Reducción de riesgos iatrogénicos potenciales asociados con antígenos de vacunas.

Un proceso para preparar un antígeno de la vacuna en un cultivo de una línea celular Vero,

que comprende un paso de prueba para un patógeno seleccionado del grupo consistente de parvovirus canino, poliomavirus JC, y circovirus.

Reducción de riesgos iatrogénicos potenciales asociados con antígenos de vacunas

Campo técnico La presente invención se refiere a la producción y control de calidad de los antígenos de las vacunas contra el virus de la gripe.

Antecedentes de la técnica Los virus de la gripe para uso en la preparación de vacunas para seres humanos se han desarrollado tradicionalmente en huevos de gallina embrionados, aunque las técnicas más modernas desarrollan el virus en cultivos celulares de mamífero, por ejemplo, en células Vero, células MDCK o células PER.C6. El cambio en el substrato de crecimiento del virus ha proporcionado una oportunidad para una nueva evaluación reglamentaria de la seguridad de la vacuna antigripal. Por ejemplo, la contaminación con ADN de la célula hospedadora ha sido una objeción reglamentaria en las vacunas obtenidas a partir de células [1], pero no ha sido una objeción en el pasado para las vacunas desarrolladas en huevos.

Los principios de seguridad que rodean a las vacunas antigripales obtenidas a partir de huevos son, por lo tanto, diferentes de los que rodean a las vacunas desarrolladas en cultivos celulares, estando las vacunas obtenidas a partir de células bajo una vigilancia más atenta. Es un objeto de la invención abordar estos asuntos de seguridad iferentes, y en particular, el de proporcionar procedimientos para aumentar la seguridad del desarrollo de vacunas antigripales en un cultivo celular Vero.

Kweon y otros (Vaccine. 4 de Junio de 1999;17 (20-21) :2546-53.) menciona pruebas para agentes adventicios en un proceso para cultivar virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV) en células Vero. Merten (Cytotechnology, Julio de 2002;39 (2) 91-116) aborda la contaminación por virus en cultivos celulares.

Divulgación de la invención Por definición, el uso de substratos de células de mamífero para la producción de la vacuna antigripal implica el cultivo celular en condiciones que sean perfectamente adecuadas para el desarrollo y la replicación vírica. El inventor ha comprobado que estas condiciones aumentan el riesgo de que puedan desarrollarse patógenos diferentes del virus de la gripe en el cultivo celular, dando lugar, con ello, a la contaminación potencial del producto de vacuna final. Los ensayos de contaminación no son, por lo general, difíciles de llevar a cabo, pero un fabricante debe saber primero qué tipo de ensayos hay que realizar. El inventor ha identificado riesgos de contaminación específicos, y su trabajo indica que pueden llevarse a cabo ensayos adecuados durante la fabricación con el fin de garantizar la seguridad y calidad de las vacunas antigripales desarrolladas en cultivos celulares. Algunos de los contaminantes pueden ser inocuos en un producto de vacuna final, pero su presencia puede interferir con la propagación y purificación posterior del virus de la gripe, de ahí que su eliminación sea un asunto primordial para la calidad y reproducibilidad; otros contaminantes serían perjudiciales en una vacuna final, de ahí que su eliminación sea un asunto de seguridad primordial.

El riesgo de contaminación que surge del cocultivo viral no carece de precedentes (por ejemplo, ciertos lotes de las primeras vacunas del virus de la polio se contaminaron con virus de simio 40 (“SV40”) , un virus de polioma) , pero no existía ninguna divulgación previa sobre la identificación de riesgos específicos asociados con el cultivo celular para la producción de la vacuna antigripal humana. Los virus de la gripe desarrollados en cultivos celulares tienen un riesgo particular de contaminación debido a que las cepas usadas para la producción de la vacuna están cambiando cada año y, en consecuencia, han de establecerse nuevos cultivos cada año. Este cambio anual en los materiales de producción significa que cada nuevo año entraña un nuevo riesgo de contaminación, particularmente debido a que durante la preparación de virus sembrados por los fabricantes están implicados múltiples pases, aumentado así el riesgo de desarrollo paralelo de agentes patógenos accidentales.

La invención proporciona un proceso para preparar un antígeno de la vacuna en un cultivo de una línea celular Vero, que comprende un paso de probar para un patógeno seleccionado del grupo consistente de parvovirus canino, poliomavirus JC, y circovirus.

El inventor ha identificado agentes infecciosos que pueden desarrollarse en las condiciones usadas para el desarrollo del virus de la gripe en cultivos celulares, pero que no se desarrollan en huevos de gallina. Estos agentes infecciosos representan un nuevo riesgo de contaminación para las vacunas antigripales que nunca ha sido un problema para las vacunas antigripales tradicionales. Por lo tanto, la invención proporciona un procedimiento para la preparación de una vacuna antigripal a partir de virus de la gripe que se desarrolla en un cultivo de una línea de células de mamífero, que comprende una etapa en la cual se ensaya la vacuna y/o el cultivo para determinar la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha línea de células, pero que no se desarrolla en huevos de gallina embrionados.

