Derivados de tiazol y pirazol como inhibidores de cinasa Flt-3.

Compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

(5-fenil-tiazol-2-il)-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-amina;

(3-dimetilaminometil-fenil)-(5-fenil-tiazol-2-il)-amina;

[5-(4-metoxi-fenil)-tiazol-2-il]-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)- fenil]-amina;

(4-metoxi-fenil)-[5-(4-metoxi-fenil)-tiazol-2-il]-amina;

[5-(4-metoxi-fenil)-tiazol-2-il]-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;

[4-(2-dimetilamino-etoxi)-fenil]-[5-(4-metoxi-fenil)-tiazol-2-il]-amina;

4-{2-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenilamino]-tiazol-5-il}-fenol;

{5-[4-(3-dimetilamino-propoxi)-fenil]-tiazol-2-il}-fenil-amina;

4-[5-(3-metoxi-fenil)-tiazol-2-ilamino]-fenol;

4-[5-(3-metoxi-fenil)-tiazol-2-il]-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-amina;

(4-metoxi-fenil)-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

4-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il-amino)-fenol; [4-(2-dimetilamino-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

[4-(3-dimetilamino-propoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

[4-(2-di-isopropilamino-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-tiazol-2-il)-amina;

(5-fenil-1H-pirazol-3-il)-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-amina;

[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il)-amina;

[4-(2-dimetilamino-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il)-amina;

[4-(3-dimetilamino-propoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il)-amina;

[4-(2-dietilamino-etoxi)-fenil]-(5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il)-amina;

[5-(2-cloro-fenil)-1H-pirazol-3-il]-fenil-amina;

[5-(2-cloro-fenil)-1H-pirazol-3-il]-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;

y sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos.

Derivados de tiazol y pirazol como inhibidores de cinasa Flt-3

La invenciïn se refiere a derivados de tiazol y pirazol y a procedimientos para la preparaciïn de los mismos, a composiciones farmacïuticas que comprenden tales derivados y al uso de tales derivados para la preparaciïn de composiciones farmacïuticas para el tratamiento especialmente de una enfermedad proliferativa, tal como una enfermedad tumoral, en particular enfermedades tales que responden a una inhibiciïn de la cinasa Flt-3.

La invenciïn se refiere a derivados de tiazol y pirazol de tal como se muestra a modo de ejemplo en el presente documento como una sal de dichos compuestos, que comparten la siguiente la fïrmula general:

en la que Q es S y X es C, o Q es CH y X es N;

R1 es fenilo no sustituido o sustituido; y

R2 es arilo o heteroarilo no sustituido o sustituido.

Los tïrminos generales usados anteriormente en el presente documento y a continuaciïn en el presente documento, tienen preferiblemente, dentro de esta divulgaciïn, los siguientes significados, a menos que se indique lo contrario:

“Compuestos de fïrmula (I) ” significa los compuestos facilitados a modo de ejemplo en el presente documento.

Cuando se usa la forma plural para compuestos, sales, preparaciones farmacïuticas, enfermedades y similares, esta pretende significar tambiïn un ïnico compuesto, sal, o similar.

Cuando se mencionan compuestos de fïrmula I que pueden formar tautïmeros, esto significa que incluyen tambiïn a los tautïmeros de tales compuestos de fïrmula I.

En vista de la estrecha relaciïn entre los compuestos novedosos en forma libre y en la forma de sus sales, incluyendo las sales que se pueden utilizar como productos intermedios, por ejemplo en la purificaciïn o identificaciïn de los compuestos novedosos, debe entenderse que cualquier referencia a los compuestos libres anteriormente en el presente documento y a continuaciïn en el presente documento, tambiïn se refiere a las sales correspondientes, segïn sea apropiado y conveniente.

Las sales son preferiblemente las sales farmacïuticamente aceptables de los compuestos de fïrmula I, si llevan grupos formadores de sal.

