Composiciones y metodos relacionados con anticuerpos de receptores de glucagón.

Una proteína de unión a antígeno que comprende:

a. un dominio variable de cadena ligera que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 14;

ii. una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 45 o la SEC ID Nº: 50;

iii. una secuencia CDR3 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 74, y

b. un dominio variable de cadena pesada que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 102;

ii. una secuencia CDR2 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 128;

iii. una secuencia CDR3 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 169, y

en donde la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

Composiciones y métodos relacionados con anticuerpos de receptores de glucagón

Campo de la invención El campo de la presente invención se refiere a composiciones y a métodos relacionados con anticuerpos de receptores de glucagón.

Antecedentes de la invención El glucagón es una hormona de 29 aminoácidos procesada a partir de su proforma en las células alfa pancreáticas por expresión específica celular de la prohormona convertasa 2 (Furuta et al., J. Biol. Chem. 276: 27197-27202 (2001) ) . Durante el ayuno, la secreción de glucagón aumenta en respuesta a la disminución de los niveles de glucosa. El aumento de la secreción de glucagón estimula la producción de glucosa promoviendo la gluconeogénesis y la glucogenólisis hepática. Por lo tanto el glucagón contrarresta los efectos de la insulina manteniendo normales los niveles normales glucosa en animales.

El receptor de glucagón (GCGR) es un miembro de la subfamilia (familia B) de receptores acoplados a la proteína G

(GCGR) de la secretina. La estructura del receptor de glucagón humano se conoce en la técnica anterior al igual que los anticuerpos específicos que se unen al receptor (véase Buggy J. et al., “Human glucagon receptor monoclonal antibodies: Antagonism of glucagon action and use in receptor characterization”. Homone and Metabolic Research vol. 28, nº 5, a996 págs. 215-219; Wright L. M. et al., “Structure of Fab hGR-2 F6, a competitive antagonist of the glucagon receptor”. Acta Cr y stallograpica Section D, Biologial Cr y stallography vol 56, nº Pt, 5 de mayo 2000 (2000

5) , págs. 573-580; documento EP 1 514 932; documento WO 2006/005469)

El receptor de glucagón se expresa predominantemente en el hígado, donde se regula la producción de glucosa hepática y en el riñón, de ahí su función en la gluconeogénesis. La activación de los receptores de glucagón en el hígado estimula la actividad de la adenil ciclasa y la renovación de fosfoinositol que posteriormente dará como resultado la expresión aumentada de enzimas gluconeogénicas incluyendo la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPCK) , la fructosa-1, 6-bisfosfatasa (FBPase-1) y la glucosa-6-fosfatasa (G-6-Pase) . Además, la señalización del glucagón activa a la glucógeno fosforilasa e inhibe a la glucógeno sintasa.

Estudios realizados han demostrado que niveles más altos de glucagón basal y la falta de supresión de la secreción de glucagón postprandial contribuyen a afecciones diabéticas en seres humanos (Muller et al, N Eng J Med 283:. 109-115 (1970) ) . El direccionamiento de la producción o función del glucagón puede ser un método de control y disminución de glucemia. Existe una necesidad permanente de proporcionar tratamientos eficaces para la diabetes de tipo 2. La presente invención aborda esta necesidad proporcionando nuevas composiciones y métodos para el tratamiento de la diabetes de tipo 2 y enfermedades relacionadas.

Sumario de la invención La presente invención proporciona, entre otras cosas, una proteína de unión a antígeno que comprende un dominio variable de cadena ligera que comprende: una secuencia CDR1 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 14,

una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 45 o la SEC ID Nº: 50, y una secuencia CDR3 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 74; y un dominio variable de cadena pesada que comprende: una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 102, una secuencia CDR2 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 128 y una secuencia CD3 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 169, y en la cual la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

En un aspecto, la proteína de unión a antígeno comprende adicionalmente un dominio variable de cadena ligera seleccionado del grupo que consiste en una secuencia de aminoácidos con una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 217, 219 o 229, un dominio variable de cadena pesada seleccionado del grupo que consiste en una secuencia de aminoácidos con una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 263, 265 o 275, y una 55 combinación de un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada, en el cual el dominio variable de cadena ligera y el dominio variable de cadena pesada se seleccionan del grupo de combinaciones que consiste en: un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia que tiene una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 217 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia con una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 263; un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia con una identidad

de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 219 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia con una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 265; y un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia con una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 229, y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia con una identidad de al menos 90 % con la SEC ID Nº: 275, en la cual la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

Específicamente, el dominio variable de cadena ligera y el dominio variable de cadena pesada de la proteína de unión a antígeno puede seleccionarse del grupo de combinaciones que consiste en: un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 217 y un dominio variable de cadena pesada que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 263; un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 219 y un dominio variable de cadena pesada que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 265; y un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 229, y un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en SEC ID Nº: 275, en la cual la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

Esta proteína de unión a antígeno puede comprender adicionalmente la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 305; la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 307; la secuencia constante de cadena pesada de la SEC ID Nº: 309; la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 305 y la secuencia constante de cadena pesada de la SEC ID Nº: 309, o la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 307 y la secuencia constante de cadena pesada de la SEC ID Nº: 309.

