Inhibidor de cinesina mitótica.

Un derivado de tiadiazolina representado por la fórmula (208) o (216) o una sal farmacológicamente aceptable delmismo.

Inhibidor de cinesina mitótica

Campo técnico

La presente invención se refiere a un inhibidor de la cinesina mitótica Eg5 que comprende un derivado detiadiazolina o una sal farmacológicamente aceptable del mismo como un ingrediente activo, que es eficaz en el tratamiento de una enfermedad asociada con la proliferación celular, por ejemplo, reestenosis, hipertrofia cardíaca, enfermedades inmunológicas y similares.

Antecedentes Las cinesinas mitóticas son proteínas que están implicadas en la regulación del eje mitótico y desempeñan un papelesencial para el progreso de la fase mitótica en el ciclo celular. Estas proteínas tienen una función de movimiento de las proteínas por microtúbulos usando la energía producida por hidrólisis de ATP y pertenecen a una clase deproteínas funcionales denominadas en general “motores moleculares”. En la fase mitótica, las proteínas estánsumamente implicadas en la extensión y el mantenimiento de los ejes mitóticos, así como en la formación de laestructura denominada cuerpo polar del eje, y además, regulan el progreso de la división celular normal por elmovimiento de los cromosomas por los microtúbulos del eje.

La cinesina mitótica Erg5 es una de las cinesinas mitóticas que constituyen una subfamilia conservada evolutivamente. Se sabe que Eg5 tiene una función como molécula de homotetrámero bipolar y está implicada en laformación de la estructura del eje bipolar por entrecruzamiento de dos de los microtúbulos de la misma dirección y desplazándolos en la dirección hacia el extremo + (mas) para causar el deslizamiento de dos de los microtúbulosantiparalelos, mantiene de ese modo los extremos – (menos) de los microtúbulos a una distancia y separa los cuerpos polares del eje. Las funciones anteriores de Eg5 se elucidaron sobre la base del análisis de las célulashumanas tratadas con anticuerpo anti-Eg5 y un inhibidor específico [Cell, Vol. 83, pág. 1.159 (1.995) ; J. Cell Biol., Vol. 150, pág. 975 (2.000) ; Jikken Igaku (Experimental Medicine) , Vol. 17, pág. 439 (1.999) ].

El gen de Eg5 humana fue clonado en 1.995, y se informó de la expresión de una proteína recombinante de Eg5humana de longitud completa por el uso de una célula de insecto y el análisis funcional usando la proteína resultante [Cell, Vol. 83, pág. 1.159 (1.995) ]. El gen fue registrado en una base de datos pública con números de acceso deGenBank: X85137, NM004523 y U37426. Se refirió un análisis bioquímico y un análisis de la estructura porcristalización de Eg5 utilizando una porción N-terminal de Eg5 humana, expresada usando células de Escherichia coli, [J. Biological Chemistr y , Vol. 276, pág. 25496 (2.001) ; Chemistr y & Biology, Vol. 9, pág. 989 (2.002) ], que aplicóla técnica similar al análisis utilizando Eg5 procedente de Xenopus laevis con una alta homología a la Eg5 humana [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 96, pág. 9.106 (1.999) ; Biochemistr y , Vol. 35, pág. 2.365 (1.996) ].

Como se describió anteriormente, la cinesina mitótica Eg5 es importante como molécula diana de una nueva fasemitótica que actúa como agente y se considera que es prometedor un inhibidor contra dicha molécula como agentepara el tratamiento terapéutico de enfermedades en que está implicada la proliferación celular (por ejemplo, reestenosis, hipertrofia cardíaca, artritis, enfermedades inmunológicas y similares) (WO 01/98278; WO 02/56880; WO 02/57244; Trends in Cell Biology, Vol. 12, pág. 585 (2.002) ].

Como compuestos con actividad inhibidora contra la enzima de Eg5 humana, se refirieron monastrol [Science, Vol.286, pág. 971 (1.999) ], derivados de quinazolina (WO 01/98278) , derivados de fenatiazina (WO 02/57244) , derivadosde trifenilmetano (WO 02/56880) , derivados de dihidropirimidina (WO 02/79149; WO02/79169) , derivados de dihidropirazol (WO 03/79973) y similares.

Se conocen derivados de tiadiazolina con actividad inhibidora contra una activación del factor de transcripciónSTAT6 o los que tienen acción antagonista de la integrina (Pubilcación No Examinada de Patente Japonesa (KOKAI) Nº 2000-229959; WO 01/56994) , y además, son también conocidos los que tienen una actividad antibacteriana, actividad inhibidora de ACE o similares (WO 93/22311; Pubilcación No Examinada de Patente Japonesa (KOKAI) Nº62-53976; J. Bangladesh Chem. Soc., Vol. 5, pág. 127 (1.992) ) .

