Regímenes de dosificación de LAG-3Ig (IMP321) para uso en el tratamiento del cáncer.

Proteína de fusión LAG-3Ig recombinante humana soluble (IMP321) que suscita una respuesta inmunemediada por monocitos para uso como medicamento anticanceroso que induce un incremento en el número demonocitos,

donde dicho medicamento consiste en una pluralidad eficaz de dosis de IMP321 para seradministradas en un intervalo de 6-30 mg de IMP321 a un paciente que lo necesite.

Regímenes de dosificación de LAG-3Ig (IMP321) para uso en en tratamiento del cáncer

Campo técnico

La presente invención se describe en las reivindicaciones 1-3.

Permite un incremento del número de monocitos en la sangre.

Tiene muchas aplicaciones en particular en el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos en la inmunoterapia del cáncer

En la descripción que sigue, las referencias entre corchetes [ ] se refieren a la bibliografía adjunta.

Estado de la técnica El gen 3 (h/ag-3) de activación de los linfocitos que se expresa en las células T activadas humanas CD4+ y CD8+, así como en las células NK activadas codifica una proteína de membrana de tipo I (LAG-3) de 503 amino ácidos con cuatro dominios (IgSF) de la superfamilia de las inmunoglobulinas extracelulares [1]. Se clonó un gen 3 (m/ag-3) de activación de linfocitos murinos y se encontró aproximativamente un 70 % de homología con el h/ag-3, con el mismo motivo rico en prolina en la cola intracitoplásmica.

Se sabe que el LAG-3 (CD223) , descrito como un ligando natural de alta afinidad para MHC de clase II, induce la maduración de las células dendríticas derivadas de monocitos in vitro, y se utiliza como coadyuvante en la inmunoterapia para inducir respuestas de las células T CD4 colaboradoras de tipo 1 y respuestas de las células T CD8 in vivo [2]. Se puede encontrar más información respecto a LAG-3 y su uso como inmunoestimulante en TRIEBEL et al. [1], TRIEBEL et al. [3], y HUARD et al. [4].

Algunas formas solubles de LAG-3 se pueden unir a las moléculas MHC de clase II y puede inducir la maduración y migración de las células dendríticas hacia los órganos linfoides secundarios donde pueden inducir a las células CD4colaboradoras originales y a las células CD8 T citotóxicas lo que conduce al rechazo del tumor [5].

Más recientemente se demostró que una proteína de fusión LAG-3Ig recombinante humana soluble (IMP321) activaba una amplia gama de células efectoras para las respuestas inmunes tanto innatas como adquiridas, por ejemplo, induciendo a los monocitos-macrófagos a secretar citoquinas/quimioquinas [6].

Los monocitos se producen por la médula ósea a partir de los precursores de células madre hematopoyéticas llamadas monoblastos. Éstos constituyen entre el siete y el cincuenta y siete por ciento de los leucocitos en la sangre. Los monocitos circulan por el torrente sanguíneo durante alrededor de 24 horas (semivida de 8 horas) y a continuación, normalmente se trasladan a los tejidos de todo el cuerpo. En los tejidos, los monocitos maduran a macrófagos, células epitelioides o células presentadoras de antígeno (APC, por ejemplo células dendríticas) . Los monocitos son responsables de la fagocitosis (ingestión) de sustancias extrañas en el cuerpo. Los monocitos pueden realizar fagocitosis utilizando proteínas intermediarias (opsonización) tales como anticuerpos o complemento que recubren al patógeno, así como por medio de la unión al patógeno directamente a través de receptores de reconocimiento de patrones que reconocen los patógenos. Los monocitos son también capaces de matar a las células huésped infectadas a través de anticuerpos, lo que se denomina citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC) . Debido a su secreción y a las propiedades de la fagocitosis, se producen monocitos- macrófagos en una respuesta inmune inespecífica y específica.

El estudio de marcadores de membrana permite la identificación de las poblaciones de monocitos, maduros o no, distróficos o no. Las moléculas presentes en las membranas de los monocitos, maduros o no, casi siempre son inespecíficas, pero corresponden a las actividades siguientes:

-receptor para el fragmento Fc de la IgG (CD16, CD32, CD64)

-receptor para el fragmento Fc de la IgE (CD23) ,

-receptor de fracciones del complemento (CD11b, CD21/CD35)

-proteínas de adhesión de leucocitos (CD11a, CD11c) ,

-proteína que facilita la unión a LPS de las bacterias Gram- (CD14) ,

-proteína con actividad de tirosina fosfatasa (CD45) .

Descripción de la invención Actualmente los autores de la presente invención han descubierto, de forma completamente inesperada, que la LAG-3Ig humana (IMP321) o derivados de la misma cuando se inocula en pacientes con tumores altamente malignos, por ejemplo pacientes con cáncer de mama metastásico (MBC) o carcinoma renal de células claras metastásico (MRCC) , induce una inmunidad potente que es dependiente de los monocitos.