Los grupos formadores de sal son grupos o radicales que tienen propiedades ïcidas o bïsicas. Los compuestos que tienen al menos un grupo bïsico o al menos un radical bïsico, por ejemplo amino, un grupo amino secundario que no forme un enlace peptïdico o un radical piridilo, pueden formar sales de adiciïn de ïcido, por ejemplo con ïcidos inorgïnicos, tales como ïcido clorhïdrico, ïcido sulfïrico o ïcido fosfïrico, o con ïcidos carboxïlicos o sulfïnicos orgïnicos adecuados, por ejemplo ïcidos mono o dicarboxïlicos alifïticos, tales como ïcido trifluoroacïtico, ïcido acïtico, ïcido propiïnico, ïcido glicïlico, ïcido succïnico, ïcido maleico, ïcido fumïrico, ïcido hidroximaleico, ïcido mïlico, ïcido tartïrico, ïcido cïtrico o ïcido oxïlico, o aminoïcidos, tales como arginina o lisina, ïcidos carboxïlicos aromïticos, tales como ïcido benzoico, ïcido 2-fenoxi-benzoico, ïcido 2-acetoxi-benzoico, ïcido salicïlico, ïcido 4aminosalicïlico, ïcidos carboxïlicos aromïticos-alifïticos, tales como ïcido mandïlico o ïcido cinïmico, ïcidos carboxïlicos heteroaromïticos, tales como ïcido nicotïnico o ïcido isonicotïnico, ïcidos sulfïnicos alifïticos, tales como ïcido metan, etan, o 2-hidroxietanosulfïnico, o ïcidos sulfïnicos aromïticos, por ejemplo ïcido benceno, p

tolueno o naftaleno-2-sulfïnico. Cuando estïn presentes varios grupos bïsicos, pueden formarse sales de adiciïn de mono o poliïcido.

Los compuestos que tienen grupos ïcidos, un grupo carboxilo o un grupo hidroxilo fenïlico, pueden formar sales de metales o de amonio, tales como sales de metales alcalinos o de metales alcalinotïrreos, por ejemplo sales de sodio, potasio, magnesio o calcio, o sales de amonio con amonïaco o con aminas orgïnicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietilamina o tri- (2-hidroxi-etil) -amina, o bases heterocïclicas, por ejemplo N-etilpiperidina o N, N’-dimetil-piperazina. Son posibles mezclas de sales.

Los compuestos que tienen grupos tanto ïcidos como bïsicos, pueden formar sales internas.

Para los fines de aislamiento o purificaciïn, asï como en el caso de los compuestos que se usan ademïs como productos intermedios, tambiïn es posible usar sales farmacïuticamente inaceptables, por ejemplo los picratos. Sin embargo, para fines terapïuticos, solamente pueden utilizarse sales farmacïuticamente aceptables, no tïxicas, y por tanto se prefieren estas sales.

Los ïtomos de carbono asimïtricos de un compuesto de fïrmula I que estïn opcionalmente presentes, pueden existir en la configuraciïn (R) , (S) o (R, S) , preferiblemente en la configuraciïn (R) o (S) . Los sustituyentes en un doble enlace pueden estar presentes en la forma cis (=Z-) o trans (=E-) . Por tanto, los compuestos pueden estar presentes como mezclas de isïmeros o preferiblemente como isïmeros puros.

El sufijo “inferior” indica un radical que tiene de 1 hasta, e incluyendo, un mïximo de 7, especialmente de 1 hasta, e incluyendo, un mïximo de 4 ïtomos de carbono, siendo los radicales en cuestiïn lineales o ramificados, con ramificaciïn individual o mïltiple. Alquilo inferior es, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, sec-propilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo o n-heptilo.

Halo/halïgeno es preferiblemente yodo, bromo. cloro o fluoro, especialmente fluoro, cloro o bromo.

Los compuestos de fïrmula I tienen propiedades farmacolïgicas valiosas y son ïtiles en el tratamiento de enfermedades proliferativas, en particular de las enfermedades dependientes de la proteïna tirosina cinasa y especialmente dependientes de Flt-3.

