Virus vaccinia para uso en el tratamiento del cáncer.

Virus vaccinia que comprende una mutación conservativa o no conservativa en el gen A34R,

mutación que dacomo resultado una sustitución K151X (representando X cualquier aminoácido presente en la naturaleza) en elpolipéptido A34R codificado y en un aumento en la producción de la forma infecciosa EEV del virus, para su uso enun método de tratamiento del cáncer.

Virus vaccinia para uso en el tratamiento del cáncer

1. Campo de la invención La presente invención se refiere generalmente a los campos de la oncología y la virología. De forma más concreta, se refiere a los poxvirus, que incluyen de manera específica los virus vaccinia, que comprenden una o más mutaciones que los vuelven particularmente adecuados para el tratamiento del cáncer

2. Descripción de la técnica relacionada La homeostasia del tejido normal es un proceso muy regulado de proliferación celular y de muerte celular. Puede aparecer un desequilibrio tanto de la proliferación celular como de la muerte celular en un estado canceroso (Solyanik y col., 1995; Stokke y col., 1997; Mumby y Walter, 1991; Natoli y col., 1998; Magi-Galluzzi y col., 1998) . Por ejemplo, el cáncer de cuello de útero, de riñón, de pulmón, de páncreas colorrectal y de cerebro son unos pocos ejemplos de los muchos cánceres que pueden aparecer (Erlandsson, 1998; Kolmel, 1998; Mangray y King, 1998; Gertig y Hunter, 1997; Mougin y col., 1998) . De hecho, la incidencia del cáncer es tan elevada que se pueden atribuir al cáncer 500.000 muertes cada año solo en los Estados Unidos.

El mantenimiento de la proliferación celular y de la muerte celular está regulado al menos parcialmente por protooncogenes y supresores tumorales. Un protooncogén o supresor tumoral puede codificar proteínas que inducen la proliferación celular (por ejemplo, sis, erbB, src, ras y myc) , proteínas que inhiben la proliferación celular (por ejemplo, Rb, p16, p19, p21, p53, NF1 y WT1) o proteínas que regulan la muerte celular programada (por ejemplo,

bcl-2) (Ochi y col., 1998; Johnson y Hamdy, 1998; Liebermann y col., 1998) . Sin embargo, las redisposiciones o mutaciones genéticas de estos protooncogenes y supresores tumorales dan como resultado la conversión de un protooncogén en un potente oncogén productor de cáncer o convertir un supresor tumoral en un polipéptido inactivo. A menudo, una única mutación puntual es suficiente para conseguir la transformación. Por ejemplo, una mutación puntual en la proteína p53 supresora del tumor da como resultado la pérdida completa de la función de p53 natural (Vogelstein y Kinzler, 1992) .

Actualmente, existen pocas opciones eficaces para el tratamiento de muchos tipos de cánceres. El curso de tratamiento para un individuo dado depende del diagnóstico, la etapa hasta la cual se ha desarrollado la enfermedad y factores tales como la edad, sexo, y salud general del paciente. Las opciones más convencionales de tratamiento del cáncer son la cirugía, radioterapia y quimioterapia. La cirugía juega un papel central en el diagnóstico y el tratamiento del cáncer. Normalmente, se requiere una solución quirúrgica para la biopsia y para eliminar el crecimiento del cáncer. Sin embargo, si el cáncer ha metastatizado y se ha diseminado, es poco probable que dé como resultado una cura y debe tomarse una solución alternativa (Mayer, 1998; Ohara, 1998; Ho y col., 1998) . La radioterapia implica una puntería precisa de radiación de alta energía para destruir las células cancerosas y muy probablemente cirugía, que es principalmente eficaz en el tratamiento de células cancerosas localizadas no metastásicas. Los efectos secundarios de la radioterapia incluyen la irritación de la piel, dificultades para tragar, sequedad de boca, náuseas, pérdida de pelo y pérdida de energía (Curran, 1998; Brizel, 1998) .

La quimioterapia, el tratamiento del cáncer con fármacos anticancerosos, es otro modo de tratamiento del cáncer. La 45 eficacia de un tratamiento farmacológico anticanceroso dado está a menudo limitada por la dificultad de conseguir la liberación del fármaco a través de tumores sólidos (el-Kareh y Secomb, 1997) . Las estrategias quimioterapéuticas se basan en el crecimiento del tejido tumoral, donde el fármaco anticanceroso se dirige a las células cancerosas en rápida división. La mayoría de soluciones de quimioterapia incluyen la combinación de más de un fármaco anticanceroso, lo que ha demostrado aumentar la velocidad de respuesta de una amplia variedad de cánceres (Patente de los Estados Unidos 5. 824. 348; Patente de los Estados Unidos 5. 633. 016 y Patente de los Estados Unidos 5. 798. 339) . Un efecto secundario importante mayor de los fármacos en quimioterapia es que afectan células de tejido normal, siendo las células más posiblemente afectadas aquellas que se dividen rápidamente en algunos casos (por ejemplo, médula ósea, tracto gastrointestinal, sistema reproductor y folículos pilosos) . Otros efectos secundarios tóxicos de los fármacos en quimioterapia pueden incluir aftas en la boca, dificultad al tragar,

sequedad de boca, náuseas, diarrea, vómitos, fatiga, sangrado, pérdida de pelo e infección.

