Farnesil-dibenzodiazepinonas, procedimientos para su producción y su uso como productos farmacéuticos.

Un compuesto de la fórmula

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

Farnesil-dibenzodiazepinonas, procedimientos para su producción y su uso como productos farmacéuticos Campo de la invención Esta invención se refiere a una nueva dibenzodiazepinona farnesilada, llamada ECO-04601, sus sales y derivados farmacéuticamente aceptables, y a métodos para obtener el compuesto. Un método de obtención del compuesto es por cultivo de una nueva cepa de Micromonospora sp., es decir, 046-ECO11 o [S01]046; otro método implica la expresión de genes de la ruta biosintética en células hospedantes transformadas. La presente invención se refiere además a cepas de Micromonospora sp. 046-ECO11 y [S01]046, al uso de ECO-04601 y sus sales y derivados farmacéuticamente aceptables como productos farmacéuticos, en particular a su uso como inhibidores del crecimiento de células de cáncer, crecimiento de células bacterianas, lipooxigenasa de mamífero, y para el tratamiento de inflamación aguda y crónica, y a composiciones farmacéuticas que comprenden ECO-04601 o una de sus sales o derivados farmacéuticamente aceptable. La presente solicitud describe nuevas secuencias de polinucleótidos y sus proteínas codificadas, que están implicadas en la biosíntesis de ECO-04601.

Antecedentes de la invención Los euactinomicetos son un subgrupo de un grupo grande y complejo de bacterias Gram positivas conocido como actinomicetos. Durante las últimas décadas, estos organismos que son abundantes en el suelo, han generado un interés comercial y científico importante como resultado del gran número de compuestos terapéuticamente útiles, en particular antibióticos, productos como metabolitos secundarios. La búsqueda intensiva de cepas capaces de producir nuevos antibióticos ha conducido a la identificación de cientos de especies nuevas.

Muchos de los euactinomicetos, en particular los géneros Streptomyces y Saccharopolyspora estrechamente relacionado, se han estudiado ampliamente. Ambos géneros producen una notable diversidad de metabolitos biológicamente activos. Debido a la importancia comercial de estos compuestos, se sabe mucho sobre la genética y fisiología de estos organismos.

Otro género representativo de euactinomicetos, Micromonospora, también ha generado interés comercial. Por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 5.541.181 (Ohkuma et al.) describe un compuesto de dibenzodiazepinona, específicamente la 5-farnesil-4, 7, 9-trihidroxi-dibenzodiazepin-11-ona (llamada "BU-4664L") , producida por una cepa conocida de euactinomicetos, Midromonospora sp. M990-6 (ATCC 55378) . La patente de Ohkurma et al. describe que BU-4664L y sus derivados químicamente sintetizados de di y tri-alcoxi y aciloxi tienen actividades antiinflamatorias y anticélulas tumorales.

Aunque se han identificado muchos compuestos biológicamente activos de bacterias, sigue siendo necesario obtener nuevos compuestos naturales con propiedades potenciadas. Los métodos actuales de obtención de dichos compuestos incluyen el cribado de aislados naturales y la modificación química de compuestos existentes, los cuales son ambos costosos y requieren tiempo. Los métodos de cribado actuales se basan en propiedades biológicas generales del compuesto, que requieren el conocimiento previo de la estructura de las moléculas. Existen métodos para la modificación química de compuestos activos conocidos, pero todavía tienen limitaciones prácticas como el tipo de compuestos que se pueden obtener.

Por lo tanto, existe una necesidad considerable de obtener compuestos farmacéuticamente activos de una forma rentable y con alto rendimiento. La presente invención resuelve estos problemas proporcionando una nueva cepa de Micromonospora capaz de producir un nuevo compuesto terapéutico potente, así como reactivos (p. ej., polinucleótidos, vectores que comprenden polinucleótidos y células hospedantes que comprenden vectores) y métodos para generar nuevos compuestos por biosíntesis nueva en lugar de por síntesis química.

Sumario de la invención En un aspecto, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (Fórmula II) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional, se describe en la presente memoria una clase de compuestos representados por la fórmula 5 I:

Fórmula I en donde, W1, W2 y W3 se selecciona cada uno independientemente de o la cadena del triciclo puede terminar en W3, W2 o W1 siendo W3, W2 o W1 respectivamente -CH=O o -CH2OH; A se selecciona de -NH--, -NCH2R1, -NC (O) R1; R1 se selecciona de alquilo C1-6, alqueno C2-6, arilo o heteroarilo;

R2, R3 y R4 se selecciona cada uno independientemente de H, R5, -C (O) R6 R5 se selecciona cada uno independientemente de alquilo C1-6, alcaleno C2-7, arilo o heteroarilo; R6 se selecciona cada uno independientemente de H, alquilo C1-6, alcaleno C2-7, arilo o heteroarilo; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable. En una realización, A es NH.

En otra realización, A es -NCH2R1. En otra realización, A es -NC (O) R1, En otra realización, R2 es H. En otra realización, R3 es H. En otra realización, R4 es H.

En otra realización, R2, R3 y R4 son cada uno H.

