Constructos peptídicos sintéticos para el diagnóstico y tratamiento de periodontitis asociada con Porphyromonas gingivalis.

Una composición para uso para provocar una respuesta inmunitaria frente a Porphyromonas gingivalis,

incluyendo la composición un adyuvante adecuado y/o vehículo o excipiente aceptable y al menos un péptido seleccionado del grupo que consiste en:

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Constructos peptídicos sintéticos para el diagnóstico y tratamiento de periodontitis asociada con Porphyromonas gingivalis

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se refiere a una composición oral y a una composición inmunógena para la supresión de los efectos patógenos de la bacteria intraoral Porphyromonas gingivalis asociada con enfermedad periodontal. También se refiere a pruebas de diagnóstico para determinar la presencia de Porphyromonas gingivalis en muestras de placa subgingival y anticuerpos específicos anti-P. gingivalis en suero. Las composiciones comprenden constructos peptídicos sintéticos que corresponden a áreas estructural y funcionalmente significativas del complejo de proteinasa-adhesina PrtR-PrtK de Porphyromonas gingivalis. También se describen métodos para preparar los constructos peptídicos sintéticos. Las constructos peptídicos sintéticos son útiles como inmunógenos para provocar una respuesta inmunitaria frente a P. gingivalis, y se pueden usar para generar antisuero específico de la proteína y específico del péptido, útil para inmunización pasiva y como reactivos para ensayos de diagnóstico.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las enfermedades periodontales son enfermedades inflamatorias, asociadas a bacterias, de los tejidos de soporte de los dientes, y van desde la forma relativamente leve de la gingivitis, la inflamación reversible, no específica, del tejido gingival, a las formas más agresivas de periodontitis, que se caracterizan por la destrucción de las estructuras de soporte del diente. La periodontitis se asocia con una infección subgingival de un consorcio de bacterias específicas gramnegativas que conduce a la destrucción del periodoncio y es un importante problema de salud pública. Una bacteria que ha suscitado considerable interés es Porphyromonas gingivalis, ya que la recuperación de este microorganismo a partir de lesiones de periodontitis en adultos puede ser hasta el 50% de la flora subgingival cultivable anaeróbicamente, mientras que P. gingivalis rara vez se recupera, y si acaso en pequeñas cantidades, a partir de sitios sanos. Un incremento proporcional en el nivel de P. gingivalis en placa subgingival se ha asociado con un incremento en la gravedad de la periodontitis, y la erradicación del microorganismo a partir de la población microbiana subgingival cultivable se logra mediante la resolución de la enfermedad. La progresión de las lesiones de periodontitis en primates no humanos se ha demostrado con la implantación subgingival de P. gingivalis. Estos hallazgos, tanto en animales como en seres humanos, sugieren un papel importante de P. gingivalis en el desarrollo de periodontitis en adultos.

P. gingivalis es un bacilo gramnegativo proteolítico, anaerobio, con pigmentos negros, que obtiene energía del metabolismo de aminoácidos específicos. El microorganismo tiene una absoluta necesidad de hierro para su crecimiento, preferentemente en la forma hemo, o su producto de oxidación de Fe (III) hemina, y, cuando se hace crecer en condiciones de hemina en exceso es altamente virulento en los animales de experimentación. Varios factores de virulencia se han implicado en la patogenicidad de P. gingivalis, incluyendo la cápsula, adhesinas, citotoxinas y enzimas hidrolíticas extracelulares. A fin de desarrollar una vacuna eficaz y segura para prevenir la colonización por P. gingivalis, es necesario identificar antígenos eficaces que estén implicados en la virulencia, que tengan utilidad como inmunógenos para generar anticuerpos neutralizantes.

Se ha purificado y caracterizado un complejo multiproteico de 300 kDa de cisteína proteinasas y adhesinas, que es un factor de virulencia importante para P. gingivalis. Este complejo se caracterizó bioquímicamente y se describió en la Solicitud de Patente Internacional WO 9716542. El complejo consiste en una proteinasa específica de Arg de 160 kDa con dominios de adhesinas C-terminales (denominada PrtR) asociada con una proteasa específica de Lys de 163 kDa también con dominios de adhesinas C-terminales (denominada PrtK). Los dominios de adhesinas C- terminales de la PrtR y PrtK tienen homología con una hemaglutinina de P. gingivalis denominada HagA. El gen que codifica HagA se ha descrito en la solicitud internacional WO 96/17936.