La inmunoterapia, un área en rápida evolución en la investigación del cáncer, es otra opción más para el tratamiento de determinados tipos de cáncer. Teóricamente, el sistema inmune puede ser estimulado para identificar células tumorales como dianas y dirigirlas hacia la destrucción. Desafortunadamente, la respuesta no es normalmente suficiente para evitar el crecimiento de la mayoría de los tumores. Sin embargo, recientemente ha aumentado el interés en el área de la inmunoterapia por desarrollar métodos que aumenten o suplementen el mecanismo de defensa natural del sistema inmune. Los ejemplos de inmunoterapias actualmente en investigación o en uso son adyuvantes inmunes (por ejemplo, Mycobacterium bovis, Plasmodium falciparum, dinitroclorobenceno y compuestos aromáticos) (Patente de los Estados Unidos 5. 801. 005; Patente de los Estados Unidos 5. 739. 169; Hui y 65 Hashimoto, 1998; Christodoulides y col., 1998) , tratamiento de citoquinas (por ejemplo, interferones (IL-1, GM-CSF y TNF) (Bukowski y col., 1998; Davidson y col., 1998; Hellstrand y col., 1998) , y terapia génica (por ejemplo, TNF, IL-1,

IL-2, p53) (Qin y col., 1998; Austin-Ward y Villaseca, 1998; Patente de los Estados Unidos 5. 830. 880 y Patente de los Estados Unidos 5. 846. 945) y anticuerpos monoclonales (por ejemplo, antigangliósidos GM2, anti-HER-2, antip185) (Pietras y col., 1998; Hanibuchi y col., 1998; Patente de los Estados Unidos 5. 824. 311) . Dichos métodos, aunque se muestran prometedores, han demostrado un éxito limitado.

Los virus oncolíticos selectivos para la replicación se muestran prometedores para el tratamiento del cáncer (Kirn y col., 2001) . Estos virus pueden producir la muerte de las células tumorales a través de efectos oncolíticos directos dependientes de la replicación y/o efectos oncolíticos dependientes de la expresión del gen vírico (Kim y col., 2001) . Además, los virus son capaces de aumentar la inducción de la inmunidad antitumoral mediada por células en el

interior del hospedador (Todo y col., 2001; Sinkovics y col., 2000) . Estos virus se pueden también diseñar mediante ingeniería genética para expresar transgenes terapéuticos en el interior del tumor con el fin de aumentar la eficacia antitumoral (Hermiston, 2000)

Sin embargo, existen limitaciones importantes a esta solución terapéutica. Aunque se puede demostrar un grado de selectividad tumoral natural para alguna especie de virus, se siguen necesitando nuevas soluciones para diseñar mediante ingeniería genética y/o aumentar la selectividad tumoral de los virus oncolíticos a fin de maximizar la seguridad. Esta selectividad resultará particularmente importante cuando se utiliza la administración intravenosa, y cuando se añaden a estos virus genes terapéuticos potencialmente tóxicos para aumentar la potencia antitumoral; la expresión génica en tejidos normales deberá limitarse en gran medida. Además, el aumento de la potencia antitumoral a través de mecanismos adicionales tales como la inducción de la inmunidad antitumoral o dirigida a la vasculatura asociada al tumor es muy deseable.

Por tanto, se necesitan tratamientos más eficaces y menos tóxicos para el tratamiento del cáncer. El uso de virus oncolíticos presenta un área que se puede desarrollar; sin embargo, necesita superarse la limitación discutida anteriormente. Por tanto, la presente invención se dirige a dichas limitaciones.

Sumario de la invención La presente invención se basa en el descubrimiento de que los virus vaccinia (de cualquier cepa) se pueden alterar

1) para generar un agente que afecte diferencialmente las poblaciones de células o los tipos de tejidos y/o 2) para generar una forma de virus vaccinia que sea más infecciosa y capaz de infectar otras células en virtud de la liberación mejorada desde una célula infectada. Los virus vaccinia de la invención, por ejemplo, la cepa Copenhagen, puede actuar de forma sinérgica con otras terapias... [Seguir leyendo]

1. Virus vaccinia que comprende una mutación conservativa o no conservativa en el gen A34R, mutación que da como resultado una sustitución K151X (representando X cualquier aminoácido presente en la naturaleza) en el

polipéptido A34R codificado y en un aumento en la producción de la forma infecciosa EEV del virus, para su uso en un método de tratamiento del cáncer.

2. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 1, donde el cáncer es un cáncer residual microscópico.

3. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 1, donde la mutación en el gen A34R da como resultado una sustitución K151D (representando D ácido aspártico) .

4. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 1 o 3, donde el virus vaccinia es una cepa Copenhagen o Western Reserve. 15

5. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 1, donde el virus vaccinia está atenuado.

6. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 5, donde el virus vaccinia comprende una mutación inactivante en

un gen B8R o en un gen B18R. 20

7. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 5, donde el virus vaccinia atenuado comprende además una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido terapéutico heterólogo.

8. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 7, donde el polipéptido terapéutico heterólogo es un supresor,

inmunomodulador, inhibidor de la angiogénesis, polipéptido antivascular, polipéptido citotóxico, inductor de la apoptosis, enzima activador de profármaco o polipéptido citostático.

9. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 1, donde el tratamiento se realiza mediante administración intratumoral o intravenosa. 30

10. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 9, donde el tratamiento es mediante administración en el interior de un tumor sólido.

11. El virus vaccinia para el uso de la reivindicación 1, donde el cáncer es un cáncer de vejiga, de la sangre, de

hueso, de médula ósea, de cerebro, de mama, colorrectal, de esófago, gastrointestinal, de cabeza, de riñón, de hígado, de pulmón, nasofaríngeo, de cuello, de ovario, de páncreas, de próstata, de piel, de estómago, de testículo, de lengua o de útero.

12. Uso de un virus vaccinia que comprende una mutación conservativa o no conservativa en el gen A34R, mutación que da como resultado una sustitución K151X (representando X cualquier aminoácido presente en la naturaleza) y un aumento en la forma infecciosa EEV del virus, para la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.