En otra realización, R2, R3 y R4 son cada uno H, y W1 es -CH=CH-. En otra realización, R2, R3 y R4 son cada uno H, y W2 es -CH=CH-. En otra realización, R2, R3 y R4 son cada uno H, y W3 es -CH=CH-. En otra realización, A es NH y R2, R3 y R4 son cada uno H. En otra realización, A es NH, cada uno de W1, W2, y W3 es -CH=CH-. Se describe además en la presente memoria un compuesto del grupo que consiste en:

En un aspecto, se describen en la presente memoria composiciones de los compuestos de fórmula I junto con un 5 vehículo farmacéuticamente aceptable.

Se describe además en la presente memoria una farnesil-dibenzodiazepinona obtenida por un método que comprende: a) cultivar la cepa de Micromonospora sp. [S01]046, en donde el cultivo se lleva a cabo en condiciones aerobias en un medio nutriente que comprende al menos una fuente de átomos de carbono y al menos una fuente de átomos de nitrógeno; y b) aislar una farnesil-dibenzodiazepinona de la bacteria cultivada en la etapa (a) . En una realización, la farnesil-dibenzodiazepinona es el compuesto de fórmula II.

La farnesil-dibenzodiazepinona genera espectros de RMN esencialmente como se muestran en las figuras 3, 4, 5, 6

y 7. Alternativamente, la farnesil-dibenzodiazepinona genera un espectro de RMN de 1H de la figura 3. La invención abarca además un procedimiento para hacer un compuesto de farnesil-dibenzodiazepinona de la presente invención, que comprende cultivar la cepa de Micromonospora sp. 046-ECO11, en un medio nutriente que comprende al menos una fuente de átomos de carbono y al menos una fuente de átomos de nitrógeno, y aislar y purificar el compuesto.

La invención abarca además un procedimiento para hacer un compuesto de farnesil-dibenzodiazepinona de la presente invención, que comprende cultivar la cepa de Micromonospora sp. [S01]046, en un medio nutriente que comprende al menos una fuente de átomos de carbono y al menos una fuente de átomos de nitrógeno, y aislar y purificar el compuesto.

En una realización, el cultivo se produce en condiciones aerobias.

En otra realización, las fuentes de átomos de carbono y átomos de nitrógeno se eligen de los componentes mostrados en la tabla 16. En otra realización, el cultivo se lleva a cabo a una temperatura en el intervalo de 18º C a 40º C. En otra realización,

el intervalo de temperatura es de 18º C a 29º C. En otra realización, el cultivo se lleva a cabo a un pH en un intervalo de 6 a 9. La invención abarca además la Micromonospora sp. que tiene un número de acceso IDAC 231203-01. En una realización, el compuesto es ECO-04601. La invención abarca además un compuesto de fórmula II para usar en un método para inhibir el crecimiento de una

célula de cáncer en un mamífero. En una realización, el compuesto es ECO-04601. La invención abarca además un compuesto de fórmula II para usar en un método para tratar una afección

precancerosa o cancerosa en un mamífero. En una realización, el compuesto es ECO-04601. La invención abarca además un compuesto de fórmula II para usar en un método para tratar una infección

bacteriana en un mamífero. En una realización, el compuesto es ECO-04601. La invención abarca además un compuesto de fórmula II para usar en un método para reducir la inflamación en un

mamífero. En una realización, el compuesto es ECO-04601. La presente solicitud... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de la fórmula

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable. 2. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. Un procedimiento para hacer el compuesto de la reivindicación 1, que comprende el cultivo de la cepa de Micromonospora sp. que tiene el nº de acceso IDAC 231203-01 o la cepa de Micromonospora sp. que tiene el nº de acceso IDAC 070303-01, en un medio nutriente que comprende al menos una fuente de átomos de carbono y al menos una fuente de átomos de nitrógeno, y el aislamiento y purificación de dicho compuesto.

4. El procedimiento de la reivindicación 3, en donde dicho cultivo se produce en condiciones aerobias.

5. El procedimiento de la reivindicación 3, en donde dichas fuentes de átomos de carbono y átomos de nitrógeno se eligen de los siguientes componentes: glucosa, sacarosa, lactosa, melaza de caña de azúcar, almidón de maíz,

almidón soluble, dextrina de patata, sólido de maceración de maíz, aguas de maceración de maíz, levadura seca, extracto de levadura, extracto de malta, glicerol, polvo de soja, harina de soja, extracto de carne, bacto-peptona, (NH4) 2SO4 y ácido casamino.

6. El procedimiento de la reivindicación 3, en donde dicho cultivo se lleva a cabo a una temperatura en el intervalo de 18º C a 40º C.

7. El procedimiento de la reivindicación 3, en donde dicho cultivo se lleva a cabo a un pH en el intervalo de 6 a 9.

8. Micromonospora sp. que tiene el nº de acceso IDAC 231203-01 o el nº de acceso IDAC 070303-01.

9. Uso de un compuesto de la reivindicación 1, para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de una célula de cáncer, tratar el crecimiento tumoral o tratar una afección precancerosa o cancerosa en un mamífero.

10. Uso de un compuesto de la reivindicación 1, para la preparación de una composición farmacéutica para tratar una infección bacteriana o reducir la inflamación en un mamífero.

11. Un compuesto de la reivindicación 1, para usar en la inhibición del crecimiento de una célula de cáncer, tratar el crecimiento tumoral o tratar una afección precancerosa o cancerosa en un mamífero.

12. Un compuesto de la reivindicación 1, para usar en el tratamiento de una infección bacteriana o reducir la 30 inflamación en un mamífero.