Compuestos que eligen anticuerpos como diana.

Un compuesto que elige anticuerpos como diana que comprende uno o más agentes que eligen diana ligados covalentemente al sitio de combinación de anticuerpos monoclonales para aldolasa de ratón 38C2 o una versión humanizada o quimérica humana de los mismos mediante un ligador de fórmula X-Y-Z en la que:

(i) X es una cadena de conexión lineal o ramificada de átomos que comprende cualquiera de C, H, N, O, P, S, Si, F, Cl, Br y I, o una sal de los mismos, y que comprende una unidad de éter de repetición de entre 2-100 unidades,

(ii) Y es opcional y es un anillo saturado o insaturado homo- o heterocarbocíclico de 5 ó 6 miembros individual o condensado localizado dentro de 1-20 átomos de Z, y

(iii) Z es un grupo acil-beta-lactama para ligar covalentemente el uno o más agentes que eligen diana con una cadena lateral de un aminoácido reactivo en el sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a compuestos para elegir como diana moléculas biológicas y procedimientos de preparación y uso de los compuestos. Los fármacos farmacéuticos convencionalmente desarrollados y las moléculas efectoras biológicas son frecuentemente de uso limitado en terapia debido a la alta toxicidad. Se han usado diversos enfoques durante los años para mejorar el índice terapéutico de tales fármacos o efectores. Un enfoque ha sido acoplar un fármaco o efector a un agente que elige ligandos como diana tal como un anticuerpo. En este caso, el anticuerpo se usa para cambiar la distribución del fármaco o efector de forma que más de él pueda localizarse donde más se necesita in vivo. La elección de diana mejorada de fármacos o efectores de peso molecular pequeño se ha conseguido complejando el fármaco o efector con un compuesto de mayor peso molecular. Por ejemplo, la patente europea EP 217577 desvela que la elevada semivida y la elección de diana por un agente se logra formando complejos in vivo entre agentes modificados con hapteno y anticuerpos anti-hapteno. Similarmente, la publicación de solicitud de patente internacional WO 98/22141 desvela conjugados de agentes terapéuticos y haptenos. Los conjugados se administran a un sujeto y circulan en la corriente sanguínea del sujeto. Los conjugados circulantes son reconocidos y unidos por anticuerpos existentes en el sujeto. Por tanto, Shokat y Schultz (J. Am. Chem. Soc., 1991, 113:1862-1864) han desvelado un procedimiento para redirigir la respuesta inmunitaria usando un procedimiento denominado inmunogenicidad mediada por ligandos. Según esta enseñanza, un antígeno invariante se compleja con un ligando específico y se administra a un sujeto. El antígeno invariante complejado se une entonces a anticuerpos que se producen naturalmente presentes en el sujeto.

List y col. (n2 95(26); 1998) describen una dicetona de fluorescencia unida a un sitio catalítico del anticuerpo para aldolasa 38C2.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un compuesto que elige anticuerpos como diana que comprende uno o más agentes que eligen diana ligados covalentemente al sitio de combinación de anticuerpos monoclonales para aldolasa de ratón 38C2 o una versión humanizada o quimérica humana del mismo mediante un ligador de fórmula X-Y-Z en la que:

(i) X es una cadena de conexión lineal o ramificada de átomos que comprenden cualquiera de C, H, N, O, P, S, Si, F, Cl, Br y I, o una sal de los mismos, y que comprende una unidad de éter de repetición de entre 2-1 unidades,

(ii) Y es opcional y es un anillo saturado o insaturado homo- o heterocarbocíclico de 5 ó 6 miembros individual o condensado localizado dentro de 1-2 átomos de Z, y

(iii) Z es un grupo acil-beta-lactama para ligar covalentemente el uno o más agentes que eligen diana con una cadena lateral de un aminoácido reactivo en el sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa.

La presente invención también proporciona un procedimiento de producción de dicho anticuerpo, que comprende ligar covalentemente dicho agente que elige diana con el sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa mediante dicho ligador.

