Anticuerpos contra ramp3.

Un anticuerpo aislado capaz de unirse a la proteína 3 modificadora de la actividad del receptor denominado RAMP3 del denominado Receptor de Calcitonina similar al Receptor CRLR cuyo anticuerpo comprende:

I) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1a; y II) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2a.

Anticuerpos contra RAMP3

Campo de la invención

La presente invención se relaciona con anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a una proteína modificadora de la actividad del receptor (RAMP) asociada con el receptor similar al receptor de calcitonina.

Antecedentes de la invención

La familia calcitonina de péptidos actúa a través de los receptores de membrana acoplados a la proteína G (GPCR) . Los genes de los receptores de calcitonina se clonaron. Es homólogo a los GPCR en la familia "B" que típicamente reconoce péptidos reguladores (secretina, glucagones, VIP) . Se identificó un homólogo del receptor de calcitonina, el Receptor Similar al Receptor de Calcitonina (CRLR, además conocido como CL) (461 aa humanos; 463 aa de rata/ratón) y tiene 55% de homología con el receptor de calcitonina (Njuki y otros, Clin. Sci. 85, 385-388 (1993) ; Chang y otros, Neuron 11, 1187-1195 (1993) ; Fluhmann y otros, Biochem.Biophys. Res. Comun. 206, 341347 (1995) ; Kapas y otros, J. Biol. Chem. 270, 25344-25347 (1995) ) .

El CRLR solo no es capaz de transducir una señal en respuesta a la adrenomedulina (AM) , ya que la presencia de una RAMP (Proteina Modificadora de la Actividad del Receptor de calcitonina) se necesita para inducir la especificidad de ligando, unión y activación del CRLR. Las RAMP son una familia de proteínas pequeñas de membrana intrínsecas, con un tamaño previsto de 14, 000-17, 0000 Kd. Las RAMP consisten de aproximadamente 120 aminoácidos con dominios grandes extracelulares de alrededor de 100 aminoácidos; un dominio de extensión único y una región intracelular corta de aproximadamente 10 aminoácidos.

Se demostró que el CRLR puede funcionar ya sea como un receptor CGRP o un receptor AM, dependiendo de qué miembros se expresan de la familia RAMP, las RAMP1-3. Los tres miembros de la familia RAMP, RAMP1, 2 y 3, generan especificidades de ligando diferentes del CRLR de manera que:

Las secuencias RAMP 1, 2 y 3 están disponibles como sigue:

RAMP 1 -Núm. de acceso al GenBank NM_005855

RAMP 2 -Núm. de acceso al GenBank NM_005854; UniGene ID Hs.155106

RAMP 3 -Núm. de acceso al GenBank NM_005856; UniGene ID Hs.25691.

Keleg, S. y otros (2007, Int.J.Cancer:121, 21-32) describe que la adrenomedulina que se une al CRLR se induce por hipoxia y aumenta la invasión celular en el cáncer pancreático.

Los anticuerpos policlonales que se unen a RAMP2 y son útiles en el tratamiento del cáncer se describen en WO2004/060834. Los anticuerpos se produjeron para una región del dominio extracelular RAMP2 que se cree crítica para la unión del CRLR al RAMP2.

WO 2007/045927 se relaciona con agentes que modulan el efecto de una RAMP.

Debido a la alta utilidad potencial que podrían tener en la terapia y el diagnóstico dichos anticuerpos anti-RAMP existe una necesidad además de anticuerpos anti-RAMP.

Los presentes inventores aislaron y caracterizaron además anticuerpos anti-RAMP. Estos anticuerpos demostraron, entre otros, inhibir la proliferación celular del cáncer y son útiles en la prevención del cáncer.

Declaraciones de intención

Se apreciará que la presente invención se proporciona de acuerdo con lo que se define en las reivindicaciones.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención se proporciona en la presente un anticuerpo aislado capaz de

unirse a la proteína 3 modificadora de la actividad del receptor (RAMP3) del CRLR cuyo anticuerpo comprende: i) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido sustancialmente como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1a; y ii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido sustancialmente como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2a.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención se proporciona en la presente un anticuerpo aislado capaz de

unirse a la proteína 3 modificadora de la actividad del receptor (RAMP3) del CRLR cuyo anticuerpo comprende: ii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido sustancialmente como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1b; y ii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido sustancialmente como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2b.

De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona en la presente un anticuerpo aislado capaz de unirse a una proteína modificadora de la actividad del receptor (RAMP) del receptor CRLR cuyo anticuerpo es de IgG. Isotipo IgA o IgM.

En una modalidad el anticuerpo del primer aspecto de la invención es del isotipo IgG. El anticuerpo puede ser de las subclases IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. Preferentemente el anticuerpo es del isotipo IgG1.

En otra modalidad el anticuerpo del primer aspecto de la invención es del isotipo IgA. El anticuerpo puede ser de las subclases IgA1 o IgA2.

En otra modalidad el anticuerpo del primer aspecto de la invención es del isotipo IgM.

