis B yC.

Al igual que con todos los productos farmacéuticos basados en proteínas, un obstáculo importante que debe superarse con el uso de IFN-1 como un agente terapéutico, es la pérdida de utilidad farmacéutica que puede producirse debido a su inestabilidad en formulaciones farmacéuticas. Las inestabilidades físicas que ponen en peligro la actividad y la eficacia de los polipéptidos en las formulaciones farmacéuticas incluyen la desnaturalización y la formación de agregados solubles e insolubles, mientras que las inestabilidades químicas incluyen hidrólisis, formación de imida, oxidación, racemización y desamidación. Se sabe que algunos de estos cambios conducen a la pérdida o a la reducción de la actividad farmacéutica de la proteína de interés. En otros casos, se desconocen los efectos exactos de esos cambios, pero todavía se considera que los productos de degradación resultantes son farmacéuticamente inaceptables debido a los posibles efectos secundarios no deseables.

La estabilización de polipéptidos en composiciones farmacéuticas sigue siendo un área en el que el ensayo y error desempeña un papel principal (revisado por Wang (1999) Int. J. Pharm. 185: 129-188; Wang y Hanson (1988) J. Parenteral Sci. Tech. 42: S3-S26) . Los excipientes que se añaden a formulaciones farmacéuticas de polipéptidos para aumentar su estabilidad incluyen tampones, azúcares, tensioactivos, aminoácidos, polietilenglicoles y polímeros, pero los efectos estabilizantes de estos aditivos químicos varían dependiendo de la proteína.

Uno de los obstáculos principales para preparar formulaciones farmacéuticas de IFN-1 estabilizadas ha sido la mala solubilidad de la molécula de IFN-1. Las formulaciones actuales emplean el uso de HSA como un agente potenciador de la solubilidad para IFN-1. Sin embargo, el uso de HSA tiene inconvenientes. El HSA es un producto de la sangre humana y, por lo tanto, se tiene que recoger de sujetos humanos. Aunque se han adoptado etapas para reducir el riesgo, el uso de productos de sangre humana, tales como HSA, conlleva la posible introducción de virus humanos tales como VIH y VHC. La introducción de HSA en la formulación también interfiere con la capacidad de determinar apropiadamente la estabilidad de IFN-1 en la formulación. Esto se debe a que tanto la HSA como el IFN1 son proteínas y la HSA interfiere con algunos de los ensayos indicadores de estabilidad de IFN-1.

Se han descrito algunas formulaciones de IFN-1 exentas de HSA, por ejemplo, algunas realizaciones de los documentos US- 5004605 y WO 99/15193.

Además, el IFN-1 es una proteína que muestra formación de agregados cuando se prepara en composiciones farmacéuticas y, por tanto, la cantidad de esta proteína en su estado biológicamente activo monómero está comprometida durante el almacenamiento de estas composiciones. La formación de agregados por un polipéptido tal como IFN-1 durante el almacenamiento de una composición farmacéutica puede afectar de manera adversa a la actividad biológica de ese polipéptido, dando como resultado la pérdida de la eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la formación de agregados puede causar otros problemas, tal como el bloqueo de conductos, membranas o bombas cuando la composición farmacéutica de IFN-1 se administra usando un sistema de infusión. Además, la inyección de una composición farmacéutica que comprende la forma agregada de una proteína tiene la posibilidad de generar una reacción inmunógena a la proteína agregada.

Por consiguiente, existe la necesidad de composiciones farmacéuticas de IFN-1 adicionales que comprendan estabilizantes fisiológicamente compatibles que mejoren la solubilidad de esta proteína y estabilicen la proteína frente a la formación de agregados, aumentando de este modo su utilidad farmacéutica.