Esta inmunidad inducida se manifiesta por un incremento significativo en el recuento de los monocitos en sangre.

Este resultado se consigue por medio de una administración plural de LAG-3Ig (IMP321) a los pacientes que reciben inmunoterapia o quimioinmunoterapia.

Este resultado es bastante sorprendente, ya que no se espera que la unión y la activación de los monocitos vayan seguidas de una expansión de los monocitos. En efecto los monocitos son el final de la diferenciación de las células hematopoyéticas y no pueden proliferar. Pueden permanecer en la sangre como monocitos o diferenciarse en macrófagos o en células dendríticas bajo la influencia de diferentes citoquinas, hasta que mueren. Por consiguiente se cree, sin limitarse a la teoría que sigue, que el mecanismo de acción implicado puede ser una señal proliferativa dirigida a las células precursoras hematopoyéticas (antes de la etapa de promonocito) que residen en la médula ósea, o un incremento en la semivida o en el tiempo de residencia de los monocitos circulantes maduros.

La presente invención se refiere a una proteína de fusión de LAG-3Ig recombinante humana soluble (IMP321) que suscita una respuesta inmune por medio monocitos, para el uso como medicamento anticanceroso que induce un incremento en el número de monocitos, donde dicho medicamento consiste en varias dosis efectivas de IMP321 que se administran en un intervalo de 6-30 mg de IMP321 a un paciente que lo necesite.

Se describen las siguientes formas de LAG-3:

-la proteína LAG-3 completa

-un fragmento de polipéptido soluble de la misma que consiste al menos en uno de los cuatro dominios extracelulares de la inmunoglobulina, a saber la parte soluble de LAG-3 que comprende la región extracelular que se extiende desde el aminoácido 23 al aminoácido 448 o la secuencia de LAG-3 descrita

en solicitud de patente francesa FR 9000126,

-un fragmento de LAG-3 que consiste en sustancialmente todo el primer y segundo dominios ,

-un fragmento de LAG-3 que consiste en sustancialmente todo el primer y segundo dominios o los cuatro dominios, tal como se define en el documento WO 95/30750,

-una forma mutante de LAG-3 soluble o un fragmento de la misma que comprende los dominios 30 extracelulares D1 y D2 y que consiste en:

* Una sustitución de un aminoácido en una de las posiciones siguientes : posición 73 donde la ARG está sustituida por GLU, posición 75 donde la ARG está sustituida por ALA o GLU, posición 76 donde la ARG está sustituida por GLU,

o una combinación de dos o más de estas sustituciones,

* La sustitución de un aminoácido en una de las posiciones siguientes : posición 30 donde la ASP está sustituida por ALA, posición 56 donde la HIS está sustituida por ALA, posición 77 donde la TYR está sustituida por PHE,

posición 88 donde la ARG está sustituida por ALA, posición 103 donde la ARG está sustituida por ALA, posición 109 donde la ASP está sustituida por GLU, posición 115 donde la ARG está sustituida por ALA

o una deleción de la región comprendida entre la posición 54 y la posición 66

o una combinación de dos o más de dichas sustituciones .

Estos mutantes están descritos por HUARD et al. (Proc. Natl Acad Sci EE.UU., 11: 5.744 - 5.749, 1997) .

-una variante fisiológica de LAG-3 que comprende la proteína soluble de 52 kDa que contiene D1, D2 y D3.

-una proteína de fusión LAG-3Ig recombinante humana soluble (IMP321) , un dímero de 200 kDa producido en células de ovario de hámster chino transfectadas con un plásmido que codifica para el dominio extracelular de hLAG-3 fusionada con Fc de la IgG1 humana.

Por "medicamento", en el sentido de la presente invención, se entiende una pluralidad eficaz de dosis de una proteína LAG-3 recombinante o derivados de la misma.

La LAG-3 Ig recombinante (IMP321) se administra tal y como se define en las reivindicaciones 1-3.

Por “administración con un compuesto" se entiende la administración del compuesto reivindicado anteriormente, con,

o después de la administración de dicho compuesto.

1. Proteína de fusión LAG-3Ig recombinante humana soluble (IMP321) que suscita una respuesta inmune mediada por monocitos para uso como medicamento anticanceroso que induce un incremento en el número de monocitos, donde dicho medicamento consiste en una pluralidad eficaz de dosis de IMP321 para ser

administradas en un intervalo de 6-30 mg de IMP321 a un paciente que lo necesite.

2. IMP321 para uso según la reivindicación 1, donde dicha pluralidad de dosis debe ser administrada como sigue: una dosis cada una o varias semanas durante por lo menos 12 semanas, y preferiblemente durante 24 semanas, separadas por intervalos sin administración de 13 ± 2 días.

3. IMP321 para uso según la reivindicación 1 o 2, donde dicha administración es subcutánea o intravenosa.