Formulación que comprende mutante(s) de alfa-Galactosidasa A lisosomal para el tratamiento de enfermedad de Fabry.

Una composición farmacéutica que comprende 1-desoxigalactonojirimicina y un portador y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Formulación que comprende mutante (s) de alfa-Galactosidasa A lisosomal para el tratamiento de enfermedad de Fabr y .

Campo de la invención Esta invención se refiere a un método para incrementar la actividad de α-Galactosidasa A lisosomal (α-Gal A) en células de mamífero y para tratamiento de enfermedades de almacenamiento de glucoesfingolípidos, en particular enfermedad de Fabr y , por administración de formulaciones farmacéuticas que comprenden 1-desoxigalactonojirimicina.

Antecedentes de la invención La enfermedad de Fabr y (1) es una enfermedad de almacenamiento de glucoesfingolípidos lisosomales causada por una deficiencia heredada ligada al X de α-galactosidasa A lisosomal (α-Gal A) , una enzima responsable de la hidrólisis de resto α-galactosilo terminal de glucoesfingolípidos. Una deficiencia en la actividad enzimática da como resultado una deposición progresiva de glucoesfingolípidos neutros, predominantemente globotriaosilceramida (trihexósido de ceramida, CTH (por sus siglas en inglés) ) , en células endoteliales vasculares causando fallo renal junto con infarto agudo de miocardio prematuro y apoplejías en pacientes con esta afección (2) . Este trastorno se clasifica por manifestaciones clínicas en dos grupos: una forma clásica con vasculopatía generalizada y una forma variante atípica, con manifestaciones clínicas limitadas a corazón. Recientemente, la variante atípica de la enfermedad se encontró en el 10% de los pacientes varones adultos con hipertrofia ventricular izquierda inexplicada, aumentando la estimación de la frecuencia del trastorno (3) . Como otras enfermedades de almacenamiento lisosomal de glucoesfingolípidos, se sugieren tratamiento de sustitución de enzimas, terapia génica, trasplante de médula ósea y privación de sustrato como potenciales estrategias para el tratamiento de esta enfermedad (4) . Sin embargo, por el momento el único tratamiento para este trastorno es tratamiento sintomático. Por lo tanto, se necesita urgentemente el desarrollo de una nueva estrategia terapéutica para esta enfermedad.

Los estudios (5) sobre actividad de α-Gal A residual de enzimas mutantes revelaron que algunas de las enzimas mutantes tienen propiedades cinéticas similares a α-Gal A normal pero con inestabilidad significativa. Esto se considera como el caso para la mayoría de los pacientes de variante atípica que presentan en general mayor actividad de α-Gal A residual que los pacientes de Fabr y clásicos. Por ejemplo (6) , una α-Gal A mutante purificada con un genotipo de Q279E, encontrada en un paciente con variante atípica de enfermedad de Fabr y , tenía los mismos Km y Vmáx que la enzima normal, pero perdía la mayor parte de la actividad enzimática incubando la enzima a pH 7, 0 a 37º C durante 30 min mientras la enzima normal era estable en la misma condición. Tanto la enzima mutante como la normal eran estables a pH 5, 0 a 37º C. Además, la mayoría de la proteína enzimática mutante en las células formaba agregado en el retículo endoplasmático (RE) y se degradaba rápidamente (7) , sugiriendo que la deficiencia de la actividad enzimática en este mutante podía ser causada principalmente por la salida sin éxito del RE que conduce a una degradación excesiva de la proteína enzimática. La presente invención se centra en la ayuda de escape suave de la enzima del RE para evitar la degradación de la enzima mutante.

La patente internacional WO 94/26714 describe que los N-alquil (C 3-6) -derivados de 1-desoxigalactonojirimicina (1-DGJ) pueden inhibir la biosíntesis de glucolípidos y por lo tanto pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos de almacenamiento de glucolípidos.

La patente internacional WO 9811206 se refiere al tratamiento de trastornos de almacenamiento de glucolípidos por introducción en un individuo de células que pueden expresar y segregar alfa Gal A humana y se pueden considerar por lo tanto como un tratamiento de sustitución enzimático de una enzima defectuosa.

Sumario de la invención La estrategia de la invención se basa en el siguiente modelo. La proteína enzimática mutante tiende a plegarse en una conformación incorrecta en el RE donde el pH es alrededor de 7. Como resultado, la enzima se retrasa desde la ruta de transporte normal del RE a través del aparato de Golgi y endosoma al lisosoma, pero en su lugar se somete a degradación. Por otra parte, la proteína enzimática con una conformación apropiada es transportada al lisosoma suavemente y permanece en una forma activa debido a que la enzima es más estable a un pH menor que 5. Por lo tanto, un compuesto que puede inducir una conformación apropiada en enzima mutante puede servir como potenciador para la enzima. Los presentes autores han encontrado inesperadamente que los inhibidores competitivos fuertes para α-Gal A a bajas concentraciones potencian la actividad de las enzimas mutantes en las células, incluyendo células COS-1 transinfectadas con gen mutante de α-Gal A, fibroblastos de un ratón transgénico que sobreexpresa α-Gal A mutante y linfoblastos de pacientes de Fabr y .

