Anticuerpos selectivos anti-hepcidina-25 y usos de los mismos.

Un anticuerpo monoclonal que se une selectivamente a hepcidina-25 humana que consiste en la secuencia deaminoácidos mostrada en SEC ID Nº:

en donde el anticuerpo comprende seis CDR seleccionadas del grupo queconsiste en:

(i) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 9, 10, 11, 32, 33 y 34, respectivamente.

(ii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 12, 13, 14, 35, 36 y 37, respectivamente.

(iii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 45, 13, 14, 35, 36 y 37, respectivamente.

(iv) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 12, 13, 14, 38, 36 y 37, respectivamente.

(v) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 15, 10, 16, 39, 40 y 41, respectivamente.

(vi) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 22, 42, 43 y 44, respectivamente.

(vii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 23, 42, 43 y 44, respectivamente.

(viii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 24, 25, 23, 42, 43 y 44, respectivamente.

(ix) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 27, 42, 43 y 44, respectivamente.

(x) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que semuestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 28, 42, 43 y 44, respectivamente.

(xi) LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SASSSX1SX2MY (SEC ID Nº: 6) LCDR2 que tiene la secuenciade aminoácidos LTSX3LAS (SEC ID Nº: 7) LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos QQWSSX4PPT (SEC IDNº: 8) HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos GX9SLX10X11X12GX13GX14G (SEC ID Nº: 29) HCDR2 quetiene la secuencia de aminoácidos HIWWN X15X16KX17YNTX18LKS (SEC ID Nº: 30) y HCDR3 que tiene lasecuencia de aminoácidos IX19YYG X20X21X22GFAY (SEC ID Nº: 31), en la que X1 es V o A, X2 es Y o S, X3 es N oH, X4 es N, G o Y, X9 es F, Y o L, X10 es S o N, X11 es T o S, X12 es Y o P, X13 es I o F, X14 es V o I, X15 es D o G,X16 es A o N; X17 es S o Y, X18 es A o T, X19 es G o H, X20 es S o N, X21 es T o S, y X22 es S, A o Y; y

(xii) LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos KSSQSLLYX5NGKTYLT (SEC ID Nº: 17) LCDR2 que tiene lasecuencia de aminoácidos LVSKLDX6 (SEC ID Nº: 18) LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidosX7QGSHFPWX8 (SEC ID Nº: 19) HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos GFAFSSYDMS (SEC ID Nº: 42),HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos TIISGGTYTYYPDSVKG (SEC ID Nº: 43) y HCDR3 que tiene lasecuencia de aminoácidos DGYIH (SEC ID Nº: 44), en la que X5 es S, R o P, X6 es S o P, X7 es V, H, I o F y X8 esT o V.

Anticuerpos selectivos anti-hepcidina-25 y usos de los mismos La presente invención se encuentra en el campo de la medicina, particularmente en el sector de los anticuerpos contra hepcidina-25 humana. Más específicamente, la presente invención se refiere al tratamiento de determinadas enfermedades, tales como anemia, mediante la administración de anticuerpos selectivos anti-hepcidina-25 a pacientes con necesidad de ello. La presente divulgación se refiere además a procedimientos y a kits para detectar hepcidina-25 y/o diagnosticar una afección patológica caracterizada por niveles elevados de hepcidina-25.

Se cree que la hepcidina humana, un polipéptido expresado predominantemente por hepatocitos, es una proteína reguladora de hierro importante que regula negativamente la absorción de hierro en el intestino, el reciclaje de hierro por macrófagos y la movilización de hierro a partir de reservas de hierro hepáticos. Parece que la sobreproducción de hepcidina tiene un papel principal en la patofisiología de anemia y/o de anemia de enfermedad crónica.

Actualmente, las terapias adecuadas y eficaces contra la anemia y/o contra la anemia por enfermedad crónica son limitadas. Específicamente, la administración de eritropoyetina es eficaz en solo aproximadamente el 50 % de todos los pacientes y está asociada con efectos secundarios no deseados. Además, las transfusiones no son deseables debido a la contaminación, infección y sobrecarga de hierro.

