QTL para resistencia a mastitis en ganado bovino.

Método para determinar la resistencia frente a mastitis en cualquier sujeto bovino de las razas de RojaDanesa,

Ayrshire, Roja y Blanca Sueca y Holstein, que comprende detectar en una muestra de dicho sujetobovino la presencia o ausencia de al menos un marcador genético que está ligado con al menos un rasgoindicativo de resistencia a mastitis, en el que dicho al menos un marcador genético está ubicado en elcromosoma bovino BTA9 en la región flanqueada por y que incluye los marcadores microsatélitespolimórficos C6orf93 e inra084, en el que la presencia o ausencia de dicho al menos un marcador genéticoes indicativo de resistencia a mastitis de dicho sujeto bovino o descendencia del mismo.

QTL para resistencia a mastitis en ganado bovino.

Campo de la invención La presente invención se refiere a un método para determinar la resistencia frente a mastitis en un sujeto bovino que comprende detectar al menos un marcador genético ubicado en el cromosoma bovino BTA9. Además, la presente invención se refiere al uso de un kit de diagnóstico para detectar la presencia o ausencia de al menos un marcador genético asociado con resistencia frente a mastitis.

Antecedentes de invención La mastitis es la inflamación de la glándula mamaria o ubre de la vaca que resulta de infección o traumatismo y se cree que la mastitis es la enfermedad más importante económicamente en el ganado bovino.

La enfermedad puede producirse por una variedad de agentes. La causa principal de la mastitis es la invasión de la glándula mamaria a través de la punta del pezón por microorganismos.

La mastitis puede ser clínica o subclínica, precediendo la infección subclínica a las manifestaciones clínicas. La mastitis clínica (CM) puede detectarse visualmente mediante la observación de glándulas mamarias rojas e hinchadas, es decir, ubre roja hinchada, y mediante la producción de leche coagulada. Una vez detectada, la leche de vacas con mastitis se mantiene separada del tanque de modo que no afecte a la calidad de la leche total.

La mastitis subclínica es un tipo de mastitis caracterizada por altos recuentos de células somáticas (SCS) , una temperatura corporal normal o elevada y muestras de leche que deben dar resultados positivos en cultivo. Por tanto, la mastitis subclínica no puede detectarse visualmente por la hinchazón de la ubre o por la observación de la glándula o la leche producida. Debido a esto, los granjeros no tienen la opción de apartar la leche de las vacas con mastitis subclínica. Sin embargo, esta leche es de calidad inferior a la de las vacas no infectadas y por tanto puede contaminar el resto de la leche en el tanque.

La mastitis puede detectarse mediante el uso de recuentos de células somáticas (SCS) en los que se analiza una muestra de leche de una vaca para determinar la presencia de células somáticas (glóbulos blancos) . Las células somáticas son parte del mecanismo de defensa natural de la vaca y los recuentos de células aumentan cuando la ubre resulta infectada. El número de células somáticas en una muestra de leche puede estimarse indirectamente mediante un viscosímetro de bola rodante y un contador Coulter.

Puesto que la mastitis da como resultado una cantidad y calidad reducidas de la leche y productos de la leche, la mastitis da como resultado pérdidas económicas para el granjero y la industria láctea. Por tanto, la capacidad para determinar la base genética de la resistencia frente a mastitis en un animal bovino es de importancia económica inmensa para la industria láctea, tanto en lo que se refiere a la producción de leche diaria, como también en la gestión de la cría, seleccionando sujetos bovinos con resistencia frente a mastitis. Sería deseable un método para seleccionar genéticamente sujetos bovinos con resistencia mejorada que diera vacas menos propensas a padecer mastitis.

Un enfoque para identificar determinantes genéticos para rasgos genéticos es el uso del mapeo del desequilibrio de ligamiento (LD) que tiene como objetivo aprovecharse de recombinantes históricos y se ha demostrado en algunas poblaciones de ganado, incluyendo ganado bovino lechero, que se extiende en segmentos de cromosomas muy largos cuando se compara con las poblaciones humanas (Famir et al., 2000) . Una vez mapeado, puede aplicarse de manera útil un locus de rasgos cuantitativos (QTL) en la selección asistida por marcador.

Desequilibrio de ligamiento El desequilibrio de ligamiento refleja acontecimientos de recombinación que se remontan en la historia y el uso de mapeo del LD dentro de familias aumenta la resolución del mapeo. Existe LD cuando los haplotipos observados en una población no concuerdan con las frecuencias de haplotipo previstas multiplicando la frecuencia de marcadores genéticos individuales en cada haplotipo. Con respecto a esto, el término haplotipo significa un conjunto de marcadores genéticos estrechamente asociados presentes en un cromosoma que tienden a heredarse juntos. Con el fin de que el mapeo del LD sea eficaz, es necesario que la densidad de marcadores genéticos sea compatible con la distancia a través de la cual se extiende el LD en la población dada. En un estudio de LD en una población de ganado bovino lechero usando un alto número de marcadores genéticos (284 marcadores microsatélites autosómicos) se demostró que el LD se extiende varias decenas de centimorgans para los marcadores intracromosómicos (Farnir et al. 2000) . De manera similar, Georges, M (2000) notificó que la ubicación de un marcador genético que está asociado con un fenotipo particular en ganado normalmente tiene un intervalo de confianza de 20-30 cM (correspondiente a quizá 500-1000 genes) (Georges, M., 2000) . La existencia de desequilibrio de ligamiento se tiene en cuenta con el fin de usar mapas de regiones particulares de interés con alta confianza.

En la presente invención se han identificado locis de rasgos cuantitativos asociados a mastitis clínica y/o SCS en el cromosoma bovino BTA9, lo que permite un método para determinar si un sujeto bovino será resistente a mastitis.