Se observa que aunque se cree que lo anterior es el mecanismo de operación de la presente invención, el éxito de la invención no depende de que éste sea el mecanismo correcto.

De acuerdo con esto, es un objeto de la presente invención proporcionar una formulación farmacéutica para uso en un método para prevenir la degradación de α-Gal A mutante en células de mamífero, en particular en células 2 5

humanas.

Es un objeto más de la invención proporcionar una formulación farmacéutica para uso en un método para mejorar la actividad de α-Gal A en células de mamífero, en particular en células humanas. Los métodos de la presente invención potencian la actividad de α-Gal A tanto normal como mutante, en particular de α-Gal A mutante que está presente en algunas formas de enfermedad de Fabr y .

La formulación farmacéutica de la presente invención comprende un compuesto que se espera que sea eficaz en un método de tratamiento y es un derivado de galactosa, es decir 1-desoxigalactonojirimicina. Por derivado de galactosa se quiere decir que el grupo hidroxilo en la posición C-3 es ecuatorial y el grupo hidroxilo en la posición C4 es axial, como se representa, por ejemplo, por las siguientes estructuras:

en las que R1 representa H; R2 es H y R3, OH.

Es aún un objeto más de la invención proporcionar una formulación farmacéutica que comprende 1desoxigalactonojirimicina para uso en un método de tratamiento para pacientes con enfermedad de Fabr y . La administración de una formulación farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula:

en la que:

R1 representa H;

R2 es H y R3OH, ;

R4 es OH y R5 H;

es decir el compuesto 1-desoxigalactonojirimicina, aliviará los síntomas de la enfermedad de Fabr y aumentando la actividad de α-Gal A mutante en pacientes que padecen la enfermedad de Fabr y .

Los expertos en la materia comprenderán que se puede determinar una cantidad eficaz de los compuestos usados en las formulaciones farmacéuticas de la invención por experimentación de rutina, pero se espera que sea una cantidad que de cómo resultado niveles en suero entre 0, 01 y 100 μM, preferiblemente entre 0, 01 y 10 μM, lo más preferiblemente entre 0, 05 y 1 μM. Se espera que la dosis eficaz de los compuestos sea entre 0, 5 y 1.000 mg/kg de peso corporal al día, preferiblemente entre 0, 5 y 100, lo más preferiblemente entre 1 y 50 mg/kg de peso corporal al día. Los compuestos se pueden administrar solos u opcionalmente junto con portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables, en dosis preformuladas. La administración de una cantidad eficaz del compuesto dará como resultado un aumento en la actividad de la α-Gal A de las células de un paciente suficiente para mejorar los síntomas del paciente. Se espera que un nivel de actividad enzimática de 30% del normal podía mejorar significativamente los síntomas en pacientes de Fabr y , debido a que el bajo intervalo de actividad enzimática encontrado en personas aparentemente normales es aproximadamente 30% del valor promedio (2) .

Las formulaciones farmacéuticas descritas en la presente memoria serán útiles según la invención en métodos para potenciar la actividad intracelular de α-Gal A y tratar la enfermedad de Fabr y .

Breve descripción de los dibujos.

La Fig. 1A-1C. Inhibición in vitro (1A) y potenciación intracelular (1B y 1C) de α-Gal A por compuestos alcaloides. 3

Los compuestos alcaloides usados fueron: (1) 2, 5-Didesoxi-2,... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende 1-desoxigalactonojirimicina y un portador y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

2. Una composición farmacéutica que consiste en 1-desoxigalactonojirimicina y un portador y/o excipiente 5 farmacéuticamente aceptable.

3. Una composición farmacéutica según la reivindicación 1, que comprende 1-desoxigalactonojirimicina y portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables.

4. Una composición farmacéutica según la reivindicación 2, que consiste en 1-desoxigalactonojirimicina y portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables.

5. Una composición farmacéutica como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para uso en terapia.

6. Una composición farmacéutica como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para uso en el tratamiento de enfermedad de Fabr y .

7. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Fabr y según la reivindicación 6, en la que la enfermedad de Fabr y es enfermedad de Fabr y atípica.

8. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Fabr y según la reivindicación 6, en la que la enfermedad de Fabr y es Fabr y clásica con alta actividad enzimática residual.

9. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Fabr y según la reivindicación 6, en la que el paciente presenta una mutación en un sitio distinto del centro catalítico de α-galactosidasa A lisosomal.

10. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Fabr y según una cualquiera de

las reivindicaciones 6-9, en la que la dosis de 1-desoxigalactonojirimicina está entre 0, 5 y 100 mg/kg de peso corporal al día.

11. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Fabr y según la reivindicación 10, en la que la dosis de 1-desoxigalactonojirimicina está entre 1 y 50 mg/kg de peso corporal al día.