Descripción de la invención Un objeto de la presente invención es proporcionar un inhibidor de la cinesina mitótica Eg5 y similares quecomprende un derivado de tiadiazolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como un ingrediente activosegún la reivindicación 1.

La presente invención se refiere a lo siguiente (1) a (27) .

(1) Un inhibidor de la cinesina mitótica Eg5 que comprende un derivado de tiadiazolina representado por la fórmulageneral (I) o uno aceptable farmacológicamente.

El ejemplo de la sal farmacológicamente aceptable de los compuestos de la invención incluye sales de adición deácido farmacológicamente aceptables, sales de metal, sales de amonio, sales de adición de amina orgánica, salesde adición de aminoácido y similares. Ejemplos de la sal de adición de ácido farmacológicamente aceptable incluyen una sal de adición de ácido inorgánico tal como hidrocloruro, sulfato y fosfato, una sal de adición de ácido orgánicotal como acetato, maleato, fumarato y citrato y similares. Ejemplos de la sal de metal farmacológicamente aceptable incluyen una sal de metal alcalino tal como una sal de sodio y una sal de potasio, una sal de metal alcalino-térreo talcomo una sal de magnesio y una sal de calcio, una sal de aluminio, una sal de cinc y similares. Ejemplos de la sal deamonio farmacológicamente aceptable incluyen una sal de amonio, tetrametilamonio o similares. Ejemplos de la sal de adición de amina orgánica farmacológicamente aceptable incluyen una sal de adición de morfolina, piperidina osimilares. Ejemplos de la sal de adición de aminoácido farmacológicamente aceptable incluyen una sal de adición delisina, glicina, fenilalanina, ácido aspártico, ácido glutámico o similares.

Los compuestos de la invención se pueden preparar según los siguientes ejemplos 1 y 2.

Ejemplos Ejemplo 1 (Compuesto 208)

Etapa 1: Se disolvió hidrocloruro de 2-aminoacetofenona (2, 93 g, 17, 1 mmol) en acetonitrilo (100 ml) . A la disoluciónse añadió sucesivamente dicarbonato de di-terc-butilo (5, 09 g, 22, 9 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (2, 21 g, 18, 1mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 10 horas. A la mezcla de reacción se añadió cloruro deamonio acuoso saturado y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con cloruro sódico

acuoso saturado y se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó el disolvente a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 9/1→4/1) para proporcionar 2 (N-terc-butoxicarbonilamino) acetofenona (865 mg, 21%) .

Etapa 2: Se disolvió 2- (N-terc-butoxicarbonilamino) acetofenona (851 mg, 3, 62 mmol) obtenido anteriormente enmetanol (20 ml) . Se añadió a la disolución hidrocloruro de tiosemicarbazida (1, 03 g, 8, 04 mmol) , y se agitó la mezcla25 a temperatura ambiente durante 15 horas. Se añadió agua a la reacción mezcla y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con cloruro de sodio acuoso saturado y se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó el disolvente a presión reducida. Se disolvió el residuo resultante en diclorometano (50 ml) , se añadiópiridina a la disolución (1, 75 ml, 21, 7 mmol) y cloruro de trimetilacetilo (2, 23 ml, 18, 1 mmol) , y se agitó la mezcla atemperatura ambiente durante 16 horas. A la mezcla de reacción se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso

saturado y se agitó además la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora y después se extrajo con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con cloruro de sodio acuoso saturado y se secó sobre sulfato de sodio anhidro y seevaporó el disolvente a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice (acetato de hexaneletilo = 9/1 → 4/1) para proporcionar Compuesto 208 (910 mg, 53%) .

APCI-MS m/z 477 (M+H) +.

Ejemplo 2 (Compuesto 216)

Se añadió compuesto 208 (3, 13 g, 6, 57 mmol) preparado en el Ejemplo 1 a 4 mol/l de cloruro de hidrógeno – acetatode etilo (30 ml) , y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se trituró el residuo con acetato de etilo para proporcionar Compuesto 216 (2, 80 g, cuantitativo) como hidrocloruro.

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1. Un derivado de tiadiazolina representado por la fórmula (208) o (216) o una sal farmacológicamente aceptable delmismo.

2. Un derivado de tiadiazolina representado por la fórmula (208) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo.

3. Un derivado de tiadiazolina representado por la fórmula (216) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo.