Vacunas contra la gripe que incluyen combinaciones de adyuvantes particulados e inmunopotenciadores.

Una composición inmunogénica que comprende:

(i) un antígeno del virus de la gripe que es un virus inactivado y comprende virus completos,

virus fraccionados o antígenos de superficie purificados, o está en forma de virosomas;

(ii) un adyuvante particulado insoluble que comprende una micropartícula preparada a partir de poli(lactida-coglicolida); y

(iii) un inmunopotenciador que es un oligonucleótido inmunoestimulante.

Vacunas contra la gripe que incluyen combinaciones de adyuvantes particulados e inmunopotenciadores Campo técnico La presente invención pertenece al campo de las vacunas adyuvantadas para proteger contra la infección por el virus de la gripe.

Técnica anterior Excepto el producto FLUAD™ (Chiron Vaccines) , que usa el adyuvante de emulsión de aceite en agua MF59 [1], las vacunas contra la gripe actualmente usadas no incluyen en general un adyuvante. Estas vacunas se describen en más detalle en los capítulos 17 y 18 de la referencia 2. Se basan en virus vivos o virus inactivados, y las vacunas inactivadas pueden basarse en virus completos, virus 'fraccionados' o en antígenos de superficie purificados (incluyendo hemaglutinina y neuraminidasa) . La hemaglutinina (HA) es el principal inmunógeno en vacunas contra la gripe inactivadas, y las dosis de vacuna están normalizadas por referencia a niveles de HA, conteniendo las vacunas normalmente aproximadamente 15 μg de HA por cepa.

Por tanto, en un brote de gripe pandémica se necesitará un gran número de dosis de vacuna contra la gripe, pero será difícil aumentar el suministro de vacunas para satisfacer la gran demanda. Por tanto, en vez de producir más antígeno de vacuna, se ha propuesto usar una menor cantidad de antígeno por cepa, y usar un adyuvante para compensar la reducida dosis de antígeno. También se ha propuesto usar el mismo enfoque en periodos interpandémicos, por ejemplo, para permitir mayor cobertura de la población sin aumentar los niveles de fabricación.

Se han sugerido adyuvantes particulados insolubles [3] tales como sales de aluminio [4-7] o micropartículas [8] para mejorar las vacunas contra la gripe. Mientras que estas vacunas adyuvantadas son útiles, quedan posibilidades de mejorar. Por tanto, es un objeto de la invención proporcionar más vacunas contra la gripe adyuvantadas y mejoradas (para uso tanto pandémico como interpandémico) y procedimientos para su preparación.

Divulgación de la invención Se han encontrado vacunas contra la gripe que contienen adyuvantes particulados insolubles para provocar una respuesta de IgG que es principalmente una respuesta de TH2 (IgG1) . Esta respuesta puede desplazarse hacia una respuesta de TH1 (IgG2a) incluyendo inmunopotenciadores en las composiciones. Se ha informado de respuestas de tipo TH1 [9] para mejorar la inmunidad heterosubtípica contra el virus de la gripe. Ventajosamente, también se ha encontrado que los inmunopotenciadores aumentan los títulos de hemaglutinación y los títulos por ELISA de antihemaglutinina.

Por tanto, la invención proporciona una composición inmunogénica que comprende: (i) un antígeno del virus de la gripe; (ii) un adyuvante particulado insoluble; y (iii) un inmunopotenciador, como se define en las reivindicaciones.

La invención también proporciona un procedimiento para preparar una composición inmunogénica que comprende las etapas de combinar: (i) un antígeno del virus de la gripe; (ii) un adyuvante particulado insoluble; y (iii) un inmunopotenciador, como se define en las reivindicaciones.

La invención proporciona un kit que comprende: (i) un primer componente de kit que comprende un antígeno del virus de la gripe; y (ii) un segundo componente de kit que comprende un adyuvante particulado insoluble, en el que tanto (a) el primer componente o el segundo componente incluyen un inmunopotenciador, como (b) el kit incluye un tercer componente de kit que comprende un inmunopotenciador, como se define en las reivindicaciones.

El antígeno del virus de la gripe Las composiciones de la invención incluyen un antígeno del virus de la gripe. El antígeno se preparará normalmente a partir de viriones de la gripe pero, como una alternativa, antígenos tales como la hemaglutinina pueden expresarse en un huésped recombinante (por ejemplo, en una línea celular de insecto usando un vector de baculovirus) y usarse en forma purificada [10, 11]. En general, sin embargo, los antígenos serán de viriones.

El antígeno toma la forma de un virus inactivado. Medios químicos para inactivar un virus incluyen tratamiento con una cantidad eficaz de uno o más de los siguientes agentes: detergentes, formaldehído, formalina, º-propiolactona o luz UV. Medios químicos adicionales para la inactivación incluyen tratamiento con azul de metileno, psoraleno, carboxifulereno (C60) o una combinación de cualquiera de los mismos. Otros procedimientos de inactivación vírica se conocen en la técnica tales como, por ejemplo, etilamina binaria, acetiletilenimina, o irradiación gamma. El producto INFLEXAL™ es una vacuna inactivada de virión completo.

Se usa virus inactivado, y la vacuna puede comprender virión completo, virión fraccionado o antígenos de superficie purificados (incluyendo hemaglutinina y normalmente incluyendo también neuraminidasa) .

Los viriones pueden recogerse de fluidos que contienen virus por diversos procedimientos. Por ejemplo, un procedimiento de purificación puede implicar centrifugación zonal usando una disolución en gradiente de sacarosa lineal que incluye detergente para romper los viriones. Entonces, los antígenos pueden purificarse, después de la dilución opcional, por diafiltración.