La hepcidina humana está codificada como un prepropéptido de 84 aminoácidos que contiene una secuencia señal dirigida al retículo endoplasmático N-terminal de 24 aminoácidos típica y una prorregión de 35 aminoácidos con un sitio de escisión de furina consenso seguido inmediatamente por una hormona reguladora de hierro bioactiva Cterminal de 25 aminoácidos (hepcidina-25, SEC ID Nº: 1) . También se sabe que diversas formas truncadas Nterminales de hepcidina, tales como hepcidina-20 (por ejemplo, para seres humanos, aminoácidos 6-25 de la SEC ID Nº: 1) y hepcidina-22 (por ejemplo, para seres humanos, aminoácidos 4-25 de la SEC ID Nº: 1) se forman in vivo. No obstante, se piensa que la hepcidina-25 es la forma más relevante fisiológicamente de hepcidina en seres humanos, si no la única. Las terapias que regulan selectivamente la concentración de hepcidina-25, a diferencia de las formas de precursor o truncadas, son particularmente deseables. En particular, los anticuerpos que se unen selectivamente a la hepcidina-25, a diferencia de las formas de precursor y truncadas, proporcionarían numerosas ventajas en el tratamiento o diagnóstico de trastornos asociados con niveles elevados de hepcidina-25. Por ejemplo, en comparación con anticuerpos de hepcidina no selectivos, los anticuerpos selectivos de hepcidina-25 con afinidad elevada reducirían el riesgo de efectos secundarios y la dosis clínica requerida para el tratamiento eficaz sería inferior debido a que los anticuerpos terapéuticos no se unirían a formas fisiológicamente irrelevantes de hepcidina. Aunque se ha informado previamente de anticuerpos policlonales y monoclonales no humanos de hepcidina (véanse, por ejemplo, las publicaciones de solicitudes de patente de Estados Unidos 2006/0019339, 2007/0224186 y 2008/0213277) , existe todavía en la técnica una gran necesidad de anticuerpos monoclonales que se unan selectivamente a hepcidina-25. Por la tanto, un aspecto de la invención es proporcionar anticuerpos que se unan selectivamente a hepcidina-25 dentro de los aminoácidos 1 a 7, inclusive, de hepcidina-25. Dichos anticuerpos son útiles para aumentar niveles de hierro en suero, recuento de reticulocitos, recuento de glóbulos rojos, hemoglobina y/o hematocrito en un ser humano para el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno tal como anemia.

Adicionalmente, los inmunoensayos existentes para determinar hepcidina no diferencian la hepcidina-25 fisiológicamente relevante, activa, de las especies de hepcidina fisiológicamente no relevantes, inactivas, (véanse, por ejemplo, Kemna, E.H. y col., Haematologica, 93 (1) :90-7 (2008) ; Roe M.A. y col., Br J Nutr., 97:544-9 (2007) ; y Luukkonen S. y Punnonen K., Clin Chem Lab Med., 44:1361-2 (2006) ) . Actualmente, el único procedimiento disponible actualmente para el ensayo selectivo de hepcidina-25 implica una CL/EM (cromatografía líquida/espectroscopia de masas) o procedimientos engorrosos similares que requieren la separación de las diversas formas de hepcidina (véanse, por ejemplo, Gutierrez, J.A. y col., BioTechniques, 38:S13-S17 (2005) , Murphy y col., Blood, 110:1048-54 (2007) , y Kemna, E.H. y col., Clin. Chem., 53:620-8 (2007) ) . Aunque estos ensayos pueden ser precisos y exactos, su complejidad, coste y el alto nivel de experiencia exigido al operador impiden su realización rutinaria. En consecuencia, existe también una gran necesidad de anticuerpos que se unan selectivamente con alta afinidad a hepcidina-25 humana para su aplicación en inmunoensayos para la detección o medición de hepcidina-25. Por lo tanto, otro aspecto de la invención proporciona procedimientos de uso de anticuerpos selectivos de hepcidina25 en inmunoensayos selectivos, sólidos, relativamente sencillos, pero muy sensibles, para la detección y medición de hepcidina-25 en tejidos y fluidos biológicos de mamíferos.

El documento US 2006/0019339 pretende divulgar anticuerpos que se unen a hepcidina y procedimientos de uso de esos anticuerpos.

El documento US 2007/0224186 pretende divulgar anticuerpos que se unen al extremo C-terminal de hepcidina humana y procedimientos de uso de esos anticuerpos.

La presente invención proporciona anticuerpos que se unen selectivamente a hepcidina-25 humana dentro de los aminoácidos 1 a 7, inclusive, de hepcidina-25. En una realización, un anticuerpo de la invención se une selectivamente a un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEC ID Nº: 1, a diferencia de los precursores y polipéptidos truncados relacionados, y comprende seis CDR seleccionadas del grupo que consiste en: (i) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 9, 10, 11, 32, 33 y 34, respectivamente; (ii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 12, 13, 14, 35, 36 y 37, respectivamente; (iii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de 5 aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 45, 13, 14, 35, 36 y 37, respectivamente; (iv) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 12, 13, 14, 38, 36 y 37, respectivamente; (v) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 15, 10, 16, 39, 40 y 41, respectivamente; (vi) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 22, 42, 43 y 44, respectivamente; (vii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 23, 42, 43 y 44, respectivamente; (viii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 24, 25, 23, 42, 43 y 44, respectivamente; (ix) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº:

26, 25, 27, 42, 43 y 44, respectivamente; (x) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 28, 42, 43 y 44, respectivamente; (xi) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 6, 7, 8, 29, 30 y 31 respectivamente; (xii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 17, 18, 19, 42, 43 y 44, respectivamente.