El documento WO95/07286 describe fragmentos de gingipaína, una proteína que es parte del complejo PrtK-PrtR, y su uso en composiciones para preparaciones inmunógenas, incluyendo vacunas.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Se ha identificado un número de secuencias estructural y funcionalmente significativas del complejo multiproteico de 300 kDa de cisteína proteinasas y adhesinas que es un factor de virulencia importante para P. gingivalis. Estas secuencias se exponen en la Tabla 1.

Tabla 1. Secuencias de aminoácidos del complejo de proteinasa-adhesina PrtR-PrtK de significancia funcional.

En consecuencia, en un primer aspecto, la presente invención consiste en una composición para uso para provocar una respuesta inmunitaria frente a Porphyromonas gingivalis, incluyendo la composición un adyuvante adecuado y/o vehículo o excipiente aceptable y al menos un péptido seleccionado del grupo que consiste en:

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Cuando la composición incluye más de un péptido, los péptidos pueden estar presentes en la composición como péptidos individuales o en formas multímeras. Cuando se usan formas multímeras, el multímero puede comprender múltiples copias del mismo péptido; sin embargo, se prefiere que el multímero incluya péptidos diferentes.

Los péptidos (PAS1 y PAS2) de la Tabla 1 representan secuencias de las cisteína proteinasas específicas de Arg (PrtR45) y específicas de Lys (PrtK48) que forman el sitio activo que contiene la diada catalítica Cys-His.

En un segundo aspecto, la presente invención consiste en un péptido, seleccionándose el péptido de un grupo que consiste en:

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Como será fácilmente manifiesto para las personas expertas en esta área, estos péptidos se pueden usar como antígenos en pruebas de diagnóstico, o como inmunógenos en formulaciones.

En un tercer aspecto, la presente invención consiste en una preparación de anticuerpos que comprende anticuerpos dirigidos específicamente contra la composición del primer aspecto de la invención o los péptidos del segundo aspecto de la invención. Los anticuerpos pueden ser anticuerpos policlonales o monoclonales.

En un cuarto aspecto, la presente invención consiste en el uso de una preparación de anticuerpos del tercer aspecto en la preparación de un medicamento para el tratamiento de Porphyromonas gingivalis.

En una realización preferida, el uso de dicha preparación de anticuerpos en la preparación de un medicamento se caracteriza por el hecho de que el medicamento es un colutorio o un dentífrico.

En un quinto aspecto, la presente invención consiste en el uso de la composición del primer aspecto o el uso del péptido del segundo aspecto en la preparación de un medicamento para el tratamiento de Porphyromonas gingivalis.

En una realización preferida, el uso de dicha composición o de dicho péptido en la preparación de un medicamento se caracteriza por el hecho de que el medicamento es un colutorio o un dentífrico.

En un sexto aspecto, la presente invención consiste en el uso de una composición del primer aspecto en la preparación de un medicamento para uso en la reducción de la posibilidad de infección por Porphyromonas gingivalis en un individuo y/o la gravedad de dicha enfermedad.

A lo largo de esta memoria descriptiva, excepto que el contexto lo requiera de otro modo, la palabra... [Seguir leyendo]

1. Una composición para uso para provocar una respuesta inmunitaria frente a Porphyromonas gingivalis, incluyendo la composición un adyuvante adecuado y/o vehículo o excipiente aceptable y al menos un péptido seleccionado del grupo que consiste en:

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2. Una composición según la reivindicación 1, en la que la composición incluye más de un péptido.

3. Una composición según la reivindicación 2, en la que la composición incluye uno o más multímeros de diferentes péptidos.

4. Un péptido seleccionado del grupo que consiste en:

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5. Una preparación de anticuerpos que comprende anticuerpos dirigidos específicamente contra un péptido según la reivindicación 4.

6. Una preparación de anticuerpos según la reivindicación 5, en la que los anticuerpos son anticuerpos policlonales.

7. Una preparación de anticuerpos según la reivindicación 5, en la que los anticuerpos son anticuerpos monoclonales.

8. El uso de una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un péptido como se define en la reivindicación 4, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de Porphyromonas gingivalis.

9. El uso de una preparación de anticuerpos como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de Porphyromonas gingivalis.

10. El uso según la reivindicación 8 o reivindicación 9, en el que el medicamento se administra como un colutorio o como un dentífrico.

11. El uso de una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la preparación de un medicamento para uso en la reducción de la posibilidad de infección por Porphyromonas gingivalis en un individuo, y/o la gravedad de dicha enfermedad.