Los viriones fraccionados se obtienen tratando viriones con detergentes (por ejemplo, éter etílico, polisorbato 80, desoxicolato, fosfato de tri-N-butilo, Triton X-100, Triton N101, bromuro de cetiltrimetilamonio, Tergitol NP9, etc.) para producir preparaciones de subviriones, incluyendo el procedimiento de fraccionamiento del 'éter de Tween'. Los procedimientos de fraccionamiento del virus de la gripe son muy conocidos en la técnica, por ejemplo, véanse las refs. 12-17, etc. El fraccionamiento del virus se lleva a cabo normalmente rompiendo o fragmentando virus completos, tanto si son infecciosos como no infecciosos, con una concentración de rotura de un agente de fraccionamiento. La rotura produce una solubilización completa o parcial de las proteínas del virus, alterando la integridad del virus. Los agentes de fraccionamiento preferidos son tensioactivos no iónicos e iónicos (por ejemplo, catiónicos) , por ejemplo, alquilglucósidos, alquiltioglucósidos, azúcares de acilo, sulfobetaínas, betaínas, polioxietilenalquiléteres, N, N-dialquil-glucamidas, Hecameg, alquilfenoxi-polietoxietanoles, compuestos de amonio cuaternario, sarcosilo, CTAB (bromuros de cetiltrimetilamonio) , fosfato de tri-N-butilo, Cetavlon, sales de miristiltrimetilamonio, lipofectina, lipofectamina y DOT-MA, los octil- o nonilfenoxipolioxietanoles (por ejemplo, los tensioactivos de Triton tales como Triton X-100 o Triton N101) , ésteres de polioxietilensorbitano (los tensioactivos Tween) , polioxietilenéteres, polioxietilenésteres, etc. Un procedimiento de fraccionamiento útil usa los efectos consecutivos del desoxicolato de sodio y el formaldehído, y el fraccionamiento puede tener lugar durante la purificación del virión inicial (por ejemplo, en una disolución de gradiente de densidad de sacarosa) . Por tanto, un procedimiento de fraccionamiento puede implicar clarificación del material que contiene los viriones (para eliminar el material de no virión) , concentración de los viriones recogidos (por ejemplo, usando un procedimiento de adsorción, tal como adsorción en CaHPO4) , separación de viriones completos de material de no virión, fraccionamiento de viriones usando un agente de fraccionamiento en una etapa de centrifugación en gradiente de densidad (por ejemplo, usando un gradiente de sacarosa que contiene un agente de fraccionamiento tal como desoxicolato de sodio) , y luego filtración (por ejemplo, ultrafiltración) para eliminar materiales no deseados. Los viriones fraccionados pueden resuspenderse útilmente en solución isotónica de cloruro sódico tamponada con fosfato de sodio. Los productos BEGRIVAC™, FLUARIX™, FLUZONE™ y FLUSHIELD™ son vacunas fraccionadas. Las vacunas de antígenos de superficie purificados comprenden los antígenos de superficie de la gripe hemaglutinina y, normalmente también neuraminidasa. Los procedimientos para preparar estas proteínas en forma purificada son muy conocidos en la técnica. Los productos FLUVIRIN™, AGRIPPAL™ y INFLUVAC™ son vacunas de subunidad.

Los antígenos de la gripe también pueden presentarse en forma de virosomas [18].

El virus de la gripe puede ser atenuado. El virus de la gripe puede ser sensible a la temperatura. El virus de la gripe puede adaptarse al frío. Estas tres posibilidades se aplican en particular a virus vivos.

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1. Una composición inmunogénica que comprende: (i) un antígeno del virus de la gripe que es un virus inactivado y comprende virus completos, virus fraccionados o antígenos de superficie purificados, o está en forma de virosomas;

(ii) un adyuvante particulado insoluble que comprende una micropartícula preparada a partir de poli (lactida-co5 glicolida) ; y (iii) un inmunopotenciador que es un oligonucleótido inmunoestimulante.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que el antígeno del virus de la gripe es de un subtipo del virus de la gripe A H1, H2, H3, H5, H7 o H9.

3. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que el antígeno del virus de la gripe se prepara a partir de un virus de la gripe cultivado en huevos.

10 4. La composición de una cualquiera de la reivindicación 1 a 2, en la que la composición está libre de albúmina de huevo, ovomucoide y ADN de pollo.

5. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición contiene entre 0, 1 y 20 μg de hemaglutinina por cepa vírica.

6. Un procedimiento para preparar una composición inmunogénica que comprende las etapas de combinar: (i) un

antígeno del virus de la gripe que es un virus inactivado; comprende virus completos, virus fraccionados o antígenos de superficie purificados; o está en forma de virosomas; (ii) un adyuvante particulado insoluble que comprende una micropartícula preparada a partir de poli (lactida-co-glicolida) ; y (iii) un inmunopotenciador que es un oligonucleótido inmunoestimulante.

7. Un kit que comprende: (i) un primer componente de kit que comprende un antígeno del virus de la gripe que es un virus inactivado; comprende virus completos, virus fraccionados o antígenos de superficie purificados; o está en forma de virosomas; y (ii) un segundo componente de kit que comprende un adyuvante particulado insoluble que comprende una micropartícula preparada a partir de poli (lactida-co-glicolida) , en el que tanto (a) el primer componente como el segundo componente incluyen un inmunopotenciador que es un oligonucleótido inmunoestimulante, o (b) el kit incluye un tercer componente de kit que comprende un inmunopotenciador que es un oligonucleótido inmunoestimulante.