REDUCCIÓN DE RIESGOS LATROGÉNICOS POTENCIALES ASOCIDOS CON VACUNAS.

Un procedimiento para la preparación de una vacuna antigripal a partir de virus de la gripe que se han desarrollado en un cultivo de una línea de células MDCK,

que comprende una etapa en la cual el virus sembrado y/o la vacuna y/o el cultivo se ensaya para determinar la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha línea de células, pero que no se desarrolla en huevos de gallina embrionados, en el que dicho agente infeccioso es uno o más de los patógenos siguientes: Reoviridae de mamíferos; Pneumoviridae; Pneumovirus de Pneumoviridae; morbilivirus de la familia Paramyxoviridae; virus ECHO de los Enterovirus de la familia Picornaviridae; o Rotavirus

CAMPO TECNICO

Esta invención se refiere a la producción y control de calidad de vacunas contra el virus de la gripe.

TÉCNICA ANTERIOR

Los virus de la gripe para uso en la preparación de vacunas humanas se han desarrollado tradicionalmente 5 sobre huevos de gallina embrionados, aunque las técnicas más modernas desarrollan el virus en cultivo de células de mamífero, por ejemplo, sobre células Vero, células MDCK o células PER.C6. El cambio en el substrato de desarrollo del virus ha proporcionado una oportunidad para la re-evaluación reglamentaria de la seguridad de la vacuna antigripal. Por ejemplo, la contaminación con ADN de la célula huésped ha sido un asunto a reglamentar para las vacunas obtenidas a partir de células [1], pero no ha sido un asunto en el pasado para las vacunas 10 desarrolladas en huevos.

Las cuestiones de seguridad que rodean a las vacunas antigripales obtenidas a partir de huevos son, en consecuencia, diferentes de las que rodean a las vacunas desarrolladas en cultivo de células, estando las vacunas obtenidas a partir de células bajo un escrutinio más estrecho. Es un objetivo de la invención el enfrentarse a estas cuestiones de seguridad diferentes, y en particular, el proporcionar procedimientos para potenciar la seguridad del 15 desarrollo de vacunas antigripales sobre cultivo de células.

La referencia [3] expone cuestiones de seguridad relacionadas con la producción de vacunas antigripales cultivadas en células MDCK. Durante el procedimiento aguas debajo de la etapa siete (DSP) de preparación, se ensayó el aclaramiento viral en un grupo de virus modelo tales como HSV, polio y reovirus, pero no renovirus de mamífero. 20

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCION

Por definición, el uso de substratos de células de mamíferos para la producción de vacuna antigripal implica el cultivo de células bajo condiciones que estén bien adecuadas para el desarrollo y replicación vírica. El inventor ha comprobado que estas condiciones incrementan el riesgo de que puedan desarrollarse patógenos diferentes del virus de la gripe en el cultivo de células, dando lugar, con ello, a la contaminación potencial del producto de vacuna 25 final. Los ensayos para la contaminación no son generalmente difíciles de llevar a cabo, pero un fabricante debe conocer en primer lugar el tipo de ensayos a realizar. El inventor ha identificado riesgos de contaminación específicos, y su trabajo indica que pueden llevarse a cabo ensayos adecuados durante la fabricación con el fin de asegurar la seguridad y calidad de vacunas antigripales desarrolladas sobre cultivo de células. Algunos de los contaminantes pueden ser inocuos en un producto de vacuna final, pero su presencia puede interferir con la 30 propagación y purificación posterior del virus de la gripe y, en consecuencia, su eliminación es un asunto primordial para la calidad y reproducibilidad; otros contaminantes serían perjudiciales en una vacuna final y, en consecuencia, su eliminación es un asunto de seguridad primordial.

El riesgo de contaminación que surge del co-cultivo vírico no carece de precedentes (por ejemplo, ciertos lotes de las primeras vacunas de virus de la polio se contaminaron con virus símico 40 (“SV40”), un virus de 35 polioma), pero no existía ninguna divulgación previa sobre la identificación de riesgos específicos asociados con el cultivo de células para la producción de vacuna antigripal humana. Los virus de la gripe desarrollados sobre cultivo de células se encuentran en riesgo particular de contaminación debido a que las cepas usadas para la producción de vacuna están cambiando cada año y, en consecuencia, han de establecerse nuevos cultivos cada año. Este cambio anual en los materiales de producción significa que cada nuevo año entraña un nuevo riesgo de 40 contaminación, particularmente debido a que están implicados múltiples pases durante la preparación de virus sembrados por los fabricantes, incrementándose, en consecuencia, el riesgo de desarrollo paralelo de agentes patógenos accidentales.

El inventor ha identificado agentes infecciosos que pueden desarrollarse en las condiciones usadas para el desarrollo de virus de la gripe en cultivo de células, pero que no se desarrollan en huevos de gallina. Estos agentes 45 infecciosos representan un nuevo riesgo de contaminación para vacunas antigripales que nunca ha concernido a las vacunas antigripales tradicionales. De acuerdo con ello, la invención proporciona un procedimiento para la preparación de una vacuna antigripal a partir de virus de la gripe que se han desarrollado en un cultivo de una línea de células MDCK, que comprende una etapa en la cual el virus sembrado y/o la vacuna y/o el cultivo se ensaya para determinar la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha línea de células, pero que no se 50 desarrolla en huevos de gallina embrionados, en el que dicho agente infeccioso es uno o más de los patógenos siguientes: Reoviridae de mamíferos; Pneumoviridae; Pneumovirus de Pneumoviridae; morbilivirus de la familia Paramyxoviridae; virus ECHO de los Enterovirus de la familia Picornaviridae; o Rotavirus.