Resumen de la invención Se proporcionan composiciones que comprenden interferón-beta (IFN-1) como un componente terapéuticamente activo y procedimientos útiles en su preparación. Las composiciones son composiciones farmacéuticas estabilizadasque están exentas de seroalbúmina humana (HSA) como un excipiente farmacéutico y que comprenden IFN-1 sustancialmente monomérico solubilizado en una formulación de fuerza iónica baja. La formulación de fuerza iónica baja es una solución que comprende un tapón en una cantidad suficiente para mantener la composición a un pH especificado más o menos 0, 5 unidades, en el que el pH especificado es de 3, 0 a 5, 0 y que tiene una fuerza iónica de no más de aproximadamente 20 mM. En las composiciones farmacéuticas se incorpora un agente tonificante no iónico para hacer las composiciones isotónicas, en las que el agente tonificante es manitol a un concentración del 4% al 6% de peso por volumen. También se proporcionan métodos para aumentar la solubilidad de IFN-1 en composiciones farmacéuticas y para aumentar la cantidad de IFN-1 monómero en estas composiciones sin el uso de seroalbúmina humana.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra la solubilidad de IFN-b-1b en soluciones de cloruro sódico. La Figura 2 muestra la solubilidad de IFN-b-1b en formulaciones de fuerza iónica baja. La Figura 3 muestra el efecto de pH 3, 0 sobre el estado de agregación de IFN-b-1b. La Figura 4 muestra el efecto de pH 4, 0 sobre el estado de agregación de IFN-b-1b. La Figura 5 muestra el efecto de pH 5, 0 sobre el estado de agregación de IFN-b-1b. La Figura 6 muestra el efecto de la fuerza iónica (NaCl 0 mM) sobre el estado de agregación de IFN-b-1b. La Figura 7 muestra el efecto de la fuerza iónica (NaCl 50 mM) sobre el estado de agregación de IFN-b-1b. La Figura 8 muestra el efecto de la fuerza iónica (NaCl 150 mM) sobre el estado de agregación de IFN-b-1b. La Figura 9 muestra el estado de agregación de IFN-b-1b en una formulación de pH 3, 0 que contiene solamente el agente de tamponamiento glicina 5 mM. La Figura 10 muestra el efecto de un agente tonificante no iónico (sacarosa al 9%) sobre el estado de agregación de IFN-b-1b en la formulación mostrado en la Figura 9. La Figura 11 muestra el efecto de un agente tonificante no iónico (trehalosa al 9%) sobre el estado de agregación de IFN-b-1b en la formulación mostrado en la Figura 9. La Figura 12 muestra el porcentaje de la fuerza de IFN-b-1b inicial en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% o sacarosa al 9% después de 8 semanas de almacenamiento a 40 ºC. La fuerza se determinó mediante absorción UV. La Figura 13 muestra el porcentaje del pico principal de IFN-b-1b en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% o sacarosa al 9% después de 8 semanas de almacenamiento a 40 ºC. El porcentaje del pico principal se determinó mediante análisis de RP-HPLC. La Figura 14 muestra el porcentaje de la fuerza de IFN-b-1b inicial en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% después de 9 meses de almacenamiento a 5 ºC o 30 ºC. La fuerza se determinó mediante espectroscopia UV. La Figura 15 muestra el porcentaje del pico principal de IFN-b-1b en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% después de 9 meses de almacenamiento a 5 ºC o 30 ºC. El porcentaje del pico principal se determinó mediante análisis de RP-HPLC. La Figura 16 muestra el porcentaje de la fuerza de IFN-b-1b inicial en formulaciones líquidas que contienen trehalosa al 9% o sacarosa al 9% después de 3 semanas de almacenamiento a 30 ºC. La fuerza se determinó mediante absorbancia UV. La Figura 17 muestra el porcentaje del pico principal de IFN-b-1b en formulaciones líquidas que contienen... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica estable sin HSA que comprende interferón – beta (IFN – 1) sustancialmente monomérico solubilizado en una formulación de baja fuerza iónica, en la que dicha formulación de baja fuerza iónica es una solución que comprende un tampón en cantidad suficiente para mantener el pH de dicha composición superior o inferior en 0, 5 unidades a un pH especificado, en el que el pH especificado es 3, 0 o 5, 0, dicha formulación tiene una fuerza iónica que no supera los 60 mM e incluye mannitol a una concentración del 4 % al 6 % en peso por volumen.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que el IFN – 1 se une covalentemente a polietilenglicol.

3. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicho tampón se presenta a una concentración de (i) 1 mM a 30 mM; (ii) 1 mM a 10 mM; (iii) 2 mM a 7 mM; (iv) 2 mM a 5 mM; o (v) 5 mM.

4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el tampón se selecciona del grupo formado por: glicina, ácido aspártico, succinato sódico, citrato, formato, acetato, ácido glutámico, histidina, imidazol y fosfato.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el pH especificado es de: (i) 3, 0 a 4, 5; (ii) 3, 0 a 4, 0; (iii) 3, 5 a 4, 0; o (iv) 4, 0.

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el manitol se encuentra a una concentración del 5 % en peso por volumen.

7. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicha composición es una solución acuosa o una suspensión acuosa.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la formulación no tiene especies iónicas adicionales.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición incluye un surfactante no iónico; por ejemplo, en el que el surfactante no iónico es: un éster polioxietileno - sorbitol, como polisorbato 80 o polisorbato 20; o un éster polioxipropileno – polioxietileno, como Pluronic F68 o Pluronic F127; o un alcohol polioxietileno.

10. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho IFN – 1 es el polipéptido con la secuencia aminoácida de IFN – 1 nativo maduro.

11. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el IFN – 1 está glucosilado o no glucosilado.

12. La composición de la reivindicación 11, en la que dicho IFN – 1 es IFN – 1 humano no glucosilado (hIFN – 1) o una muteína biológicamente activa del mismo.

13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el IFN – 1 está presente a una concentración de (i) 0, 01 mg / ml a 20, 0 mg / ml; (ii) 0, 015 mg / ml a 12, 5 mg / ml; (iii) 0, 025 mg / ml a 10, 0 mg / ml;

(iv) 0, 05 mg / ml a 8, 0 mg / ml; (v) 0, 075 mg / ml a 6, 0 mg / ml; o (vi) 0, 1 mg / ml a 4, 0 mg / ml.

14. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su administración por vía oral, nasal, pulmonar o parenteral; por ejemplo, para su administración transdérmica, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraarterial o intraperitoneal.

15. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición se conserva en una jeringa precargada lista para utilizar.

16. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su utilización en el tratamiento de la esclerosis múltiple.

17. Un método de preparación de una composición farmacéutica sin HSA que comprende interferón beta sustancialmente monomérico (IFN – 1) , dicho método comprende preparar dicha composición con una formulación de baja fuerza iónica, en la que dicha formulación de baja fuerza iónica es una solución que comprende manitol a una concentración del 4 % al 6 % en peso por volumen y un tampón en una cantidad suficiente para mantener el pH de dicha composición superior o inferior en 0, 5 unidades en un pH especificado, en el que el pH especificado es de 3, 0 a 5, 0, dicha formulación tiene una fuerza iónica no superior a 60 mM e incorporar dicho IFN – 1 a dicha composición.

18. El método de la reivindicación 17, en el que dicho tampón se encuentra a una concentración de (i) 1 mM a 30 mM; o (ii) 2 mM a 5 mM.