Conjugados de maitansinoide DM1 con anticuerpo trastuzumab, unidos mediante un conector no escindible, y su uso en el tratamiento de tumores.

Un conjugado agente de unión a células maitansinoide que tiene la fórmula siguiente: **Fórmula**

en la que Ab es trastuzumab.

Conjugados de maitansinoide DM1 con anticuerpo trastuzumab, unidos mediante un conector no escindible, y su uso en el tratamiento de tumores Campo de la invención La presente invención se refiere a conjugados de agente de unión a células maitansinoide unidos mediante un conector no escindible.

Antecedentes de la invención Los maitansinoides son fármacos altamente citotóxicos. La maitansina fue aislada por primera vez por Kupchan et al. apartir del arbusto de África oriental Maytenus serrata y se mostró que era 100 a 1.000 veces más citotóxico que los agentes quimioterapéuticos para el cáncer convencionales como metotrexato, daunorrubicina y vincristina (Pat. U.S. No. 3.896.111) . Posteriormente, se descubrió que algunos microbios también producen maitansinoides, tal como maitansinol y ésteres C-3 de maitansinol (Pat. U.S. No. 4.151.042) . También se han reportado ésteres C-3 sintéticos del maitansinol y análogos del maitansinol (Kupchan et al., 21 J. Med. Chem. 31-37 (1978) ; Higashide et al. 270 Nature 721-722 (1977) ; Kawai et al., 32 Chem. Pharm. Bull. 3441-3451 (1984) ) . Los ejemplos de análogos del maitansinol a partir de los que se han preparado ésteres C-3 incluyen maitansinol con modificación en el anillo aromático (por ejemplo, descloro) o en el C9, C-14 (por ejemplo, grupo metilo hidroxilado) , C-15, C-18, C-20 y C-4, 5.

Los ésteres C-3 naturales y sintéticos pueden clasificarse en dos grupos:

(a) ésteres C-3 con ácidos carboxílicos simples (Pat. U.S. Nos. 4.248.870; 4.265.814; 4.308.268; 4.308.269; 4.309.428; 4.317.821; 4.322.348; y 4.331.598) , y

(b) ésteres C-3 con derivados de N-metil-L-alanina (Pat. U.S. Nos. 4.137.230 y 4.260.608; y Kawai et al., 32 Chem. Pharm. Bull. 3441-3451 (1984) ) .

Se encontró que los ésteres del grupo (b) eran mucho más citotóxicos que los ésteres del grupo (a) .

La maitansina es un inhibidor mitótico. Se ha reportado que el tratamiento de células L1210 in vivo con maitansina resulta en el 67% de las células acumulándose en mitosis. Se reportó que las células control no tratadas demuestran un índice mitótico que varía entre 3, 2 a 5, 8% (Sieber et al., 43 Bibl. Haematol. 495-500 (1976) ) . Los experimentos con huevos de erizo de mar y huevos de almeja han sugerido que la maitansina inhibe la mitosis interfiriendo con la formación de microtúbulos mediante la inhibición de la polimerización de la proteína de microtúbulos, tubulina (Remillard et al., 189 Science 1002-1005 (1975) ) .

In vitro, se ha encontrado que las suspensiones de células leucémicas murinas P388, L1210 y LY5178 son inhibidas por maitansina a dosis de 10-3 a 10-1 μg/ml siendo la línea P388 la más sensible. También se ha mostrado que la maitansina es un inhibidor activo del crecimiento in vitro de células de carcinoma nasofaríngeo humano y se reportó que la línea de leucemia linfoblástica C.E.M. se inhibía por concentraciones tan bajas como 10-7 μg/ml (Wolpert-DeFillippes et al., 24 Biochem. Pharmacol. 1735-1738 (1975) ) .

También se ha mostrado que la maitansina es activa in vivo. Se mostró que el crecimiento tumoral en el sistema de leucemia linfocítica P388 se inhibía sobre un intervalo de dosificación de 50 a 100 veces, lo que sugirió un alto índice terapéutico; también pudo demostrarse una actividad inhibidora significativa con el sistema de leucemia de ratón L1210, el sistema de carcinoma de pulmón de Lewis humano y el sistema de melanocarcinoma humano B-16 (Kupchan, 33 Ped. Proc 2288-2295 (1974) ) .

Como los maitansinoides son altamente citotóxicos, se esperaba que fueran útiles en el tratamiento de muchas enfermedades tal como el cáncer. Esta expectativa todavía debe llevarse a cabo. Los ensayos clínicos con maitansina no fueron favorables debido a varios efectos secundarios (Issel et al., 5 Cancer Treat. Rev. 199-207 (1978) ) . Los efectos adversos en el sistema nervioso central y los síntomas gastrointestinales fueron los responsables de que algunos pacientes rechazaran más terapia (Issel en 204) y pareció que la maitansina estaba asociada con neuropatía periférica que podría ser acumulativa (Issel en 207) .

De acuerdo con esto, se emplearon técnicas de direccionamiento para administrar selectivamente los fármacos a la célula diana. Se han investigado tanto conectores escindibles como no escindibles para varios fármacos, pero en la mayor parte de los casos, incluyendo el caso de los maitansinoides, los ensayos de citotoxicidad in vitro han revelado que los conjugados anticuerpo-fármaco pocas veces consiguen la misma potencia de citotoxicidad que los fármacos libres no conjugados. Así, se ha aceptado generalmente que para que la administración dirigida de maitansinoides sea eficaz, la unión entre el maitansinoide y el agente de unión a células debe ser escindible.