Sumario de invención Es de interés económico significativo dentro de la industria de ganado bovino poder seleccionar sujetos bovinos con resistencia frente a mastitis aumentada y de ese modo evitar pérdidas económicas en relación con animales que padecen mastitis. La predisposición genética para la resistencia frente a mastitis puede detectarse mediante la presente invención. La presente invención ofrece un método para determinar la resistencia frente a mastitis en un sujeto bovino basándose en marcadores genéticos que están asociados con y/o relacionados con resistencia frente a mastitis.

Por tanto, un aspecto de la presente invención se refiere a un método para determinar la resistencia frente a mastitis en un sujeto bovino, que comprende detectar en una muestra de dicho sujeto bovino la presencia o ausencia de al menos un marcador genético que está ligado con al menos un rasgo indicativo de resistencia a mastitis, en el que dicho al menos un marcador genético está ubicado en el cromosoma bovino BTA9 en la región flanqueada por y que incluye los marcadores microsatélites polimórficos C6ºrf93 e inra084, en el que la presencia o ausencia de dicho al menos un marcador genético es indicativa de resistencia a mastitis de dicho sujeto bovino o descendencia del mismo.

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere al uso de un kit de diagnóstico para detectar la presencia o ausencia en un sujeto bovino de al menos un marcador genético asociado con resistencia frente a mastitis, que comprende al menos una secuencia de oligonucleótidos y combinaciones de las mismas, seleccionándose las secuencias de nucleótidos de cualquiera de SEQ ID NO.: 75 a SEQ ID NO.: 98.

Descripción de los dibujos Figura 1: Exploración de genoma de BTA9 en relación con resistencia a mastitis característica de familias de Roja Danesa. Los números se refieren al “número de libro genealógico”. El eje X representa la distancia del cromosoma expresada en Morgan según las posiciones empleadas en este análisis. El eje Y representa los datos estadísticos de prueba del análisis de QTL expresados en el valor de F.

Figura 2: Exploración de genoma de BTA9 en relación con recuento de células somáticas característico de familias de Roja Danesa. Los números se refieren al “número de libro genealógico”. El eje X representa la distancia del cromosoma expresada en Morgan según las posiciones empleadas en este análisis. El eje Y representa los datos estadísticos de prueba del análisis de QTL expresados en el valor de F.

Figura 3: Exploración de genoma de BTA9 en relación con resistencia a mastitis característica de familias de Ayrshire Finlandesa. Los números se refieren al “número de libro genealógico”. El eje X representa la distancia del cromosoma expresada en Morgan según las posiciones empleadas en este análisis. El eje Y representa los datos estadísticos de prueba del análisis de QTL expresados en el valor de F.

Figura 4: Exploración de genoma de BTA9 en relación con recuento de células somáticas característico de familias de Ayrshire Finlandesa. Los números se refieren al “número de libro genealógico”. El eje X representa la distancia del cromosoma expresada en Morgan según las posiciones empleadas en este análisis. El eje Y representa los datos estadísticos... [Seguir leyendo]

1. Método para determinar la resistencia frente a mastitis en cualquier sujeto bovino de las razas de Roja Danesa, Ayrshire, Roja y Blanca Sueca y Holstein, que comprende detectar en una muestra de dicho sujeto bovino la presencia o ausencia de al menos un marcador genético que está ligado con al menos un rasgo indicativo de resistencia a mastitis, en el que dicho al menos un marcador genético está ubicado en el cromosoma bovino BTA9 en la región flanqueada por y que incluye los marcadores microsatélites polimórficos C6ºrf93 e inra084, en el que la presencia o ausencia de dicho al menos un marcador genético es indicativo de resistencia a mastitis de dicho sujeto bovino o descendencia del mismo.

2. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético está ubicado en la región flanqueada por y que incluye los marcadores genéticos bms2251 e inra084 de BTA9.

3. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético está ubicado en la región flanqueada por y que incluye los marcadores genéticos bm7234 e inra144 de BTA9.

4. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético está ubicado en la región flanqueada por y que incluye los marcadores genéticos bms2819 e inra144 de BTA9.

5. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético está ubicado en la región flanqueada por y que incluye los marcadores genéticos bm4208 e inra144.

6. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite C6ºrf93.

7. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite DIK4986.

8. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite mm12e6.

9. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite PEX3.

10. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite DEAD21.

11. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite BMS 2251.

12. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite EPM2A.

13. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite BM7234.

14. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite BM4208.

15. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite BMS2819.

16. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite INRA144.

17. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es el marcador microsatélite INRA084.

18. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es una combinación de marcadores genéticos.

19. Método según la reivindicación 6, en el que el par de cebadores para amplificar el marcador microsatélite C6ºrf93 es SEQ ID NO.: 75 y SEQ ID NO.:76.

20. Método según la reivindicación 9, en el que el par de cebadores para amplificar el marcador microsatélite PEX3 es SEQ ID NO.: 81 y SEQ ID NO.:82.

21. Método según la reivindicación 12, en el que el par de cebadores para amplificar el marcador microsatélite EPM2A es SEQ ID NO.: 87 y SEQ ID NO.:88.

22. Método según la reivindicación 1, en el que el al menos un marcador genético es una combinación de marcadores genéticos.

23. Método para seleccionar sujetos bovinos para fines de cría, comprendiendo dicho método el método según la reivindicación 1 que determina la resistencia frente a mastitis.

24. Uso de un kit de diagnóstico que comprende al menos una secuencia de oligonucleótidos, seleccionándose las secuencias de nucleótidos de cualquiera de SEQ ID NO.: 75 a SEQ ID NO.: 98 para detectar la presencia o ausencia en un sujeto bovino de al menos un marcador genético asociado con resistencia frente a mastitis según el método según la reivindicación 1.