La proteína de unión a antígeno de la invención puede seleccionarse del grupo que consiste en un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo recombinante, un fragmento de anticuerpo de unión a antígeno, un anticuerpo monocatenario, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo, un fragmento de Fab, un fragmento F (fa') x, un anticuerpo de dominio, un anticuerpo de IgD, un anticuerpo de IgE, un anticuerpo de IgM, un anticuerpo de IgG1, un anticuerpo de lgG2 , un anticuerpo de IgG3, un anticuerpo de IgG4 y un anticuerpo de IgG4 que tiene al menos una mutación en la región bisagra.

Específicamente, la proteína de unión a antígeno de la invención descrita anteriormente puede ser un anticuerpo humano. Este anticuerpo humano puede comprender una cadena ligera que tiene la SEC ID Nº: 312 y una cadena pesada que tiene la SEC ID Nº: 311; o una cadena ligera que tiene la SEC ID Nº: 310 y una cadena pesada que tiene la SEC ID Nº: 311. En la invención también se incluye un hibridoma capaz de producir el anticuerpo humano de la invención.

Cuando la proteína de unión a antígeno de la invención se une al receptor de glucagón humano, también puede unirse al receptor de glucagón humano sustancialmente con la misma Kd que un anticuerpo de referencia, inhibir la estimulación de glucagón del receptor de glucagón humano sustancialmente con la misma CI50 que dicho anticuerpo de referencia, o competir en cruzado por la unión con dicho anticuerpo de referencia en el receptor de glucagón humano, en el cual dicho anticuerpo de referencia comprende una combinación de secuencias de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 217 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 263; un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 219 y un dominio variable de cadena pesada que tiene un secuencia como se indica en la SEC... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de unión a antígeno que comprende:

a. un dominio variable de cadena ligera que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 14;

ii. una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 45 o la SEC ID Nº: 50;

iii. una secuencia CDR3 de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 74, y

b. un dominio variable de cadena pesada que comprende:

i. una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 102;

ii. una secuencia CDR2 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 128;

iii. una secuencia CDR3 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 169, y

en donde la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

2. La proteína de unión a antígeno de la reivindicación 1 que comprende:

(a) un dominio variable de cadena ligera seleccionado del grupo que consiste en una secuencia de aminoácidos al menos un 90 % idéntica a la SEC ID Nº: 217, 219 ó 229;

(b) un dominio variable de cadena pesada seleccionado del grupo que consiste en una secuencia de aminoácidos al menos un 90 % idéntica a la SEC ID Nº: 263, 265 ó 275; o

(c) una combinación de un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada, en la cual el dominio variable de cadena ligera y el dominio variable de cadena pesada se seleccionan del grupo de combinaciones que consisten en: un dominio variable de cadena ligera que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 % con la SEC ID Nº: 217 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 % con la SEC ID Nº: 263; un dominio variable de cadena ligera que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 % con la SEC ID Nº: 219 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 % con la SEC ID Nº: 265; y un dominio variable de cadena ligera que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 % con la SEC ID Nº: 229, y un dominio variable de cadena pesada que tiene una identidad de secuencia de al menos un 90 % con la SEC ID Nº: 275,

en donde la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

3. La proteína de unión a antígeno de la reivindicación 2, en la cual el dominio variable de cadena ligera y el dominio variable de cadena pesada se seleccionan del grupo de combinaciones que consiste en: un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 217 y un dominio variable de cadena pesada que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 263; un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 219 y un dominio variable de cadena pesada que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 265; y un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 229 y un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 275,

en donde la proteína de unión a antígeno se une específicamente al receptor de glucagón humano.

4. La proteína de unión a antígeno de la reivindicación 3, que adicionalmente comprende:

a. la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 305;

b. la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 307;

c. la secuencia constante de cadena pesada de la SEC ID Nº: 309;

d. la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 305 y la secuencia constante de cadena pesada de la SEC ID Nº: 309, o

e. la secuencia constante de cadena ligera de la SEC ID Nº: 307 y la secuencia constante de cadena pesada de la SEC ID Nº: 309.