BREVE RESUMEN DE LA DIVULGACIÓN

La presente divulgación proporciona compuestos que eligen anticuerpos como diana con especificidad y propiedades biológicas únicas que son útiles en muchas aplicaciones. Los compuestos que eligen anticuerpos como diana de la divulgación comprenden uno o más agentes o agentes biológicos que eligen diana o se ligan tanto covalentemente como no covalentemente a un sitio de combinación de anticuerpos. Un ligador lineal o ramificado se usa preferentemente en enlace covalente y no covalente. Se desvelan características químicas del ligador. Dependiendo de las circunstancias, la especificidad del anticuerpo del sitio de combinación puede modificarse o eliminarse tras el enlace covalente o no covalente al agente que elige diana o biológico. En algunas realizaciones de la divulgación, la especificidad de unión del antígeno del anticuerpo antes del enlace covalente puede retenerse sustancialmente después del enlace covalente.

El compuesto que elige anticuerpos como diana confiere diversos beneficios con respecto a los propios componentes. Por ejemplo, la porción de anticuerpo del compuesto puede prolongar generalmente la semivida de un agente que elige diana o biológico de tamaño más pequeño in vivo. Por tanto, la potencia biológica u otra característica biológica de un agente que elige diana o biológico particular puede modificarse mediante la adición de función (funciones) efectora(s) proporcionada(s) por la porción de anticuerpo del compuesto (por ejemplo, funciones efectoras mediadas por complemento). Además, el agente que elige diana o agente de unión, mediante su elevado tamaño conferido por el enlace al anticuerpo, puede permitir que el agente que elige diana funcione en nuevas capacidades.

En algunas realizaciones de la divulgación, el agente que elige diana del compuesto puede unirse a una molécula diana de no inmunoglobulina o a una molécula diana de inmunoglobulina fuera del sitio de combinación de inmunoglobulina. Así, en estas realizaciones, el agente que elige diana es específico para un no anticuerpo o es específico para un anticuerpo, pero se une al anticuerpo fuera de su sitio de combinación. En un enfoque preferido, un anticuerpo catalítico puede modificarse en un compuesto que se une específicamente a una biomolécula. La porción de anticuerpo de los compuestos que eligen anticuerpos como diana puede incluir anticuerpo completo o fragmentos de anticuerpos únicos y pueden tener secuencia derivada de diversas especies de animales tales como una inmunoglobulina no humana o inmunoglobulina humana, incluyendo la última un anticuerpo humano, anticuerpo humanizado o anticuerpo quimérico humano.

En el presente documento también se desvelan procedimientos de producción de compuestos que eligen anticuerpos como diana de la divulgación. En una realización de la divulgación, un compuesto de agente-ligador que comprende un agente que elige diana y/o un agente biológico está ligado a un ligador que comprende un grupo reactivo para la reacción covalente con el sitio de combinación del anticuerpo. En otro enfoque se prepara un compuesto de anticuerpo-ligador en el que el ligador incluye un grupo reactivo para la reacción con dicho uno o más agentes que eligen diana o agentes biológicos. En otro enfoque más, los agentes y el anticuerpo pueden cada uno ligarse a ligadores con grupos reactivos compatibles de manera que se forme el compuesto que elige anticuerpos como diana cuando los dos ligadores se ligan covalentemente.

Adicionalmente, en el presente documento se desvelan compuestos de agente-ligador que comprenden un agente que elige diana, agente biológico, o ambos, que pueden ligarse covalentemente al sitio de combinación de un anticuerpo. En algunas realizaciones de la divulgación, el ligador incluye un grupo reactivo para ligar covalentemente el agente que elige diana con el sitio de combinación del anticuerpo. El enlace con el sitio de combinación de anticuerpos puede ser a una cadena lateral de un aminoácido reactivo en el sitio de combinación. En algunas realizaciones de la divulgación, el aminoácido reactivo es una lisina mientras que el grupo reactivo del ligador es una cetona, una dicetona, una beta-lactama, un éster activo de succinimida, halocetona, una lactona, un anhídrido, un epóxido, un aldehido, un haluro, un sulfonato, un fosfonato, una guanidina, una amidina, una imina, una eneamina, un cetal, un acetal o una maleimida.