La eficacia de los compuestos de fïrmula I como inhibidores de la actividad de la proteïna tirosina cinasa Flt-3, puede demostrarse tal como sigue:

Se usa el vector donador de baculovirus pFbacG01 (GIBCO) para generar un baculovirus recombinante que expresa la regiïn de aminoïcido de los aminoïcidos 563-993 del dominio de cinasa citoplasmïtico de la Flt-3 humana. La secuencia de codificaciïn para el dominio citoplasmïtico de Flt-3 se amplifica mediante PCR a partir de bibliotecas de ADN-c humanas (Clontech) . Los fragmentos de ADN amplificados y el vector pFbacG01 se hacen compatibles para el ligamiento mediante digestiïn con BamH1 y HindIII. El ligamiento de estos fragmentos de ADN da como resultado el plïsmido donador de baculovirus Flt-3 (1.1) . La producciïn de los virus, la expresiïn de las proteïnas en cïlulas Sf9, y la purificaciïn de las proteïnas fusionadas con GST, se llevan a cabo tal como sigue:

Producciïn de virus: El vector de transferencia (pFbacG01-Flt-3) que contiene el dominio de cinasa Flt-3 se transfecta en la lïnea celular DH10Bac (GIBCO) y se siembran en placa las cïlulas transfectadas sobre placas de agar selectivo. Las colonias sin inserciïn de la secuencia de fusiïn en el genoma viral (portado por la bacteria) son azules. Se recogen colonias blancas individuales y se aïsla el ADN viral (bïcmido) a partir de las bacterias mediante procedimientos de purificaciïn de plïsmidos convencionales. Luego se transfectan las cïlulas Sf9 o Sf21 (Colecciïn americana de de cultivos tipo) en matraces con el ADN viral utilizando el reactivo Cellfectin.

Expresiïn de proteïna en cïlulas Sf9: Se recoge medio que contiene virus a partir del cultivo celular transfectado y se usa para la infecciïn para aumentar su titulaciïn. Se usa el medio que contiene virus obtenido tras dos rondas de infecciïn para la expresiïn de proteïna a gran escala. Para la expresiïn de proteïna a gran escala, se siembran placas de cultivo tisular redondas de 100 cm2 con 5 x 107 cïlulas/placa, y se infectan con 1 ml de medio que contiene virus (aproximadamente 5 MOI) . Tras 3 dïas, se raspan las cïlulas de la placa y se centrifugan a 500 rpm durante 5 minutos. Se vuelven a suspender los sedimentos celulares de 10-20 placas de 100 cm2 en 50 ml de tampïn de lisis congelado (Tris-HCl 25 mM, pH 7, 5, EDTA 2 mM, NP-40 al 1%, DTT 1 mM, PMSF 1 mM) . Se agitan las cïlulas sobre hielo durante 15 min y luego se centrifugan a 5.000 rpm durante 20 minutos.

Purificaciïn de proteïnas marcadas con GST: Se carga el lisado celular centrifugado sobre una columna de 2 ml de glutatiïn-Sepharose (Pharmacia) , y se lava tres veces con 10 ml de Tris-HCl 25 mM, pH 7, 5, EDTA 2 mM, DTT 1 mM, NaCl 200 mM. Luego se eluye la proteïna marcada con GST mediante 10 aplicaciones (de 1 ml cada una) de Tris-HCl 25 mM, pH de 7, 5, glutatiïn... [Seguir leyendo]