5. La proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la cual la proteína de unión a antígeno se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo recombinante, un fragmento de anticuerpo que se une a antígeno, un anticuerpo monocatenario, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo, un fragmento Fab, un fragmento F (Fa') x, un anticuerpo de dominio, un anticuerpo de IgD, un anticuerpo de IgE, un anticuerpo de IgM, un anticuerpo de IgG1, un anticuerpo de lgG2, un anticuerpo de IgG3, un anticuerpo IgG4 y un anticuerpo de IgG4 que tiene al menos una mutación en la región bisagra.

6. La proteína de unión a antígeno de la reivindicación 5, en la cual la proteína de unión es un anticuerpo humano.

7. El anticuerpo humano de la reivindicación 6, en donde el anticuerpo comprende:

a. una cadena ligera que tiene la SEC ID Nº: 312 y una cadena pesada que tiene la SEC ID Nº: 311; o

b. una cadena ligera que tiene la SEC ID Nº 310 y una cadena pesada que tiene la SEC ID Nº: 311.

8. La proteína de unión a antígeno de las reivindicaciones 1 ó 2 que, cuando se une al receptor de glucagón humano:

a. se une al receptor de glucagón humano sustancialmente con la misma Kd que la de un anticuerpo de referencia;

b. inhibe la estimulación de glucagón del receptor de glucagón humano sustancialmente con la misma IC50 que la de dicho anticuerpo de referencia; o

c. compite en cruzado por la unión con dicho anticuerpo de referencia sobre el receptor de glucagón humano,

en el cual dicho anticuerpo de referencia comprende una combinación de secuencias de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 217 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 263; un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 219 y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 265; y un dominio variable de cadena ligera que tiene una secuencia como se indica en la SEC ID Nº: 229, y un dominio variable de cadena pesada que tiene una secuencia como se indica en SEC ID Nº: 275.

9. Una composición farmacéutica que comprende la proteína de unión a antígeno de las reivindicaciones 1 a 8 mezclada con un portador farmacéuticamente aceptable de la misma.

10. Un ácido nucleico que comprende una secuencia de polinucleótidos, que codifica el dominio variable de cadena ligera, el dominio variable de cadena pesada, o ambos, del agente de unión a antígeno de las reivindicaciones 1 ó 2.

11. El ácido nucleico de la reivindicación 10, en el cual el polinucleótido que codifica la secuencia de cadena ligera se selecciona de las SEC ID Nos: 216, 218 y 288; y el polinucleótido que codifica la secuencia de cadena pesada se seleccionada de las SEC ID Nos: 262, 264 y 278.

12. Un vector de expresión recombinante que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 10 u 11.

13. Una célula hospedadora que comprende el vector de la reivindicación 12.

14. Un hibridoma capaz de producir el anticuerpo de la reivindicación 6 ó 7.

15. Un método de producción de una proteína de unión a antígeno que se une específicamente al receptor de glucagón humano que comprende incubar la célula hospedadora de la reivindicación 13 en condiciones que permiten que esta exprese la proteína de unión a antígeno.

16. La proteína de unión a antígeno de las reivindicaciones 1 a 8, o la composición de la reivindicación 9 para su uso para

(i) disminuir la glucosa en sangre;

(ii) mejorar la tolerancia a glucosa; o

(iii) prevenir o tratar la diabetes de tipo 2 o un trastorno relacionado en un sujeto que necesite dicho tratamiento.

17. La proteína de unión a antígeno, el anticuerpo humano o el compuesto de la reivindicación 16 para el uso especificado en la misma, en el cual el trastorno relacionado es hiperglucemia, glucemia basal alterada, tolerancia alterada a glucosa, dislipidemia y síndrome metabólico.

18. Un kit para el tratamiento de la diabetes de tipo 2 que comprende la composición de la reivindicación 9.

19. El uso de la proteína de unión a antígeno de las reivindicaciones 1 a 8, o la composición farmacéutica de la reivindicación 9 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de trastornos que se benefician de la reducción de glucosa en sangre.

20. El uso de la reivindicación 19 en el cual los trastornos se seleccionan de diabetes de tipo 2, hiperglucemia, glucemia basal alterada, tolerancia alterada a glucosa, dislipidemia y síndrome metabólico.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

Esta lista de referencias citadas por el solicitante es únicamente para la comodidad del lector. No forma parte del documento de la patente europea. A pesar del cuidado tenido en la recopilación de las referencias, no se pueden 5 excluir errores u omisiones y la EPO niega toda responsabilidad en este sentido.

Documentos de patentes citados en la descripción

Literatura diferente de patentes citadas en la descripción