Además, en el área de las inmunotoxinas, se mostró que los conjugados que contienen conectores con puentes disulfuro entre anticuerpos monoclonales y toxinas proteicas catalíticamente activas son más citotóxicos que los conjugados que contienen otros conectores. Véase, Lambert et al., 260 J. Biol. Chem. 12035-12041 (1985) ; Lambert et al., en Immunotoxins 175-209 (A. Frankel, ed. 1988) , y Ghetie et al., 48 Cancer Res. 2610-2617 (1988) . Esto se atribuyó a la alta concentración intracelular de glutatión que contribuye a la escisión eficaz del enlace disulfuro entre una molécula de anticuerpo y una toxina. Más recientemente, se mostró que un conjugado de maitansinoides unido al anticuerpo TA.1 anti-Her2 de cáncer de mama mediante el conector no escindible SMCC es 200 veces menos potente que un conjugado de maitansinoides unido a TA.1 mediante un conector que tiene un enlace disulfuro escindible (Chari et al., 52 Cancer Res. 127-133 (1992) ) .

Así, se han buscado conjugados citotóxicos unidos mediante conectores escindibles que contienen disulfuro. Shen et al. describieron la conversión de metotrexato en un derivado mercaptoetilamida seguido de la conjugación con poli-D-lisina mediante un enlace disulfuro (260 J. Biol. Chem. 10905-10908 (1985) ) . También se describió la preparación de un conjugado del fármaco tóxico que contiene trisulfuro caliqueamicina con un anticuerpo (Menendez et al., Fourth International Conference on Monoclonal Antibody Immunoconjugates for Cancer, San Diego, Resumen 81 (1989) ) .

Las Patentes U.S. Nos. 5.208.020 y 5.416.064 describen conjugados citotóxicos que comprenden agentes de unión a células unidos a derivados maitansinoide específicos mediante conectores escindibles, tales como conectores que contienen grupos disulfuro, conectores que contienen grupos lábiles a ácidos, conectores que contienen grupos foto lábiles, conectores que contienen grupos lábiles a peptidasas y conectores que contienen grupos lábiles a esterasas.

La Patente U.S. No. 6.333.410 B1 describe un proceso para preparar y purificar maitansinoides que contienen tiol para unión a agentes de unión a células y la Patente U.S. No. 6.441.163 B1 describe un método de una etapa para preparar conjugados citotóxicos de maitansinoides y agentes de unión a células, en los que el conector es un conector escindible que contiene disulfuro.

Además, la Patente U.S. No. 5.208.020 enseña conjugados anticuerpo-maitansinoide con conectores no escindibles, en los que el conector comprende un grupo maleimido. Sin embargo, la referencia no contiene datos experimentales que demuestren que dichos conjugados son eficaces para tratar enfermedades.

Ahora se ha encontrado, inesperadamente, que conjugados citotóxicos de maitansinoides y agentes de unión a células unidos mediante conectores no escindibles son extremadamente potentes y en muchos casos tienen ventajas inesperadas sobre conjugados de maitansinoides y agentes de unión a células con conectores escindibles.

Resumen de la invención Tomando como base la descripción que está contenida en la presente memoria, la presente invención proporciona un conjugado agente de unión a células maitansinoide que tiene la fórmula siguiente:

en la que Ab es trastuzumab.

La presente invención y realizaciones de ésta se muestran en las reivindicaciones adjuntas. 3

Descripción breve de los dibujos La FIG. 1 muestra la estructura de SMCC. La FIG. 2 muestra la estructura de DM1. La FIG. 3 muestra gráficamente los resultados de un ensayo de unión FACS que compara el anticuerpo huC242 con el

conjugado anticuerpo-maitansinoide huC242-SMCC-DM1. La FIG. 4 muestra gráficamente la citotoxicidad de huC242-SMCC-DM1. La FIG. 5 muestra la cromatografía de exclusión por tamaño para huC242-SMCC-DM1. Las FIGS. 6A-C y la FIG. 7 muestran gráficamente la citotoxicidad de huC242-SMCC-DM1 comparada con conjugados... [Seguir leyendo]

1. Un conjugado agente de unión a células maitansinoide que tiene la fórmula siguiente:

en la que Ab es trastuzumab.

2. Una composición que comprende el conjugado agente de unión a células maitansinoide de la reivindicación 1, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

3. El conjugado agente de unión a células maitansinoide de la reivindicación 1, para uso en el tratamiento de un tumor maligno.

4. El conjugado agente de unión a células maitansinoide de la reivindicación 1, para uso en el tratamiento de un cáncer 10 que expresa el antígeno Her2.

5. El conjugado agente de unión a células maitansinoide de la reivindicación 4, en el que el cáncer es cáncer de mama, cáncer de próstata o cáncer de ovario.

6. El conjugado agente de unión a células maitansinoide para uso según cualquiera de las reivindicaciones 3-5, en el que el conjugado agente de unión a células maitansinoide es para administrarse con un agente anti-tumoral.