El inventor ha identificado igualmente agentes infecciosos que se desarrollan en algunos substratos de células usados para la producción de vacuna antigripal pero no se desarrollan en otros. De acuerdo con ello, estos 55 agentes infecciosos son un riesgo de contaminación únicamente para ciertas vacunas antigripales.

La línea de células de mamífero

Las vacunas antigripales de la invención se desarrollan en líneas de células de mamífero, mejor que desarrollarlas en huevos embrionados. Las líneas de células para el desarrollo de virus de la gripe son células MDCK [2-5], obtenidas a partir de riñón canino Madin Darby.

Estas líneas de células se encuentran ampliamente disponibles, por ejemplo, de la colección del American 5 Type Cell Culture (ATCC) [10], o del Coriell Cell Repositories [11]. Por ejemplo, la ATCC suministra diversas células MDCK diferentes bajo los números de catálogo CCL-34.

Agentes infecciosos que no se desarrollan en huevos de gallina embrionados

El inventor ha identificado una variedad de patógenos que pueden desarrollarse en líneas de células de mamífero (en particular, tanto en células MDCK como en células Vero) usadas para la preparación de virus de la 10 gripe para la producción de vacunas, pero que no se desarrollan en huevos de gallina. El ensayo para contaminación por estos patógenos no fue necesario para vacunas preparadas sobre el substrato de huevo tradicional, pero el inventor ha comprobado que el control de calidad de las vacunas debería incluir ensayos para uno o más de estos patógenos con el fin de asegurar las normas de seguridad más exigentes. Los patógenos son los siguientes: 15

■ Pneumoviridae, tales como los del género Pneumovirus, incluyendo el virus sincitial respiratorio (RSV).

■ Morbilivirus de la familia Paramyxoviridiae, tal como virus del sarampión.

■ Enterovirus de la familia Picornaviridiae, tal como el virus Coxsackie, virus ECHO y enterovirus, aunque algunos virus Coxsackie (por ejemplo, B3, B4) se ha encontrado que no se desarrollan en células MDCK.

■ Reoviridae de mamífero, en particular ortorreovirus (por ejemplo, reovirus de mamífero) y rotavirus. Los 20 reovirus pueden mostrar desarrollo no restringido en células Vero y MDCK, y en consecuencia, el ensayo de los mismos es de particular importancia. Los rotavirus comparten las exigencias de proteasa de los virus de la gripe con el fin de desarrollarse en cultivo de células, y este paralelismo podría dar lugar de manera inconsciente a la activación de rotavirus contaminantes.

En los casos en que estos patógenos tienen cepas diferentes que tienen huéspedes diferentes (por 25 ejemplo, RSV humano y RSV bovino), el ensayo incumbirá típicamente a cepa(s) que puedan infectar a humanos.

El ensayo para estos agentes es particularmente importante para cepas víricas obtenidas a partir de técnicas genéticas inversas, ya que los virus sembrados para la fabricación de virus experimentarán múltiples pases en el cultivo de células de mamífero durante los procedimientos genéticos inversos, incrementándose, con ello, el riesgo de contaminación por agentes infecciosos accidentales. 30

Agentes infecciosos que no se desarrollan en huevos, pero que se desarrollan en... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la preparación de una vacuna antigripal a partir de virus de la gripe que se han desarrollado en un cultivo de una línea de células MDCK, que comprende una etapa en la cual el virus sembrado y/o la vacuna y/o el cultivo se ensaya para determinar la presencia de un agente infeccioso que puede desarrollarse en dicha línea de células, pero que no se desarrolla en huevos de gallina embrionados, en el que dicho agente infeccioso es uno o más de los patógenos siguientes: Reoviridae de mamíferos; Pneumoviridae; Pneumovirus de 5 Pneumoviridae; morbilivirus de la familia Paramyxoviridae; virus ECHO de los Enterovirus de la familia Picornaviridae; o Rotavirus.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el agente infeccioso es uno o más de los patógenos siguientes: virus respiratorio sincitial (VRS); virus del sarampión.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, que comprende además una o más de las etapas siguientes: una 10 etapa de inactivación; una etapa de mezclado de tres cepas de virus para obtener una vacuna trivalente; una etapa de formulación de la vacuna para inyección; una etapa de combinación de la vacuna con un adyuvante; una etapa de medición del contenido en HA; una etapa de ajuste del contenido en HA, por ejemplo, por dilución; una etapa de adición de un conservante; una etapa de eliminación de los ácidos nucléicos de la célula huésped residuales.

4. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el cultivo se ensaya mediante 15 detección inmunoquímica; ensayos de inoculación de cultivos de células y/o detección de acidos nucléicos.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que la detección es mediante ELISA y/o PCR.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el ensayo se lleva a cabo en una de las fases siguientes: infección vírica, fases de desarrollo, recolección vírica, procesamiento vírico, desdoblamiento, extracción de proteína de superficie, formulación de vacuna, envasado de vacuna. 20

7. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la vacuna es una vacuna de virus atenuado vivo.

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la vacua es una vacuna de virus inactivado.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que la vacuna es una vacuna de virus completo, una vacuna 25 de virus desdoblado, o una vacuna de subunidad viral.

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la vacuna es una vacuna antigripal trivalente.

11. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones en el que la vacuna es una vacuna antigripal pandémica monovalente. 30

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que la vacuna incluye una cepa del virus de la gripe H5 o H7.