El anticuerpo del primer aspecto de la invención puede ser un polipéptido monomérico, dimérico, trimérico, tetramérico o pentamérico.

El anticuerpo puede ser capaz de unirse a RAMP1, RAMP2 o RAMP3. Preferentemente los anticuerpos de la invención son capaces de unirse a RAMP3.

El anticuerpo de la invención puede ser un antagonista o agonista RAMP o potenciador de la actividad de los ligandos naturales o artificiales del receptor.

El anticuerpo de la invención puede funcionar como un antagonista RAMP. Los datos descritos en la presente pueden indicar que el anticuerpo puede inhibir ya sea la interacción entre RAMP y CRLR por un lado o inhibir la interacción entre un complejo RAMP/CRLR asociado y un ligando tal como la adrenomedulina. En una modalidad el anticuerpo es un anticuerpo anti-RAMP3 del isotipo IgM y es un antagonista RAMP. En otra modalidad el anticuerpo es un anticuerpo anti-RAMP3 del isotipo IgG1 y es un antagonista RAMP.

En una modalidad, el anticuerpo de la invención funciona como un agonista RAMP. Los datos descritos en la presente pueden indicar que el anticuerpo puede en una modalidad el anticuerpo es un anticuerpo anti-RAMP3 de isotipo IgG1 y es un agonista RAMP o potenciador RAMP de acción AM.

Un segundo aspecto de la invención proporciona un anticuerpo aislado capaz de unirse a una proteína modificadora de la actividad del receptor (RAMP) del receptor CRLR cuyo anticuerpo comprende un dominio de unión seleccionado del grupo que consiste de:

i) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de ácido nucleico como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1a; ii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de ácido nucleico como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1b; iii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de ácido nucleico como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1c; iv) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de ácido nucleico como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1d; v) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que se hibrida con una molécula de ácido nucleico como la definida anteriormente en (i) , (ii) , (iii) o (iv) ; vi) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que se degenera como resultado del código genético hasta la secuencia de ácido nucleico definida en (i) , (ii) , (iii) , (iv) o (v) .

En un tercer aspecto, la invención proporciona un anticuerpo aislado capaz de unirse a una proteína modificadora de la actividad del receptor (RAMP) del receptor CRLR cuyo anticuerpo comprende un dominio de unión seleccionado del grupo que consiste de:

i) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de ácido nucleico como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2a; ii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de ácido nucleico como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2b; iii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido codificada por una molécula de ácido nucleico que consiste... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado capaz de unirse a la proteína 3 modificadora de la actividad del receptor denominado

RAMP3 del denominado Receptor de Calcitonina similar al Receptor CRLR cuyo anticuerpo comprende: I) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1a; y II) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2a.

2. Un anticuerpo aislado capaz de unirse a la proteína 3 modificadora de la actividad del receptor denominado

RAMP3 del denominado Receptor de Calcitonina similar al Receptor CRLR cuyo anticuerpo comprende: i) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 1b; y ii) un dominio de unión que comprende una secuencia de aminoácido como se representa por una secuencia mostrada en la Figura 2b.

3. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 que comprende una etiqueta funcional.

4. Un anticuerpo como el reivindicado en la reivindicación 3 en donde la etiqueta se selecciona a partir de toxinas, enzimas y radiomarcadores.

5. Un anticuerpo como el reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en medicina.

6. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo como la reivindicada en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un excipiente, diluyente, vehículo, tampón o estabilizador farmacéuticamente aceptable.

7. Una composición farmacéutica como la reivindicada en la reivindicación 6 que comprende adicionalmente un agente activo.

8. Una composición farmacéutica como la reivindicada en la reivindicación 7 en donde el agente activo se selecciona de uno o más agentes quimioterapéuticos, agentes citotóxicos, 5-fluorouracilo, cisplatino, mitomicina C, oxaliplatino, tamoxifeno y fármacos para el alivio del dolor.

9. El uso de un anticuerpo como el reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un tumor.

10. El uso de un anticuerpo como el reivindicado en la reivindicación 9 en donde el tumor es un tumor de la piel, pulmón, mediastino, pericardio, próstata, mama, colon, recto, hígado, páncreas, cerebro, estructuras intracraneales, ojo, testículo, ovario, útero, cuello uterino, riñón, tiroides, vejiga, tracto gastrointestinal, tejido hematológico, huesos o articulaciones.

11. Un ácido nucleico que codifica un anticuerpo como el reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó

2.

12. Un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 11 como se muestra en las Figuras 1a, 1b, 2a ó 2b.

13. Un constructo que comprende al menos un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 11 ó 12.

14. Un constructo como el reivindicado en la reivindicación 13 en donde el constructo se selecciona de un plásmido, vector, casetes de transcripción o expresión.

15. Una célula huésped recombinante que comprende un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 11 ó

12.

16. Una célula huésped recombinante que comprende un constructo de acuerdo con la reivindicación 13 ó 14.

17. Un polipéptido representado por una secuencia mostrada en la Figura 1a, 1b, 2a ó 2b.