1. Compuesto seleccionado del grupo que consiste en: (5-fenil-tiazol-2-il) -[4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenil]-amina; (3-dimetilaminometil-fenil) - (5-fenil-tiazol-2-il) -amina; [5- (4-metoxi-fenil) -tiazol-2-il]-[4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenil]-amina; (4-metoxi-fenil) -[5- (4-metoxi-fenil) -tiazol-2-il]-amina; [5- (4-metoxi-fenil) -tiazol-2-il]-[4- (4-metil-piperazin-1-il) -fenil]-amina; [4- (2-dimetilamino-etoxi) -fenil]-[5- (4-metoxi-fenil) -tiazol-2-il]-amina; 4-{2-[4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenilamino]-tiazol-5-il}-fenol; {5-[4- (3-dimetilamino-propoxi) -fenil]-tiazol-2-il}-fenil-amina; 4-[5- (3-metoxi-fenil) -tiazol-2-ilamino]-fenol; 4-[5- (3-metoxi-fenil) -tiazol-2-il]-[4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenil]-amina; (4-metoxi-fenil) - (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; 4- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il-amino) -fenol; [4- (2-dimetilamino-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (3-dimetilamino-propoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-piperidin-1-il-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-di-isopropilamino-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-morfolin-4-il-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; (5-fenil-1H-pirazol-3-il) -[4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenil]-amina; [4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il) -amina; [4- (2-dimetilamino-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il) -amina; [4- (3-dimetilamino-propoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il) -amina; [4- (2-dietilamino-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-1H-pirazol-3-il) -amina; [5- (2-cloro-fenil) -1H-pirazol-3-il]-fenil-amina; [5- (2-cloro-fenil) -1H-pirazol-3-il]-[4- (4-metil-piperazin-1-il) -fenil]-amina; y sales farmacïuticamente aceptables de estos compuestos.

2. Compuesto seleccionado del grupo que consiste en: (3-dimetilaminometil-fenil) - (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (4-metil-piperazin-1-il) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina;

[4- (2-dietilamino-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; {4-[2- (1-metil-pirrolidin-2-il) -etoxi]-fenil}- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; 4-[[3- (4-metil-piperazin-1-il) -propil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amino]-fenol; [5- (3-bromo-fenil) -tiazol-2-il]-[4- (2-dietilamino-etoxi) -fenil]-amina;

[5- (2-cloro-fenil) -tiazol-2-il]-[4- (2-dietilamino-etoxi) -fenil]-amina; [4- (4-metil-piperazin-1-il) -fenil]-[5- (3-tiofen-3-il-fenil) -tiazol-2-il]-amina; [4- (2-dietilamino-etoxi) -fenil]-[5- (3-tiofen-3-il-fenil) -tiazol-2-il]-amina; [4- (4-dimetilamino-etoxi) -2-metil-fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; 4- (4-dimetilamino-propoxi) -2-trifluorometil-fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina;

[4- (4-dimetilamino-etoxi) -2-trifluorometil-fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (4-dimetilamino-etoxi) -2-trifluorometil-fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-diisopropilamino-etoxi) -2-trifluorometil-fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-pirrolidin-1-il-etoxi) -2-trifluorometil-fenil]- (5-tiofen-3-il-tiazol-2-il) -amina; [4- (2-dietilamino-etoxi) -fenil]- (5-tiofen-2-il-1H-pirazol-3-il) -amina;

y sales farmacïuticamente aceptables de estos compuestos.

3. Compuesto segïn la reivindicaciïn 1 o la reivindicaciïn 2, o una sal farmacïuticamente aceptable del mismo, para su uso en un mïtodo para el tratamiento del cuerpo humano o animal.

4. Composiciïn farmacïutica que comprende un compuesto segïn la reivindicaciïn 1 o la reivindicaciïn 2, o una sal farmacïuticamente aceptable del mismo, junto con al menos un portador farmacïuticamente aceptable.

5. Uso de un compuesto segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 ï 2, o una sal farmacïuticamente aceptable del mismo, para la preparaciïn de una composiciïn farmacïutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.

6. Uso de un compuesto segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 ï 2, o una sal farmacïuticamente aceptable del mismo, para la preparaciïn de una composiciïn farmacïutica para el tratamiento de una enfermedad 25 que responde a la inhibiciïn de la cinasa Flt-3.

7. Compuesto segïn la reivindicaciïn 1 o la reivindicaciïn 2, o una sal farmacïuticamente aceptable del mismo, en combinaciïn con otro agente antiproliferativo.