En otra realización, un anticuerpo de la invención se une a un epítope contenido dentro de los aminoácidos 1 a 7, inclusive, de hepcidina-25 humana, es decir, DTHFPIC de SEC ID Nº: 1 o DTNFPIC de hepcidina-25 de roedor (SEC ID Nº: 2 o 3) . Preferentemente, el anticuerpo de la invención comprende un polipéptido de región variable de cadena ligera ("LCVR") y un polipéptido de región variable de cadena pesada ("HCVR") en los que (i) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen la secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEC ID Nº: 48 y 49, respectivamente; 25 (ii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 50 y 51, respectivamente; (iii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal que se une selectivamente a hepcidina-25 humana que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: en donde el anticuerpo comprende seis CDR seleccionadas del grupo que consiste en:

(i) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 9, 10, 11, 32, 33 y 34, respectivamente.

(ii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 12, 13, 14, 35, 36 y 37, respectivamente.

(iii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 45, 13, 14, 35, 36 y 37, respectivamente.

(iv) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 12, 13, 14, 38, 36 y 37, respectivamente.

(v) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 15, 10, 16, 39, 40 y 41, respectivamente.

(vi) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 22, 42, 43 y 44, respectivamente.

(vii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 23, 42, 43 y 44, respectivamente.

(viii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 24, 25, 23, 42, 43 y 44, respectivamente.

(ix) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 27, 42, 43 y 44, respectivamente.

(x) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 28, 42, 43 y 44, respectivamente.

(xi) LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SASSSX1SX2MY (SEC ID Nº: 6) LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos LTSX3LAS (SEC ID Nº: 7) LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos QQWSSX4PPT (SEC ID Nº: 8) HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos GX9SLX10X11X12GX13GX14G (SEC ID Nº: 29) HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos HIWWN X15X16KX17YNTX18LKS (SEC ID Nº: 30) y HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos IX19YYG X20X21X22GFAY (SEC ID Nº: 31) , en la que X1 es V o A, X2 es Y o S, X3 es N o H, X4 es N, G o Y, X9 es F, Y o L, X10 es S o N, X11 es T o S, X12 es Y o P, X13 es I o F, X14 es V o I, X15 es D o G, X16 es A o N; X17es S o Y, X18 es A o T, X19 es G o H, X20 es S o N, X21 es T o S, y X22 es S, A o Y; y

(xii) LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos KSSQSLLYX5NGKTYLT (SEC ID Nº: 17) LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos LVSKLDX6 (SEC ID Nº: 18) LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos X7QGSHFPWX8 (SEC ID Nº: 19) HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos GFAFSSYDMS (SEC ID Nº: 42) , HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos TIISGGTYTYYPDSVKG (SEC ID Nº: 43) y HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos DGYIH (SEC ID Nº: 44) , en la que X5 es S, R o P, X6 es S o P, X7 es V, H, I o F y X8 es T o V.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se une selectivamente a hepcidina-25 humana que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: con una KD entre aproximadamente 50 nM y aproximadamente 800 pM tal como se determina por resonancia de plasmón superficial (SPR) a 25 °C.

3. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde el anticuerpo se une a prohepcidina y a hepcidina-20 humana con una KD que es al menos aproximadamente 10 veces superior a la del anticuerpo que se une a hepcidina-25 humana según se determina por SPR a 25 °C.

4. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el anticuerpo se une a hepcidina-22 humana con una KD superior a aproximadamente 200 nM según se determina por SPR a 25 °C.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 que además se une a las SEC ID Nº: 3 y 2 de hepcidina-25 de ratón y/o de rata, respectivamente, con una KD inferior a aproximadamente 500 nM tal como se determina por SPR a 25°C.

6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, siendo el anticuerpo un fragmento de anticuerpo que comprende la porción de unión a antígeno y conserva su capacidad de unión a antígeno.

7. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 que comprende un polipéptido de región variable de cadena ligera (LCVR) y un polipéptido de región variable de cadena pesada (HCVR) en el que:

(i) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 48 y 49, respectivamente;

(ii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 50 y 51, respectivamente;

(iii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 52 y 51, respectivamente;

(iv) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 53 y 54, respectivamente;

(v) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 55 y 56, respectivamente;

(vi) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 59 y 58, respectivamente;

(vii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 60 y 58, respectivamente;

(viii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 61 y 58, respectivamente;

(ix) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 62 y 58, respectivamente;

(x) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 63 y 58, respectivamente;

(xi) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 46 y 47, respectivamente; o

(xii) los polipéptidos de LCVR y de HCVR tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 57 y 58, respectivamente.

8. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 que comprende una cadena pesada y una cadena ligera que tienen (i) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 67 y 66, respectivamente; (ii) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 69 y 68, respectivamente; (iii) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 69 y 70, respectivamente; (iv) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 72 y 71, respectivamente; (v) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 74 y 73, respectivamente; (vi) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 76 y 77, respectivamente; (vii) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 76 y 78, respectivamente; (viii) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 76 y 79, respectivamente;

(ix) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 76 y 80, respectivamente; (x) las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 76 y 81, respectivamente.

9. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 en combinación con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

10. Un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para su uso en terapia.

11. Un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para su uso en el tratamiento o la prevención de anemia.

12. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para su uso en un procedimiento para aumentar niveles de hierro en suero, recuento de reticulocitos, recuento de glóbulos rojos, hemoglobina y/o hematocrito en un sujeto humano.

13. Un procedimiento para detector proteína hepcidina-25 en una muestra biológica que comprende incubar un anticuerpo que se une selectivamente a hepcidina-25 humana con una muestra biológica en condiciones y durante un tiempo suficiente para permitir que dicho anticuerpo se una a proteína hepcidina-25 y detectar dicha unión, en el que el anticuerpo comprende seis DCR, seleccionadas del grupo que consiste en:

(i) LCDR11, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 22, 42, 43 y 44, respectivamente;

(ii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 27, 42, 43 y 44, respectivamente; y

(iii) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos que se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 23, 42, 43 y 44, respectivamente.

14. Un procedimiento para cuantificar una cantidad de proteína hepcidina-25 en una muestra de tejido o fluido biológico que comprende;

(i) recubrir un soporte sólido con (a) un primer anticuerpo que comprende seis DCR seleccionadas del grupo que consiste en:

(1) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 22, 42, 43 y 44, respectivamente;

(2) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 23, 42, 43 y 44, respectivamente;

(3) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 24, 25, 23, 42, 43 y 44, respectivamente;

(4) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 27, 42, 43 y 44, respectivamente;

(5) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 28, 42, 43 y 44, respectivamente,

o (b) un primer anticuerpo que se une a un epítope contenido dentro de los aminoácidos 5 a 25, inclusive, de la SEC ID Nº: 1;

(ii) aplicar la muestra a dicho soporte sólido recubierto con el anticuerpo;

(iii) retirar la muestra no unida;

(iv) si el primer anticuerpo de la etapa (i) es (a) , aplicar al soporte sólido un segundo anticuerpo que se una a un epítope contenido dentro de los aminoácidso 5 a 25, inclusive, de la SEC ID Nº: 1, o, si el primer anticuerpo de la etapa (i) es (b) , aplicar al soporte sólido un segundo anticuerpo que comprenda seis CDR seleccionadas del grupo que consiste en:

(1) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 22, 42, 43 y 44, respectivamente;

(2) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 20, 21, 23, 42, 43 y 44, respectivamente;

(3) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 24, 25, 23, 42, 43 y 44, respectivamente;

(4) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 27, 42, 43 y 44, respectivamente;

(5) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 y HCDR3, que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 26, 25, 28, 42, 43 y 44, respectivamente;

(v) retirar el segundo anticuerpo no unido; y

(vi) detectar cuantitativa, semicuantitativa o cualitativamente la cantidad de hepcidina-25 unida al segundo anticuerpo en dicha muestra.

15. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que el anticuerpo que se une a un epítope contenido dentro de los anticuerpos 5 a 25, inclusive, de la SEC ID Nº: 1 que comprende una LCVR y una HCVR que tienen las secuencias de aminoácidos tal como se muestran en las SEC ID Nº: 84 y 85.

16. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicacioens 14-15, en el que solo el primer o el segundo anticuerpo está marcado dentro de un resto detectable.

17. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 14-16 en el que dicha detección es indirecta.

18. El procedimiento según una cualquieras de las reivindicaciones 14-17, en el que dicha muestra es sangre, plasma, suero, orina, líquido cefalorraquídeo (CSF) , líquido amniótico, saliva, sudor, líquido ascítico, linfa, líquido

quístico, leche materna, fluido de heridas o derivados de los mismos, y en el que dicha muestra se pone en contacto con dicho anticuerpo en un inmunoensayo enzimático (EIA) , ELISA, ensayo de ELISA de tipo emparedado, radioinmunoensayo, una reacción de precipitación o un inmunoensayo fluorescente.

19. Un kit para detectar o cuantificar hepcidina-25 que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8.

Figura 1

Figura 2

Figura 3

Figura 4

Figura 5