Se describen diversas características químicas del compuesto de agente-ligador. En una realización de la divulgación, el ligador tiene la fórmula general X - Y - Z en la que X es una cadena de conexión lineal o ramificada de átomos que comprenden cualquiera de C, H, N, O, P, S, Si, F, Cl, Br y I, o una sal de los mismos, y que comprende una unidad de éter de repetición de entre 2-1 unidades; Y es opcional y es un anillo saturado o insaturado homo- o heterocarbocíclico de 5 ó 6 miembros individual o condensado localizado dentro de 1-2 átomos de Z; y Z es un grupo reactivo para ligar covalentemente el uno o más agentes que eligen diana con una cadena lateral de un aminoácido reactivo en el sitio de combinación del anticuerpo. El agente que elige diana puede ligarse a X o Y o a X e Y cuando más de un agente que elige diana o agente biológico se incluya en el compuesto de agente-ligador que elige diana.

En el presente documento todavía se desvelan adicionalmente compuestos de agente que elige diana-ligador- antígeno para ligarse no covalentemente con el sitio de... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto que elige anticuerpos como diana que comprende uno o más agentes que eligen diana ligados covalentemente al sitio de combinación de anticuerpos monoclonales para aldolasa de ratón 38C2 o una versión humanizada o quimérica humana de los mismos mediante un ligador de fórmula X-Y-Z en la que:

(i) X es una cadena de conexión lineal o ramificada de átomos que comprende cualquiera de C, H, N, O, P, S, Si, F, Cl, Br y I, o una sal de los mismos, y que comprende una unidad de éter de repetición de entre 2-1 unidades,

(¡i) Y es opcional y es un anillo saturado o insaturado homo- o heterocarbocíclico de 5 ó 6 miembros individual o condensado localizado dentro de 1-2 átomos de Z, y

(¡¡i) Z es un grupo acil-beta-lactama para ligar covalentemente el uno o más agentes que eligen diana con una cadena lateral de un aminoácido reactivo en el sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa.

2. El compuesto que elige anticuerpos como diana según la reivindicación 1, en el que el residuo de aminoácido reactivo en el sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa es un residuo de Usina.

3. El compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo es de longitud completa.

4. El compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo es un fragmento de anticuerpo que tiene un único sitio de combinación tal como fragmento de anticuerpos Fab o Fab'.

5. El compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, en el que X también incluye un grupo seleccionado de alquilo, alquenilo, alquinilo, oxoalquilo, oxoalquenilo, oxoalquinilo, aminoalquilo, aminoalquenilo, aminoalquinilo, sulfoalquilo, sulfoalquenilo, sulfoalquinilo, fosfoalquilo, fosfoalquenilo y fosfoalquinilo.

6. El compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, en el que el compuesto que elige anticuerpos como diana comprende dos agentes que eligen diana con diferente especificidad ligados al sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa.

7. El compuesto que elige anticuerpos como diana según la reivindicación 6, en el que el ligador es ramificado o lineal y liga los dos agentes que eligen diana a la cadena lateral del aminoácido reactivo en el sitio de combinación de anticuerpos.

8. El compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, que comprende además un fármaco terapéutico covalentemente unido al grupo X.

9. El compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho agente que elige diana es proteína o un péptido.

1. Un procedimiento de producción de un compuesto que elige anticuerpos como diana según cualquier reivindicación precedente, comprendiendo dicho procedimiento ligar covalentemente dicho agente que elige diana al sitio de combinación del anticuerpo para aldolasa mediante dicho ligador.