El inventor ha identificado igualmente agentes infecciosos que se desarrollan en algunos substratos de células usados para la producción de vacuna antigripal pero que no se desarrollan en otros. Estos agentes infecciosos son por lo tanto un riesgo de contaminación únicamente para ciertas vacunas antigripales. Por lo tanto la divulgación también proporciona un proceso para preparar una vacuna contra la gripe del virus de la gripe que ha sido cultivado en un cultivo de una primera línea celular mamífera, que comprende un paso en el que la vacuna y/o el cultivo se prueba para la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha primera línea celular pero que no se desarrolla en una segunda línea celular mamífera.

La divulgación también proporciona un proceso para preparar una vacuna contra la gripe de virus de la gripe que ha sido cultivado en un cultivo de una línea celular mamífera, que comprende un paso en el que la vacuna y/o el cultivo se tratan para eliminar y/o inactivar un agente infeccioso que puede desarrollarse en la línea celular pero no se desarrolla en huevos de gallina embrionados. De manera similar, la divulgación proporciona un proceso para preparar una vacuna contra la gripe de virus de la gripe que ha sido cultivada en un cultivo de una primera línea celular mamífera, que comprende un paso en el que la vacuna y/o el cultivo se tratan para eliminar y/o inactivar un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha primera línea celular pero no se desarrolla en una segunda línea celular mamífera. Después de la eliminación y/o inactivación, la vacuna/cultivo puede ser probado para la presencia del agente infecciosos, por ejemplo para verificar que ha sido eliminado/inactivado.

La divulgación también proporciona una vacuna contra la gripe que ha sido obtenida por un proceso de la invención. La invención también proporciona una vacuna contra la gripe que se puede obtener por un proceso de la invención.

La divulgación también proporciona una vacuna contra la gripe que ha sido cultivada en un cultivo de una línea celular mamífera, en donde se ha confirmado que la vacuna está libre de la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha línea celular pero no se desarrolla en huevos de gallina embrionados. De manera similar, la invención proporciona una vacuna contra la gripe que ha sido cultivada en un cultivo de una primera línea celular mamífera, en donde se ha confirmado que la vacuna está libre de la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha primera línea celular pero no se desarrolla en una segunda línea celular mamífera.

La divulgación también proporciona una vacuna contras la gripe en la que el reovirus mamífero no es detectable por RT-PCR (por ejemplo usando la técnica RT-PCR basada en L1 divulgada en la referencia 16, usando cebadores L1.rv5, L1.rv6, L1.rv7, LV1, rv8 como se enseña) . No habiéndose desarrollado en huevos, la vacuna estará libre de ovoalbúmina y de ADN de pollo.

La línea de células de mamífero Las vacunas antigripales de la invención se desarrollan en una línea celular Vero y no en huevos embrionados.

Estas líneas celulares se encuentran ampliamente disponibles, por ejemplo, en la colección del American Type Cell Culture (ATCC) [10], o en el Coriell Cell Repositories [11]. Por ejemplo, la ATCC suministra diversas células Vero diferentes con los números de catálogo CCL-81, CCL-81.2, CRL-1586 y CRL-1587

Agentes infecciosos que no se desarrollan en huevos de gallina embrionados El inventor ha identificado una variedad... [Seguir leyendo]

1. Un proceso para preparar un antígeno de la vacuna en un cultivo de una línea celular Vero, que comprende un paso de prueba para un patógeno seleccionado del grupo consistente de parvovirus canino, poliomavirus JC, y circovirus.

2. El proceso de la reivindicación 1, en donde el patógeno es circovirus porcino.

3. El proceso de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que se prueba la vacuna y/o el virus de inóculo y/o el sustrato celular y/o el medio de cultivo.

4. El proceso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el proceso se realiza en material usado para crear un cultivo viral; o en cultivo viral; o un material extraído o derivado del cultivo viral.

5. El proceso de cualquier reivindicación anterior, que comprende un paso en el que el virus de inóculo y/o el antígeno de la vacuna yo el cultivo se prueban para la presencia de un patógeno seleccionado del grupo consistente de; virus de parainfluenza; Herpesviridae; Adenoviridae; Micoplasma; circovirus aviare; y Reoviridae aviar.

6. El proceso de cualquier reivindicación anterior, en el que el cultivo se prueba por detección inmunoquímica y/o detección de ácidos nucleícos.

7. El proceso de la reivindicación 6, en el que la detección es por ELISA y/o PCR (incluyendo RT-PCR) .

8. El proceso de cualquier reivindicación anterior, en el que la prueba se realiza en una de las etapas siguientes: infección viral, etapas de crecimiento, cosecha viral; procesamiento viral; división; extracción de la proteína de la superficie, formulación de la vacuna; envase de la vacuna.

9. El proceso de cualquier reivindicación anterior, en el que la prueba se realiza como parte del control de calidad normal.

10. El proceso de cualquier reivindicación anterior, en el que el antígeno de la vacuna es del virus de la gripe.

11. El proceso de la reivindicación 10, en el que el antígeno de la vacuna es un virus de la gripe atenuado, un virus de la gripe sensible a la temperatura o un virus de la gripe adaptado al frio.

12. El proceso de la reivindicación 10 o la reivindicación 11, comprendiendo además un paso de mezclar antígenos de más de una cepa de la gripe.